医药院校高效液相色谱的管理研究

何树华 陈御珍 郑明彬 陈铭祥＊

高效液相色谱法是仪器分析的一种重要方法[1]，是医药院校中医学类、药学类及其相关专业必需的实验课内容，是实践性操作性专业性很强的一种分析方法，在教学和科研方面为培养技能型医药专才发挥着重要作用。高效液相色谱适用于分析受热不稳定易分解的、高沸点、不易挥发的、分子量较大、不同极性的天然和合成有机化合物，应用范围十分广泛，具有高效率、高分辨率、高灵敏度、高速度的特点。而且，仪器十分昂贵，并要经常维护，因而，对于高效液相的管理提出了很高的要求。

1 制度管理

建立和完善高效液相色谱相关管理制度，使管理制度科学化合理化规范化，在学校和学院层面建立《高效液相色谱使用、维护管理制度》，加强管理。由于使用人员较多，要实行提前预约制度，按照预约时间排队。仪器使用前要熟悉仪器操作规程，不得做与实验无关的参数设置；不得拆卸仪器，有问题要及时汇报。因实验人员使用不当造成的仪器或软件损坏由实验者或其负责人负责尽快维修。实验数据存放建立的文件夹，以实验者名字命名，数据拷贝用专用U 盘，不得擅自在电脑里安装软件，确实需要安装需经过管理者同意。使用者要经过专业的操作培训，合格后方可单独操作仪器。通过规范化的制度管理，不但能提高仪器的使用率，还能延长仪器的寿命。

2 规范化操作管理

进行高效液相色谱实验时，每个环节的操作，直接影响实验的成败，有些失误甚至会造成仪器不同零部件的损坏，因而每个操作都要严谨和细致，因此有必要规范化操作，制定标准的操作流程。以普通的高效液相色谱仪为例，具体步骤要有严格的先后操作顺序：

（1）过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

（2）对抽滤后的流动相进行超声脱气10- 20 分钟。

（3）打开HPLC 工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

（4）进入HPLC 控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

（5）有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual 菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。

（6）调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

（7）设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2～5 分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading- inject 转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

（8）进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

（9）关机时，先关计算机，再关液相色谱。

只有规范具体的操作流程，才能更好地进行分析实验，获得准确真实科学的实验数据，才能更好地维护好高效液相色谱仪器。

3 维护管理

在使用高效液相色谱色谱仪器后一定要做好维护管理，一般来说最好的维护就是经常规范性使用，在操作使用时充分了解仪器的注意事项，做到科学分析合理使用。流动相需采用色谱纯溶剂，水须为超纯水，准备所需的流动相，以满足仪器要求，避免损坏色谱柱;超纯水须当天配当天用；进样或溶剂进入色谱柱前须经彻底的排气，严禁气泡进入色谱柱;流动相进入色谱柱后要检查流路有没漏液，特别是色谱柱的接头；严禁100%水进入反相色谱柱，需有一定的有机溶剂比例；严禁使用没经滤膜过滤的溶剂冲洗色谱柱，避免将互不相溶的溶剂一同进入泵内；流动相需经过滤、除气后方可使用，用适合的0.45μm 滤膜过滤，超声脱气20～30min；待分析的样品必须彻底溶解澄清、过滤，配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm 滤膜过滤，以避免堵塞、损坏色谱柱，所有通过色谱柱的液体须经严格过滤；流动相的比例须逐步过渡，不能跨度太大；流速不论是由慢到快还是由快到慢也须逐步过渡，最大流速一般不超过10ml/min；分析完成后，须及时清洗色谱柱和检测器的比色池，原则上先用流动相冲洗30min，再逐步过渡到100%有机溶剂（甲醇或乙腈）冲洗30min，严禁由一种溶剂马上变换另一种溶剂，酸碱盐类须先由90%水:10%甲醇冲洗30～60min，再逐步过渡到100%甲醇冲洗。长时间不用色谱柱，要冲洗好后，用纯甲醇或乙腈封存普通；C18 柱尽量避免在40℃以上的温度下分析，定期测柱效，有下降，可以用10%异丙醇甲醇冲洗色谱柱。每次实验后要做好登记使用记录，长时间不用时，管理人员应该定期检查高效液相色谱各个部件的状况，做好相关的维护措施。

4 总结

高效液相色谱仪器在医药院校的教学和科研中使用率和利用率很高，本文通过仪器的制度化管理、操作规范化管理和维护管理，使其更好地服务于教学和科研，只有加强各方面的管理，提高使用率延长使用寿命[2]，才能更好地提高教学质量和科研水平，为学校和社会培养创新型技能型高素质医药人才，提高毕业生的就业竞争力。