重组鸡干扰素α 注射液对鸡人工感染新城疫病毒效果的研究

刘珂飞，孟铁健，高应瑞，徐 鑫

（天津生机集团股份有限公司 300384）

鸡新城疫是由新城疫病毒引起的一种急性、 高度接触性传染病，发病率和死亡率均很高。 由于新城疫病毒(NDV)毒力增强、基因类型变异，免疫方法不合理，导致ND 屡有发生，由于其早期症状与其他疾病难以区别，即便确诊为新城疫病，紧急接种疫苗也难免造成巨大损失。 干扰素是在机体细胞受到病毒感染后诱导白细胞产生一种广谱抗病毒的糖蛋白物质。 干扰素与细胞表面特殊的受体结合而发挥其抗病毒的DNA 和RNA 合成的作用， 包括对某些酶的诱导作用、 阻止受感染的细胞中病毒的复制、抑制细胞繁殖。 由于IFN-α 广谱的抗病毒活性，目前人用基因工程重组IFN-α 制剂已作为抗病毒生物制品而广泛应用于临床。 我们在前期采用重组鸡干扰素α 注射液抑制鸡胚以及鸡胚成纤维细胞上NDV 试验取得良好效果的基础上，为进一步探讨该药在临床上对新城疫的治效果，特进行本试验[1-2]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病毒

鸡新城疫病毒NDV F48，临床分离经鉴定后保藏。

1.1.2 药品与试剂

重组鸡干扰素α 注射液，1×108IU/mL，天津生机集团股份有限公司制备。

1.1.3 试验动物

1 日龄白羽鸡两批，第一批40 只用于测定鸡新城疫病毒的半数致死量（LD50），第二批100 只，隔离饲养，不接种疫苗。 血清学检验其没有母源抗体后，选取90 只，然后将其随机分成6 组，每组15 只。1 组为干扰素预防组，2 组为干扰素治疗组，3 组为中药预防对照组，4 组为中药治疗组对照组，5 组为攻毒对照组，6组为空白对照组。

1.2 试验方法

1.2.1 半数致死量的测定（LD50）

常规饲养至1 日龄的白羽鸡40 只，每隔三天采血，分离血清，测定血清中新城疫病毒的HI 效价，当检测到HI 变为零时，选取一致的30 只鸡，随机分成6 组，每组5 只，用经鸡胚增殖的新城疫病毒F48 尿囊液进行半数致死量的测定试验，病毒稀释梯度依次为10-1、10-2……10-6，共6 组，胸肌注射：1mL/只，连续观察7d，记录死亡结果，并通过Reed-Muench 法计算其LD50=10-3.32。

1.2.2 接种与给药

试验鸡胸肌注射100LD50 稀释的病毒尿囊液1mL； 试验空白对照组鸡胸肌注射1mL 灭菌生理盐水[3]。 1 组为干扰素预防组为攻毒前3 天肌肉注射干扰素1×106IU/只，连续给药3d。 2 组为干扰素治疗组为，在攻毒后出现明显症状时，肌肉注射干扰素1×106IU/只，连续给药3d。3 组为中药预防对照组，在攻毒前3d 口服中药制剂（清瘟解毒口服液），连续给药3d。 4 组为中药治疗对照组，在攻毒后在攻毒后出现明显症状时，口服中药制剂（清瘟解毒口服液），连续给药3d。5 组为空白对照组，6 组为攻毒对照组。

1.2.3 临床症状观察

观察记录攻毒后各组鸡的临床症状和病理变化， 并比较其严重程度，记录死亡数、存活数及各组攻毒后出现症状所需要的时间(即潜伏期)，攻毒14d 后结束观察。

1.3 判定标准

1.3.1 发病标准：精神沉郁，采食量减少，排黄绿色粪便

1.3.2 临床症状判定

标准轻微：排黄绿色粪便，采食、精神正常；轻者：症状出现时间较迟，精神沉郁，采食量略减；重者：症状出现时间早，昏睡，呆立不动或卧地不起，采食量减少。

2 结果与分析

2.1 鸡新城疫的预防与治疗结果

攻毒后24h，2、4、5 组即排绿色粪便，72h 即发病。 病鸡表现精神沉郁、羽毛松乱、垂头缩颈、翅膀下垂，眼半闭或全闭，似昏睡状态，排黄绿色和黄白色稀便，采食量减少。1、2 组防治率分别为93.3%和86.7%，3、4 组治愈率分别为66.7%和60.0%。 5 组为攻毒对照组72h 后鸡出现症状，至第8d 全部死亡。 空白对照组鸡全部正常，未出现死亡；具体见表1。可见干扰素组与中药对照组相比差异显著(P＜0.05)；干扰素组与攻毒对照组相比差异极显著(P＜0.01)。

2.2 临床症状与剖检情况

2.2.1 临床症状

表1 重组鸡干扰素α 注射液对人工感染ND 的防治效果

攻毒后24h，2、4、5 组即排绿色粪便，72h 即发病。 病鸡表现精神沉郁、羽毛松乱、垂头缩颈、翅膀下垂，眼半闭或全闭，似昏睡状态，排黄绿色和黄白色稀便，采食量减少。 攻毒对照组72h后鸡出现症状，至第8d 全部死亡。 空白对照组鸡全部正常，未出现死亡。

2.2.2 剖检情况

对攻毒后死亡的鸡随时剖检进行观察，可见腺胃乳头充血、喉头、气管有大量黏液等典型的新城疫症状，对治疗和预防组随时剖检进行观察，可见病变较攻毒对照组轻或无病变。

3 结论与讨论

鸡新城疫是由新城疫病毒引起的病毒性疾病。 干扰素具有广谱抗病毒作用， 通过诱导细胞合成抗病毒蛋白而发挥抑制病毒的作用。 抗病毒蛋白包括蛋白激酶、2'，5' -腺嘌呤核苷合成酶以及磷酸二酯酶，这些酶可切割病毒mRNA，抑制病毒蛋白的合成，也可影响病毒的组装与释放，具有抗感染作用。 此外干扰素还能激活NK 细胞和巨噬细胞，增强其对病毒感染细胞的杀伤作用[4]。

从试验结果可以看出， 重组鸡干扰素α 注射液预防组合对照组的保护率均显著高于中药对照组，与攻毒对照组相比差异性极其显著，病鸡的临床症状及病变程度较轻微，尤其是预防组能延缓症状出现的时间和出现死亡的时间， 且保护率可以达到93.3%，这充分说明该药具有较强的抗NDV 的作用。

从试验结果可以看出， 重组鸡干扰素α 注射液预防组合对照组的保护率均显著高于中药对照组，与攻毒对照组相比差异性极其显著，病鸡的临床症状及病变程度较轻微，尤其是预防组能延缓症状出现的时间和出现死亡的时间， 且保护率可以达到93.3%，这充分说明该药具有较强的抗NDV 的作用。

鸡新城疫是由新城疫病毒引起的病毒性疾病。I 干扰素具有广谱抗病毒作用，通过诱导细胞合成抗病毒蛋白而发挥抑制病毒的作用。 抗病毒蛋白包括蛋白激酶、2' ，5' - 腺嘌呤核苷合成酶(2' ，5' -A 合成酶)以及磷酸二酯酶，这些酶可切割病毒mRNA，抑制病毒蛋白的合成，也可影响病毒的组装与释放，具有抗感染作用。 此外干扰素还能激活NK 细胞和巨噬细胞，增强其对病毒感染细胞的杀伤作用。