2019年成都市种禽场禽流感免疫抗体水平分析

向晓雪，周潇潇，肖金鹏，李敏，李俐睿，岳建国*

（1.四川省邛崃市种子管理站，四川 邛崃 611530；2.四川省成都市动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041）

目前，成都市的种禽场共有9个，为了解本市种禽场2019 年前三个季度禽流感疫苗的免疫效果，成都市动物疫病预防控制中心选取了成都市4 个区（县）的4 个不同规模的种禽场，采集禽血清样品进行免疫抗体检测，以对禽流感疫苗的免疫保护力进行科学评估。

1 材料与方法

1.1 样品来源 根据种禽场规模和地理位置，笔者对成都市的4 个种禽场进行采样。其中，金堂种鸡场：约3万羽；崇州种鸡场：约10.6万羽；彭州种鸡场：约20 万羽；大邑种鸭场：约20 万羽。采样量均为每场30份/月，连续采样3个季度。

1.2 试验材料

1.2.1 主要仪器 96孔110°V型血凝板，Eppendorf Xplorer移液器，振荡器。

1.2.2 主要试剂 H5N1Re-8 抗原（批号：2018005）、H7N9 抗原（批号：2018001），H7 亚型阳性血清（批号：2018001）、H5 亚型阳性血清（批号：2018001），均购于哈尔滨维科生物技术开发公司；PBS液，购自Biosharp公司；EDTA真空采血管；1%鸡红细胞悬液。

1.3 试验方法

1.3.1 1%鸡红细胞悬液配制 取3支EDTA真空采血管，选择3只SPF公鸡各采血2 mL，转移至装有PBS液的离心管中混匀。将离心管2 500 r/min离心5 min，弃上清液，加入PBS 液，再重复洗涤2次，最后一次用移液器移去上清液和红细胞上层的薄膜。吸取1 mL 鸡红细胞移至装有99 mL PBS液的锥形瓶中，混匀制成1%红细胞悬液，4 ℃保存。

1.3.2 血凝（HA）试验 严格按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936-2003）操作步骤进行。

结果判定：将血凝板倾斜45°，观察红细胞的泪滴状流淌情况。完全血凝的抗原最高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。取3次血凝结果的平均值作为抗原效价。

1.3.3 血凝抑制（HI）试验 严格按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936-2003）操作步骤进行。

根据1.3.2 血凝试验结果配制4HAU 抗原。如血凝效价为9log2，则4HAU为7log2，即4HAU抗原的稀释倍数为1∶27。

结果判定：以完全抑制4HAU 抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。试验结果成立条件：阴性对照血清滴度≤2log2，阳性对照血清误差在1个滴度范围内。HI价≤3log2判定HI试验为合格；HI价≥4log2判为阳性。

2 结果

将各场测得的每个季度中各月的抗体水平检测结果（取平均值）绘制成图表（图1～图4）。

图1 金堂种鸡场2019年1～3季度H7N9和H5N1Re-8抗体水平及其变化

图2 崇州种鸡场2019年1～3季度H7N9和H5N1Re-8抗体水平及其变化

图3 彭州种鸡场2019年1～3季度H7N9和H5N1Re-8抗体水平及其变化

图4 大邑种鸭场2019年1～3季度H7N9和H5N1Re-8抗体水平及其变化

由图1可知，金堂种鸡场2019年一、二、三季度的H7N9 抗体水平和H5N1Re-8 抗体水平均为100%（90/90、90/90、90/90 和90/90、90/90、90/90）。可见该场的两种抗体水平比较稳定，抗体免疫保护效果良好。

而崇州种鸡场2019年一、二、三季度的H7N9抗体水平由100%（90/90）小幅降至98.89%（89/90），再小幅降至97.41%（85/90），总体免疫水平仍然较高。H5N1Re-8 抗体水平由96.67%（87/90）先降至92.22%（83/90）再升至100%（90/90），可见H5N1Re-8抗体免疫保护效果仍较好（见图2）。

同样，由图3 可知，彭州种鸡场2019 年一、二、三季度的H7N9抗体水平由91.11%（82/90）上升至100%（90/90）并保持稳定，其保护效果有所提高；H5N1Re-8 抗体水平稳定保持在100%（90/90），可见其抗体免疫保护效果良好。

