不同月龄广西富凤麻公鸡的繁殖性能比较

施文 杜幸柱 彭腊如 黄振文 谢龙 洪永兴 廖玉英 陆阳清

摘要：【目的】明確不同月龄广西富凤麻公鸡间的繁殖性能差异和相关性，为其种质资源保护提供更好的配种条件，同时为种鸡生产提供参考依据。【方法】以广西富凤麻公鸡为研究对象，从精液品质、睾丸发育状况及血清激素等角度系统研究不同月龄公鸡间的繁殖性能差异和相关性，并使用不同月龄公鸡的精液对母鸡进行人工授精，孵化第9 d照蛋并统计受精率。【结果】5、8和18月龄广西富凤麻公鸡的精液体积和精子密度无显著差异（P>0.05，下同），18月龄广西富凤麻公鸡的精子活力较5和8月龄公鸡的精子活力极显著降低（P<0.01，下同），在精子畸形率方面则表现为18月龄广西富凤麻公鸡较5和8月龄公鸡极显著升高。广西富凤麻公鸡在5～8月龄期间，随着月龄的增长公鸡睾丸的体积和重量均呈上升趋势，睾丸曲细精管直径呈增粗趋势，血清睾酮含量呈上升趋势;但在8～18月龄期间，整体上表现为随着月龄的增长公鸡睾丸的体积和重量呈下降趋势，睾丸曲细精管直径逐渐变细，且血清睾酮含量急剧下降。广西富凤麻公鸡各繁殖性能指标间的相关性分析发现，血清睾酮含量与两侧睾丸总重量、精液体积与精子活力呈中等强度正相关，精子畸形率与血清睾酮含量、精子活力与精子畸形率呈强负相关。不同月龄广西富凤麻公鸡精液的受精率无显著差异。【结论】广西富凤麻公鸡在5～8月龄期间其繁殖性能随着月龄的增长而提高，但在8～18月龄期间整体上表现为繁殖性能随月龄的增长而下降。即8月龄广西富凤麻公鸡睾丸发育状况最佳，生产上可适当提高8月龄公鸡的利用率。

关键词： 广西富凤麻公鸡;月龄;繁殖性能;精子活力;畸形率;受精率;睾酮

中图分类号： S831.89                                  文献标志码： A 文章编号：2095-1191（2020）05-1224-07

Abstract：【Objective】To clarify the difference and correlation of reproductive performance between different age groups of Guangxi Fufeng rooster， so as to provide better reference breeding conditions for the protection of the germplasm resources of Guangxi Fufeng rooster， and provide reference for improving the production of breeders. 【Method】Guangxi Fufeng rooster was as research object. Difference and correlation of reproductive performance between different age groups of Guangxi Fufeng rooster were studied through the perspectives of semen quality， testicular development and serum hormone. The hens were artificially inseminated with the sperm of the corresponding roosters at different month ages， eggs were incubated on the 9th day and fertilization rate was calculated. 【Result】There was no significant difference in semen volume and sperm density among 5-， 8- and 18-month-old Guangxi Fufeng roosters（P>0.05， the same below）， the sperm motility of 18-month-old was extremely lower than that of 5 and 8 months old（P<0.01， the same below）， in terms of sperm abnormality rate， the 18-month-old rooster was extremely higher than that of the 5-month-old rooster and the 8-month-old rooster. During 5- to 8-month-old， testicular volume and weight increased as month age increased， testicu-lar seminiferous tubule diameter enlarged and serum testosterone content increased. During 8- to 18-month-old， as month age increased， testicular volume and weight decreased， testicular seminiferous tubule diameter became thinner and serum testosterone content dropped sharply. Correlation analysis among the reproductive traits showed that testosterone content had moderately intensive positive positive correlation with testicular weight of both sides， semen volume and sperm moti-lity， sperm abnormality rate had intensively negative correlation with testosterone content， sperm motility and sperm abnormality rate. The fertilization rate of sperm from roosters at different month ages had no significant difference. 【Conclusion】The reproductive performance of Guangxi Fufeng roosters increase during the age of 5-8 months as month age increases， but decrease during the age of 8-18 months. The testicles of 8-month-old Guangxi Fufeng roosters are in the best condition， therefore the utilization of 8 month-old roosters can be enhanced in production.

