极早期急性心肌梗死病人ox-LDL水平变化与血管内皮损伤严重程度的相关性研究

陈超雄，唐春仕，罗 娜，江 健

急性心肌梗死(AMI)是常见的心血管疾病，一旦发作会对病人的身心健康带来严重的威胁。急性心肌梗死病人主要临床表现是胸骨发生剧烈疼痛，其特点是发病急、病情发展迅速，且病人具有较高的致残率和死亡率[1]。我国心血管疾病死亡的主要原因是急性心肌梗死，研究数据显示，近年来急性心肌梗死发病的人数逐年上升，且越来越年轻化[2]。因此，早诊断、早治疗对急性心肌梗死病人尤为重要，可以显著提高病人的预后水平。目前临床上检测心肌梗死的常规手段是心电图检测，约30%的心肌梗死病人没有胸骨疼痛的典型症状，况且心肌梗死病人特征性ST段改变只有在病人发病时才能依靠心电图检测出来，所以，临床上容易出现漏诊和误诊的现象[3]。有研究显示，氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是由低密度脂蛋白氧化修饰而成，其参与动脉粥样硬化的发生和发展，并且发挥着重要功能；动脉粥样硬化发病后会导致血管内皮细胞损伤，ox-LDL诱发内皮细胞损伤之后促进动脉粥样硬化形成[4]。本研究旨在探讨极早期急性心肌梗死病人ox-LDL的水平变化与血管内皮损伤严重程度的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2015年3月—2017年3月在我院就诊的极早期急性心肌梗死病人100例作为极早期AMI组，其中男65例，女35例；年龄35～75(55.3±15.6)岁。选取同期在我院体检的健康志愿者50名作为对照组，其中男30名，女20名；年龄30～70 (53.5±13.6)岁。两组性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。纳入标准：经心电图检查确诊患有极早期心肌梗死，且在胸痛发作2～4 h后出现心电图变化，心电图均表现为急性损伤阻滞、出现J波、T波高尖、碎裂QRS波、QTc间期延长和缩短[5]。排除标准：患有精神疾病、人格障碍病人；合并恶性肿瘤及肝、肾功能衰竭病人；血管凝血和脑栓塞病人；传染病病人、心律失常和伴有心脏病病人。本研究经我院伦理委员会批准，所有病人均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 采集两组研究对象的清晨空腹静脉血5 mL，经过抗凝处理后，采用离心机以2 500 r/min离心10 min后提取样本的上清液，然后放入-70 ℃的冰箱冷藏待测。

1.2.2 临床指标检测 临床指标主要包括年龄、性别、体质指数(BMI)、吸烟史、高血压史、糖尿病史、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、肌酸酐、促甲状腺激素(TSH)水平等。采用高效液相色谱法，将待测的标本注入色谱柱中，在压力下进行固定相移动，经过固定相与待测标本中不同物质相互作用，物质会依次地离开色谱柱，应用检测器捕捉物质信号，严格按照高效液相色谱仪说明书上的操作步骤进行，对比所测的HDL-C、肌酸酐水平。

1.2.3 血管内皮损伤程度评分 使用彩色多普勒超声对极早期AMI组病人病变血管进行检查，参照黄荣等[6]研究中对血管内皮损伤程度的评分标准并加以适当改动，对极早期AMI组病人血管内皮损伤程度进行评分：血管腔完全闭塞、血流无充盈计1分；血管腔部分闭塞、血流充盈无缺损、血流出现缺损现象、血流频谱表现异常计2分；血管腔有血栓回声且不能闭塞、血流无充盈、无血流平铺计3分。0～3分为轻度损伤，3～6分为中度损伤，6～9分为重度损伤，评分越高说明血管内皮损伤程度越严重。

1.2.4 免疫透射比浊法检测ox-LDL、内皮素(ET)水平 将待测标本放入特定蛋白分析仪中抗原抗体结合，形成复合物，经过一定时间反应观察浊度。当浊度在合适的抗原浓度与抗原之间会形成正比，光线经过混合溶液时会被免疫复合物吸收。复合物量越多，吸收光线越多，利用比浊计测定光的密度值，分析ox-LDL、ET的表达。