对于大邑种鸭场，2019 年一、二、三季度的H7N9 抗体水平稳定保持在100%（90/90）；H5N1Re-8 抗体水平却由95.56%（86/90）大幅下降至60%（54/90），乃至58.89%（53/90），表明其抗体免疫保护效果较差（见图4）。

3 讨论

3.1 禽流感疫苗免疫的必要性 禽流感是一种病毒性传染病，禽致病后的主要临床症状为头部肿胀、头颈震颤、呼吸困难和角弓反张［1］。从2003年由东南亚传播到中国的H5亚型高致病性禽流感［2］，到2017 年高致病性H7N9 疫情暴发［3］，禽流感已给我国养禽业造成了重大的经济损失。为有效控制疫情，我国紧急启用了包含H5N1Re-8 株和H7N9 H7-Re1 株两个疫苗株的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗。由于禽流感亚型极多，且各亚型间的保护效果极低，因此，及时根据实际情况更新换代禽流感疫苗，对禽流感预防具有重要意义。

3.2 全国及四川禽流感疫苗的免疫抗体水平 关于全国禽流感免疫抗体水平，根据兽医公报公布的数据［4-10］，2019 年全国前三季度鸡、鸭的H5 亚型抗体平均免疫合格率分别为鸡：94.46%、93.87%、93.91%；鸭：91.82%、91.43%、87.01%。全国前三季度鸡、鸭的H7N9 抗体平均免疫合格率为鸡：94.36%、94.9%、95.49%；鸭：90.37%、92.77、90.9%。由此可见，全国范围内鸡、鸭的H5及H7N9 的免疫效果良好，且鸡的免疫合格率均高于同季度鸭的免疫合格率。

相较于全国禽流感免疫抗体平均水平，四川省同期鸡、鸭的H5 及H7N9 免疫效果均较好，每个季度抗体平均免疫合格率均高于90%。其中H5亚型抗体平均免疫合格率在90%～97%之间，H7N9 抗体平均免疫合格率在91%～97%之间。鸡的免疫合格率均高于同季度鸭的免疫合格率，与全国检测结果一致。

3.3 本次检测情况分析与建议 本次检测的四个种禽场的禽血清抗体水平普遍较好。其中种鸡场H5N1Re-8 和H7N9 的免疫抗体合格率在小范围内波动，但均高于90%。金堂种鸡场虽规模不如其他三个禽场大，但免疫程序科学合理，两种免疫抗体合格率均稳定在100%，疫苗免疫保护力良好。崇州种鸡场H5N1Re-8免疫抗体合格率先降低后上升，而H7N9 免疫抗体合格率逐渐下降，应注意及时补免。彭州种鸡场H5N1Re-8免疫抗体合格率稳定在100%，H7N9免疫抗体合格率第一季度为91%，由于及时补免，抗体水平又稳定在100%。大邑种鸭场H7N9 免疫抗体合格率一直稳定在100%，但H5N1Re-8免疫抗体合格率在第二季度出现大幅下降，第三季度继续小幅下降，对其鸭血清使用新毒株检测试剂检测，结果显示H5N1Re-11 株和Re-12 株的免疫抗体合格率均为100%，因此免疫抗体水平下降是疫苗免疫毒株由H5N1Re-11 株和Re-12 株更替为H5N1Re-8 株所致。从四个种禽场的H5N1Re-8和H7N9 免疫抗体合格率可以看出，二价疫苗（H5+H7）能够提高对种禽的预防保护。因此，种禽场应重视禽流感的预防，制定科学合理的免疫程序，特别是在出现抗体水平下降时，需及时进行补免。

4 小结

总之，无论是种禽场还是其他禽场，都应按照国家免疫计划，对禽进行科学合理的免疫，加强血清抗体水平的监测，掌控好疫苗的免疫应答周期和抗体水平的衰减期，根据禽场实际需要，对禽及时补免；了解国家的禽病免疫政策，及时更新换代禽病疫苗。除此之外，还应做好禽场的生物安全工作，进出养殖区域做好消毒工作，将禽病传染源挡在场外。对于疑似患病禽只，应秉承“早、快、严、小”的方针，按照法定程序进行处理。