Key words： Guangxi Fufeng rooster; month age; reproductive performance; sperm motility; sperm abnormality rate; fertilization rate; testosterone

Foundation item： National Natural Science Foundation of China（31360329）

0 引言

【研究意义】在家禽生产中常利用人工授精进行繁殖，一羽性成熟公鸡可与多羽性成熟母鸡配合，以获得最高效益，一般繁殖性能良好的公鸡能与30～35羽母鸡配合（赵永军，2009）。已有学者研究影响母鸡产蛋性能的原因并加以改善（张秀荣等，2008;陆海英等，2014），但实际生产上公鸡繁殖性能对生产率的影响更重大。公鸡在繁殖过程中受多种因素影响，常出现采精精液量少或配种受精率低等繁殖性能低下的问题。因此，解决公鸡精液质量问题对提高蛋鸡生产效率及加强种质资源保护具有重要意义。【前人研究进展】至今，有关提高公鸡繁殖性能方法的研究报道较多（谭千洪等，2011;官永胜等，2017;孙丹彤等，2018），但基于公鸡自身年龄和精液质量指标的研究较少。公鸡繁殖性能评定的常用指标有精液品质、受精率及睾丸大小等（韩枫，2005;朱琳等，2019）。其中，精液品质鉴定指标包括精液体积、精液渗透压、精子密度、精子活力、精子畸形率和有效精子数等（王世银，2008;李湛，2010）。赵增成和魏相法（1995）研究发现，公鸡精液的体积与其年龄增长和体质下降有关，同时影响公鸡的繁殖性能。Kelso等（1996）研究报道，家禽的精液品质随着年龄的增长而下降，且该结论在人类精液也得到证实（Kidd et al.，2001）。此外，有研究发现种公鸡体重与精液体积、精液pH和精子畸形率呈显著正相关，而与精子密度和精子活力存在负相关（李维等，2018）。畸形率是衡量精子质量的一个重要指标（周其赵等，2009）。公鸡精液精子畸形率对母鸡的生产性能影响极大，以精子畸形率高的精液进行人工授精时受精率极低，主要是由于精子顶体反应受精子畸形率影响，且畸形率高时精子的运动能力和存活能力明显下降（魏颖等，2019）。【本研究切入点】生产上，通常选择精液量多、精子密度大、精液品质优的公鸡留作种用，一般选用120～300日龄的青年公鸡（刘淑新，2000），但种公鸡的最适淘汰年龄还需进一步研究确定。因此，准确测定公鸡的精液体积、精子活力和精子密度，才能确定人工授精中每羽母鸡的输精量，有效保证或提高受精率（甘建伉等，2012;王坤等，2014），但至今鲜见针对广西富凤麻公鸡繁殖性能的研究报道。【拟解决的关键问题】以广西富凤麻公鸡为研究对象，从精液品质、睾丸发育状况及血清激素等角度系统研究不同月龄公鸡间的繁殖性能差异和相关性，以期为广西富凤麻鸡种质资源保护提供更好的配种条件，同时为种鸡生产提供参考依据。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

选取5、8和18月龄的广西富凤麻公鸡各25羽及2250羽配种母鸡。精液稀释液配方：在500.0 mL蒸馏水中加入7.0 g葡萄糖、1.8 g磷酸二氢钾和7.0 g柠檬酸钠，pH调至7.0～8.0。

1. 2 精液指标及受精率检测

采集公鸡精液并称量精液体积，用稀释液按1∶1稀释后在37 ℃水浴锅中恒温保存，取20 μL稀释精液在显微镜下检测精子活力，统计视野中直线前进运动精子数占总精子数的比例;利用血细胞计数板计算精子密度。稀释精液经伊红染色后，在显微镜下检查计算精子畸形率。受精率试验中，采集5、8和18月龄公鸡精液，以稀释液进行1∶1稀释后，按照1∶30的公母配比进行人工授精，收集鸡蛋，消毒后在孵化室内按程序进行孵化，孵化第9 d照蛋并统计受精率。

