供港水产品及其制品中单核细胞增生李斯特氏菌的鉴定分析

郑启捷 吉宇恒 冯超华

摘 要：为保障香港市民的食品安全，避免发生食品安全事故。从中山市供港水产品及其制品中抽取15个品类39个批次样品进行单核细胞增生李斯特氏菌鉴定分析，检出阳性样品1个，检出率为2.6%。

关键词：水产品;单核细胞增生李斯特氏菌;食品安全

Abstract：To protect the food safety of Hong Kong citizens and avoid food safety accidents.Identification and analysis of listeria monocytogenes were carried out on 39 batches of samples from 15 categories of aquatic products and products supplied to Hong Kong in zhongshan city. One positive sample was detected with a detection rate of 2.6%.

Key words：Aquatic products; Listeria monocytogenes; Food safety

单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes，LM）简称单增李斯特菌，肠杆菌科，革兰氏阳性杆菌，是一种公认的人畜共患食源性致病菌。人类感染后主要临床表现为败血症、脑膜炎、单核细胞增多、孕妇流产和死胎等[1]。单核细胞增生李斯特氏菌广泛存在于自然界中，在食品中繁殖温度在1～45 ℃，是冷藏食品中威胁人类健康的主要致病菌之一，常规冷藏并不影响其繁殖，所以含该菌的食品冷藏时间越长，其危险性越大[2]。

香港因受地域限制，自然资源匮乏，农产品不能自给自足。广东省是供港食品主要来源地，其中冰鲜水产品占全国供港份额的75%[3]。而中山市东隔珠江口与香港相望，是香港水产食品的主要供给地。本实验对中山市供港的39个批次水产品及其制品进行单增生李斯特氏菌定性检测，鉴定结果及分析如下。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

材料。中山市供港的水产品及其制品共39个批次;LB1，LB2李氏增菌肉汤;TSA-YE琼脂;木糖;鼠李糖（北京陆桥技术股份有限公司）;PALCAM琼脂;李斯特菌显色培养基-OXOID。

仪器。VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪（法国梅里埃公司）;恒温培养箱（德国美墨尔特公司）;显微镜（德国蔡司公司）;均质器（英国Seward公司）

1.2 方法步骤

1.2.1 检验方法

严格按照GB 4789.30-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》进行检测[4]。

1.2.2 检验步骤

（1）增菌培养。将样品编号为1～39号，各称取25 g，放入含有225 mL LB1增菌液的均质袋，置于均质器连续均质2 min。于30 ℃培养24 h后，移取0.1 mL转种于含有10 mL LB2增菌液的试管中，于30 ℃培养24 h。

（2）分离纯化与初筛。用LB2二次增菌液分别划线接种于李斯特菌显色平板和PALCAM琼脂平板，于36 ℃倒置培养48 h。选取在PALCAM琼脂平板上有棕黑色水解圈的小型灰绿色圆形菌落;在李斯特菌显色平板周围有透明圈的蓝色圆形菌落。每个样品在上述平板上选取5个典型或可疑菌落，分别接种木糖、鼠李糖发酵管，于30 ℃培养24 h;同时在TSA-YE琼脂平板上划线接种，于30 ℃培养24 h。然后选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定。

（3）鉴定。对初筛后的纯培养物进行革兰氏染色，镜检确定为革兰氏阳性短杆菌后，使用VITEK2进行鉴定。

2 结果与分析

2.1 检验结果

检出可疑样品2个，即10号和28号，将从10号、28号样品中选取的5个典型菌落或可疑菌落编为①～⑤、⑥～⑩，具体初筛鉴定记录见表1。

2.2 讨论分析

在本次39批次样品中，检出阳性样品1个，检出率为2.6%。详见图1。在日常监测中，英诺克李斯特氏菌是最易引起单增李斯特氏菌的误判。在增菌过程中，后者的生长速度远比前者慢，若培养时间不足，就难以从选择性增菌肉汤中分离出单增生李斯特氏菌[3]。在平板划线分离时，两者在PALCAM琼脂平板上的典型菌落相似;在李斯特菌显色平板上均为蓝色圆形菌落，单增生李斯特氏菌的菌落周围有透明圈，而英诺克李斯特氏菌的菌落则无。若培养时间不足，单增生李斯特氏菌菌落產生的透明圈不明显。所以针对可疑菌落需要适当延长培养时间再进行分离和鉴定，避免出现假阴性结果。本批样品还需符合香港食物安全中心食品微生物含量指引，在25 g样本中有检出单核细胞增生李斯特氏菌即视为不满意样本，表示可能危及健康及不可供人食用[5]。

3 结论

针对本次结果，建议水产品加工生产企业进一步加强消毒灭菌，改良工艺。只有从生产到流通再到消费逐层把好关，才能保证食品安全。生产企业应不断改进生产工艺，避免发生污染，并配合政府部门的检查监督，消费者亦应选择正规渠道购买食品，生鲜食品需要彻底煮熟后食用。保障食品安全仍然任重而道远。

参考文献：

[1]Corr S C，ONeill L A J.Listeria monocytogenes infection in the face of innate immunity[J].Cellular microbiology，2009，11（5）：703-709.

[2]于 兵，麻丽丹，张 勇.水产品中单核细胞增生李斯特氏菌检验研究[J].食品科学，2004（1）：139-141.

[3]李 琳，文晓巍，顾丽婷.粤港农产品供应链质量安全监管技术研究[J].科技管理研究.2016，36（16）：119-123.

[4]国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局.GB 4789.30-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验[S].北京：中国标准出版社，2016.

[5]香港食物安全中心 食品微生物含量指引（2014版）[EB/OL].（2018-08-14）[2020-02-01].http：//www.gtcim.com/index.php？c=msg&id=660%26.