1.2.5 循环内皮细胞计数(CEC)检测 采用免疫磁珠分离法检测CEC，取1 mL全血按1∶2比例稀释在0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)-小牛血清(BSA，5%)中，加入20 μL的抗-CD146磁珠抗体，在4 ℃的环境中旋转、轻摇，孵育30 min。之后加入相同体积的缓冲液，在磁架上置2 min。因为磁场作用，和磁珠结合的细胞在管壁上吸附，弃液，只保留磁珠结合的细胞，实验重复3～4次，加入100 μL的缓冲液对磁珠结合的细胞进行重悬。筛选细胞采用10 μg/mL的吖啶橙，在显微镜下观察细胞计数。参考标准：直径20～50 μm，结合磁珠数>5个，细胞呈圆形、卵状以及梭形。

1.2.6 一氧化氮(NO)检测 选取0.1 mL血浆，加入0.6 mL试剂混合均匀，加入0.4 mL双蒸水，之后加入4%氢氧化钠0.1 mL混合，在冰上孵育60 min。12000 r/min离心处理3 min，去除0.6 mL血清，加入0.3%磺胺0.1 mL和0.4 mL双蒸水，在冰上孵育15 min。之后加入6 mol/L萘乙烯二胺盐酸盐0.1 mL，室温放置1 h，加入545 nm进行比色，读取光密度(OD)值。

2 结 果

2.1 对照组与极早期AMI组临床资料比较 对照组与极早期AMI组高血压、糖尿病、吸烟、BMI、HDL-C、肌酸酐水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。极早期AMI组收缩压、舒张压低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；极早期AMI组TSH高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 两组临床资料比较

注：1 mmHg=0.133 kPa。

2.2 对照组与极早期AMI组ox-LDL、ET水平比较 极早期AMI组ox-LDL、ET水平高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

组别例数ox-LDL(μg/L)ET(μmol/L)对照组5014.72±1.4230.45±5.75极早期AMI组10028.75±2.7460.15±6.68t值-33.95-27.31P<0.05<0.05

2.3 对照组和极早期AMI组CEC、NO水平比较 极早期AMI组CEC水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；极早期AMI组NO水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表3。

组别例数CEC(×106/L)NO(μmol/L)对照组502.72±0.4277.45±21.75极早期AMI组1009.75±1.7450.15±16.68t值-28.118.51P<0.05<0.05

2.4 ox-LDL水平与ET、CEC、NO及血管内皮损伤严重程度的相关性分析 Pearson相关性分析显示，ox-LDL与ET水平、CEC呈正相关，与NO水平呈负相关；与血管内皮损伤严重程度呈正相关。详见表4。

表4 ox-LDL水平与ET、CEC、NO及血管内皮损伤严重程度的相关性

3 讨 论

急性心肌梗死发病的主要原因是冠状动脉内粥样斑块破裂以及形成血栓，造成冠状动脉堵塞，导致局部的心肌缺血甚至发生损伤、坏死，临床表现是胸骨后出现剧烈疼痛，病情严重时病人表现出休克、心律失常以及心力衰竭等，心肌酶水平显著升高，心电图也发生变化，一般的影像学检测有助于信息确诊，但是需要的时间长，同时会延误救治时间[7]。因此，标志性物质对于极早期急性心肌梗死病人的早期诊断极为重要。