1. 3 公鸡血清睾酮含量检测

采集不同月龄公鸡血样，3000 r/min离心10 min，吸取上层血清1.0～2.0 mL，分装至2 mL的离心管中，4 ℃冰箱静置过夜后送至广西第二人民医院，使用ARCHITECT i2000sr全自动免疫发光分析仪通过化学发光微粒子免疫检测法检测血清睾酮含量。

1. 4 公鸡睾丸性状检测

称量公鸡体重后，宰杀解剖并分离睾丸，测量睾丸的长、宽、高和重量。制作睾丸石蜡切片，经HE染色后观察比较不同月龄段公鸡睾丸内曲细精管和各级生殖细胞的发育状态。

1. 5 统计分析

使用GraphPad Prism 5.0对试验数据进行单因子方差分析（One-way ANOVA），并制图。

2 结果与分析

2. 1 广西富凤麻公鸡精液品质分析结果

公鸡精液品质分析结果（图1）表明，5、8和18月龄广西富凤麻公鸡的精液体积和精子密度无显著差异（P>0.05，下同），18月龄广西富凤麻公鸡的精子活力较5和8月龄公鸡的精子活力极显著降低（P<0.01，下同），在精子畸形率方面则表现为18月龄广西富凤麻公鸡较5和8月龄公鸡极显著升高。显微镜下观察到的畸形精子主要有雙头畸形、折颈畸形、卷尾畸形、双尾畸形及原生质滴未脱落畸形（图2）。

2. 2 广西富凤麻公鸡睾丸性状分析结果

分离不同月龄广西富凤麻公鸡睾丸，经测量和称重发现，广西富凤麻公鸡在5～8月龄期间，随着月龄的增长公鸡睾丸的体积和重量均呈上升趋势;但在8～18月龄期间，整体上表现为随着月龄的增长公鸡睾丸的体积和重量呈下降趋势（图3和图4）。

2. 3 广西富凤麻公鸡曲细精管结构观察分析结果

广西富凤麻公鸡睾丸组织切片观察结果（图5）显示，5和8月龄公鸡的曲细精管内各级生殖细胞发育状态良好，各细胞柱间分界明显，细胞柱中的生殖细胞连接紧密，管腔中可见大量精子;18月龄公鸡的曲细精管内各级生殖细胞逐渐退化，各细胞柱间分界模糊，细胞柱中的生殖细胞连接较松散，管腔中空，仅有少数精子。由图6可看出，18月龄广西富凤麻公鸡的睾丸曲细精管直径极显著小于5和8月龄广西富凤麻公鸡。其中，广西富凤麻公鸡在5～8月龄期间，随着月龄的增长公鸡睾丸曲细精管直径呈增粗趋势;在8～18月龄期间则表现为随着月龄的增长公鸡睾丸曲细精管直径逐渐变细。

2. 4 广西富凤麻公鸡血清睾酮含量分析结果

利用化学发光微粒子免疫检测法对广西富凤麻公鸡血清睾酮含量进行检测分析，结果发现8月龄公鸡血清睾酮含量较18月龄公鸡的高，且差异极显著（图7）。广西富凤麻公鸡在5～8月龄期间，随着月龄的增长公鸡血清睾酮含量呈上升趋势;在8～18月龄期间则表现为随着月龄的增长公鸡血清睾酮含量急剧下降。

2. 5 广西富凤麻公鸡各繁殖性能指标间的相关性

广西富凤麻公鸡各繁殖性能指标间的相关性分析结果表明，公鸡血清睾酮含量与两侧睾丸总重量呈中等强度正相关，精子畸形率与血清睾酮含量存在强负相关，精子活力与精子畸形率也呈强负相关，精液体积与精子活力呈中等强度正相关，其他繁殖性能指标间的相关性较弱（图8）。

