关于加强生物制品生产中胰酶质量控制的思考

张兵 董娟丽 杨江滨

【摘  要】在现代科技领域发展中，促进了我国生物制品水平的提升，而胰酶作为生物制品生产中的重要原料，对生物制品的生产质量起到决定性影响。对于细胞培养通常使用胰酶消化细胞，但是在胰酶制备过程中可能存在病毒污染的风险，给生物制品生产带来一定的风险，为此，积极探索胰酶质量控制技术具有重要意义。

【关键词】生物制品;胰酶质量;控制措施

引言：

胰酶作为丝氨酸蛋白酶群体中的重要成员，其属于肽链内切酶种类，在细胞培养中，胰酶具有分解细胞糖蛋白和黏蛋白的作用，可以实现细胞分离，并且能够和培养液充分接触，更有助于培养。对于细胞之间的蛋白质来说，只有是由于细胞分泌产生的，一般分布于细胞和细胞之间，同时也存在与细胞与培养皿表面，从而构建细胞骨架，实现细胞黏附效果。胰蛋白酶的活性通常可以通过酪蛋白的降解能力在表现，一般分为1：125和1：250两类，意思是一份胰酶可以分解并分裂125份酪蛋白以及250份酪蛋白。

胰酶对细胞的分解能力与其浓度、温度以及时间都有着直接关联，而胰酶在分解不同细胞时，其分解能力也存在一定的差异，一般采用胰酶浓度为0.25%进行分解。胰蛋白酶抑制因子包括培养基内的钙镁离子和牛血清蛋白。这些因子能够很好的抑制胰酶活性，减轻胰酶附着因子的功效。所以，可以在胰酶溶液中加入EDTA来提高胰酶活性。

1 胰酶对外源因子的污染风险

对于胰酶来说，通常是利用动物胰脏渗出液制备而来的，常见的制备原料为猪胰脏和牛胰脏等等。但是在使用牛胰脏进行胰酶制备时，还要重点考虑牛病毒的污染问题。所以，在进行生物制品中，通常我们都会选择猪胰脏来制备胰酶。但是据调查显示，现如今的猪携带病毒数量也多达80余种，可以与人类同宿的病种也超过60余种，此外，还有一些病毒来源是以猪为中间体进行传播，从而也会对人造成感染。目前，我国检测技术水平不断提升，猪通过外源因子的携带也逐渐被检测出来。在利用猪胰脏进行胰酶制备时，虽然采用科学的工艺进行处理，但是由于可携带的病毒种类众多，因此在制备胰酶时仍然会携带一些外源因子，对生物制品安全带来一定的污染风险。

2 生物制品生产中胰酶对质量的影响

对于生物制品在生产过程中，当有外源因子出现时，就会对生物制品产生严重的變质影响，同时也很难应用普通工艺进行消除。尤其是对于未经灭活处理和纯化的减毒活疫苗来说，极易引然外源因子的携带，从而对生物制品造成严重的影响。此外，由于现阶段的检测技术水平有限，对于生产工艺中间的产品以及产品外源因子检测仍旧存在一定的困难。所以，胰酶的质量对生物制品的安全产生极大的影响。现阶段，由于生产过程中使用胰酶而导致生物制品生产中引发外源因子污染的现象比比皆是，究其根本是由于病毒序列污染对胰酶制备的病毒疫苗造成影响。

3 生物制品生产中胰酶质量控制措施

3.1提高胰酶病毒外源因子检查力度

为了做好胰酶质量的有效控制，首先要加强外源因子病毒和内源性病毒的质量把控。随着WHO与FDA等组织对外源因子检测技术的不断优化，提高了对胰酶特性外源因子污染的检查种类，同时也有效的排除了潜在的外源因子污染风险。对于病毒外源因子的检查主要包括特性外源因子检查以及非特异性外源因子检查。对于非特异性外源因子污染检查来说，一般采用的方法普遍对具有某种特性病毒的筛查，而特异性外源因子污染检查主要是对特定的病毒污染进行筛查。相比于非特异性外源因子污染检查来说，特异性外源因子具有更高的灵活度与准确度。

据调查分析，我国在胰酶特异性外源因子污染检测时与其他发达国家仍然存在着一定的差距，而国外许多国家都采用多种特异性外源因子污染检查手段，尤其是对于高污染风险的情况下，能够实现对人体具有危害的病毒准确检查，有效降低胰酶外源因子污染的风险，同时提高胰酶使用的可靠性，保障生物制品生产安全。所以，我国仍然需要不断探索更加完善的外源因子病毒检测技术，全面丰富特异性病毒检测种类，从而与国际检测标准持平。

3.2构建外源因子检测方法

为了更好地控制胰酶外源因子污染，还可以构建良好的外源因子检测方法，当前流行的检测方法包括免疫荧光抗体法与聚合酶链反应法，这两种方法都可以实现特性外源因子病毒污染检测。通过免疫荧光抗体法能够将供试品在敏感系统内培养，同时加入荧光标记，实现适当的抗体检测。利用免疫荧光抗体法可以直接检测出供试品的污染外源因子。聚合酶链反应法虽然具有较高的检测灵敏度，但是如果检测结果呈现阳性，那么仍然需要对检测信号进行确认。

3.3构建完善的病毒灭活工艺

尽管我们对胰酶外源因子污染检测不断优化，但是由于技术水平存在一定的局限性，导致胰酶中仍然存在严重的外源因子污染风险。在进行胰酶的制备过程中，必须结合相关规定，通过先进的病毒灭活工艺，有效的杀死灭活或者去除已知外源因子，有效防止胰酶外源因子污染。现阶段，对于胰酶的制备工艺厂常常采用加热法或者γ射线进行病毒灭活，但是在病毒检测中也会影响胰酶活性。所以，在保障病毒灭活的同时，也要最大程度地减少对胰酶活性的影响，提高病毒灭活工艺。

4 结束语

综上所述，胰酶质量对生物制品生产具有重要的影响，作为动物来源的胰蛋白酶，仅凭终产品的检定远不能达到对胰酶的质量控制。所以，必须制定良好的胰酶质量控制手段，积极引入先进的胰酶污染检测技术，从而有效地控制胰酶污染外源因子病毒检测效果，保障生物制品生产质量。

参考文献：

[1]程宝鸾. 动物细胞培养技术[M]. 广东广州：中山大学出版社，2006：48.

[2]国家药典委员会. 中华人民共和国药典（三部）[S]. 北京：中国医药科技出版社，2020：15.

（作者单位：石药集团巨石生物制药有限公司）