本研究结果显示，急性心肌梗死病人ox-LDL呈高表达，说明ox-LDL与急性心肌梗死发病有关。ox-LDL损伤内皮细胞的机制：ox-LDL具有较高的细胞毒性，严重损害内皮细胞，抑制血管内皮细胞产生一氧化氮合酶(NOS)，减少NOS含量，对NO分泌量也有减少作用[8]。血管发生收缩，白细胞和血小板会产生黏附和聚集，首先在内膜损伤处发生，会造成内膜异常增生，导致内源性抗动脉粥样硬化机制降低的主要原因是血管平滑肌细胞增殖异常[9]。血管内皮细胞发生损伤后脆弱性增加，强化了黏附性和渗透性，使得低密度脂蛋白(LDL)在内膜中大量沉积，氧化后产生ox-LDL，再次开始恶性循环[10]。ox-LDL会抑制NO产生，主要是通过内皮细胞减少L-精氨酸摄取，因此，ox-LDL可以降低NO水平[11]。有研究显示，培养ox-LDL和内皮细胞24 h后，细胞骨架在内皮细胞参与后产生的微丝遭到严重的破坏，发生断裂、稀疏，分布紊乱。这一作用增加了内皮细胞间隙，提升了通透性，使得脂质更加便利地通过内皮层进入到内皮下，最终导致动脉粥样硬化发生[12]。

TSH受体主要存在的场所是平滑肌细胞，其作用是对平滑肌细胞的增殖有促进作用。本研究结果显示，急性心肌梗死病人TSH水平升高，说明急性心肌梗死发病可能与TSH有关。ET是最强的缩血管物质，对于调节心血管功能具有重要意义。采用TSH对血管内皮细胞进行刺激，通过荧光定量法对内皮功能

相关指标进行检测，结果显示TSH对内皮细胞中ET mRNA以及蛋白水平有上调作用[13-14]。本研究结果显示，急性心肌梗死病人ET呈高表达，ox-LDL与ET呈正相关。说明ox-LDL可以对内皮细胞相关因子产生作用，影响其表达水平。NO是影响血管内皮功能的主要因子，产生的主要途径是经过内皮细胞中NOS催化产生。NO具有脂溶性，可以通过细胞膜的渗透进入到平滑肌细胞，促进平滑肌细胞松弛，对血管有扩张作用，促进血压下降。NO通过细胞膜渗透进入血液以及血小板细胞中，降低血小板活性，对血管内皮的黏附和凝聚有抑制作用，从而对血栓形成和动脉粥样硬化发生有预防效果[15-16]。本研究结果显示，急性心肌梗死病人NO水平降低，CEC水平上升，因此，NO对血栓形成和动脉粥样硬化发生的预防作用显著降低，增加了病人患病风险。可能原因是血管内皮受到损害，其功能表现异常，减少NO分泌量，造成血管内皮损伤脱落，促进CEC的增加[17]。TSH<10 mU/L，血管内皮功能会出现障碍，也会降低NO的生物效能。ox-LDL对内皮细胞NOS基因表达有抑制效果，进而抑制NO的形成，造成内皮功能发生异常[18]。本研究发现，NO、CEC、ET水平的变化可以反映血管内皮的损伤程度。

本研究结果显示，ox-LDL与ET水平、CEC呈正相关，与NO水平呈负相关。ox-LDL对细胞黏附分子具有促进表达作用，可以激活血管内皮细胞，加快炎症细胞浸润与黏附的速度。单核细胞通过大量吞噬脂质对ox-LDL产生作用，形成泡沫细胞，其凋亡会增加粥样斑块脂质释放，一定程度降低斑块的稳定性[19]。ox-LDL和巨噬细胞聚集会生成泡沫细胞，产生炎症反应，造成大量炎症因子释放，如白细胞介素-8(IL-8)、细胞黏附分子、C反应蛋白(CRP)等。内皮功能蛋白损伤和ox-LDL等炎性因子都在急性期心肌梗死中发挥着重要作用[20]，因此，临床治疗急性心肌梗死时要注意对内皮细胞功能的保护以及抗感染治疗。

综上所述，ox-LDL在极早期急性心肌梗死病人中呈高水平，可能会引起病人血管内皮功能紊乱，ox-LDL与ET、CEC水平呈正相关，与NO水平呈负相关，可能会增加极早期急性心肌梗死病人患心血管疾病的风险。