2. 6 广西富凤麻公鸡精液受精率分析结果

分别采集5、8和18月龄广西富凤麻公鸡的精液，以稀释液进行1∶1稀释后，按照1∶30的公母配比进行人工授精。孵化第9 d对鸡胚受精率的检查结果表明，各月龄组广西富凤麻公鸡精液的受精率无显著差异（图9）。

3 討论

Tabatabaei等（2010）研究表明，随着年龄的增加，公鸡精液的精子密度和精子活力均会下降，而精子畸形率呈上升趋势。该结论在其他动物中也得到广泛验证（Alavi et al.，2007）。本研究结果表明，18月龄广西富凤麻公鸡的精液品质与5和8月龄时相比，其精子活力下降且伴随着精子畸形率升高。相对于8月龄公鸡，18月龄公鸡的采精量也明显下降。此外，随着公鸡月龄的增长，睾丸重量、精细管直径及血清睾酮浓度等均呈下降趋势。Lin等（2006）在公猪繁殖性能的研究中也发现睾丸重量对猪精液品质有明显影响。说明广西富凤麻公鸡的精液品质在8月龄达峰值后，随着月龄的增长，精子质量逐渐下降。Douard等（2003）研究报道，火鸡的精子活力受公鸡年龄的影响显著，32～35和39～42周龄公鸡精液的受精率高于44～47周龄的公鸡。姚静等（2013）研究表明，母猪受孕率也取决于公猪的精子质量。为明确公鸡月龄对受精率的影响，本研究以1∶30的公母配比进行人工授精，结果显示，不同月龄广西富凤麻公鸡的受精率无显著差异，可能是人工授精时本研究使用的公母鸡比例较小，输入的精子量超过受精所需的精子量，或在孵出小鸡后的存活率才出现差异。

睾丸的体积和重量及其曲细精管直径是反映雄性动物生精能力的重要指标（孔令振等，2009）。本研究结果显示，8月龄广西富凤麻公鸡睾丸发育状况最佳，18月龄公鸡的睾丸出现退化，但有研究发现精液的精子密度随年龄增加而升高可能是由于睾丸对内分泌影响的反应受损，导致精子的形成异常加速（Singer et al.，1990）。睾丸内曲细精管的发育状况决定了精子的活性，随着公鸡年龄的增长，曲细精管管腔会变窄且硬化，精子活力下降，生殖细胞变性，间质细胞数量和功能下降，导致精子密度降低（卿素珠等，1998）。睾丸组织石蜡切片经HE染色后观察曲细精管形态并计算曲细精管直径，结果显示，广西富凤麻公鸡在5月龄时其睾丸内平均曲细精管直径为133.01 μm，至8月龄时为145.94 μm，但18月龄时缩小至92.67 μm。5和8月龄广西富凤麻公鸡睾丸内曲细精管直径较大，各级生殖细胞发育良好，管中央可见大量精子;18月龄公鸡睾丸内曲细精管直径缩小，管腔中精子数量明显减少。这与18月龄公鸡精液体积和有效精子数下降的结果相吻合。

在雄性动物中，血清睾酮含量峰值与其年龄和身体状况有关。本研究结果显示，8月龄广西富凤麻公鸡的血清睾酮含量最高，与18月龄公鸡血清睾酮含量差异极显著。血清睾酮含量随年龄变化的原因可能是：首先随着年龄的增长，垂体对促性激素释放激素的反应能力下降，睾丸间质细胞对黄体生成素的反应能力也下降，进而导致下丘脑—垂体—性腺轴的功能下降（马嵘和郑宝钟，2004）;其次，随着年龄的增长，睾丸内间质细胞数目减少（应俊等，2000）。

4 结论

广西富凤麻公鸡在5～8月龄期间其繁殖性能随着月龄的增长而提高，但在8～18月龄期间整体上表现为繁殖性能随月龄的增长而下降。即8月龄广西富凤麻公鸡睾丸发育状况最佳，生产上可适当提高8月龄公鸡的利用率。

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（责任编辑 兰宗宝）