养殖场关岭牛血液原虫病的诊断与治疗

徐 雨，冯明祥，韦登雄，图 雅，刘 苹，杨和俊，陈永翠

（贵州省关岭县动物疫病预防控制中心 561300）

血液原虫病是牛最常见的寄生虫病之一，大多数通过吸血节肢动物吸血传播，导致牛贫血、消瘦、黄疸、血红蛋白尿，严重危害养牛业的发展。 常见的牛血液原虫有附红细胞体（Eperythrozoon）、 双芽巴贝斯 （B.bigemina）、 巴贝斯牛巴贝斯（Babesia bovis）、牛分歧巴贝斯（B.divergens）、卵形巴贝斯（B.ovata）、环形泰勒虫(Theileria annulata)、瑟氏泰勒虫(T.sergenti)等[1-3]。 本文对某养牛场个别牛消瘦进行寄生虫病检测，并对感染牛进行治疗，降低养殖场损失。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料 2019 年7 月， 关岭县某养牛场63 头关岭牛，其中有3 头不明原因消瘦，抽取消瘦牛的粪便和血液样品。

1.1.2 试剂 尼龙兜、玻片、吉姆萨染色试剂（Solarbio）、染色缸、生物显微镜（麦克迪奥实业集团有限公司）、无菌采血管、2×Taq Master Mix 试剂（康为世纪生物科技有限公司）、琼脂糖（Amresco）、D5000DNA LAdder （Biomiga）、GoldView 核酸染料（Solarbio）、天根DP318-02 血液基因组DNA 提取试剂盒（北京诺博莱德科技有限公司）等。

1.2 方法

1.2.1 虫卵检测

按照尼龙兜集卵法[4]筛选虫卵后，镜检。

1.2.2 染色镜检

血液推片，吉姆萨染色后，镜检[2]。

1.2.3 PCR 检测

根据Genbank 上发表序列设计引物，其中双芽巴贝斯和瑟氏泰勒斯虫引物参照文献[5]，见表1。

表1 引物序列

采用同一PCR 扩增体系：扩增10μL 反应体系，其中2×Taq Master Mix 5μL， 上、 下 游 引 物 各0.2μL，DNA 模 板0.2μL，ddH2O4.4μL。 扩增条件：预变性94℃5min，变性94℃30s，退火60℃30s， 延伸72℃60s，35 个循环， 再延伸72℃10 min，4℃保存；同时设立无引物的空白对照。 取PCR 产物电泳，观察结果。

1.2.4 治疗

用贝尼尔（血虫净）:按每千克体重5mg，用灭菌蒸馏水配成5%溶液，臀部深层注射；间隔48h 后再注射一次，2 周后血液推片镜检。 用0.5%敌百虫喷洒牛体和圈舍，15d 后再次喷洒。

2 实验结果

2.1 虫卵检测

未检测出线虫、绦虫、球虫、吸虫虫卵。

2.2 染色镜检

染色镜检后，箭头指向可见红细胞内含紫色点状，说明有血液原虫感染。

图1 染色镜检结果×1000 倍

2.3 PCR 检测

PCR 电泳结果见图2，扩增出的各条带大小与预期一致，空白对照无条带。 1 号样品双芽巴贝斯 （1800bp）、 牛分歧巴贝斯（250bp）、 瑟氏泰勒斯虫 （800bp） 为阳性，2 号样品附红细胞体（800bp）、双芽巴贝斯（1800bp）、牛分歧巴贝斯（250bp）、瑟氏泰勒斯虫（800bp）为阳性，3 号样品牛分歧巴贝斯（250bp）、（瑟氏泰勒斯虫800bp）为阳性。

2.4 治疗

图2 PCR 电泳结果

图3 染色镜检结果×1000 倍

两周后，血液推片，染色镜检未见虫体，见图3。

3 讨论

本次调查中， 该养殖场定期使用伊维菌素驱虫， 并一直圈养，未发现线虫、绦虫、球虫、吸虫的虫卵。 该场牛大部分无消瘦、黄疸、茶色尿等临床症状，只有3 头牛表现出消瘦症状，抽取血液镜检发现有血液原虫感染，后PCR 鉴定为附红细胞体、双芽巴贝斯、牛分歧巴贝斯和瑟氏泰勒斯虫。 血液镜检未发现附红细胞体和双芽巴贝斯虫感染，推测该场牛饲养良好，群体健壮，抵抗力强，感染程度不高，发病不多，但血液原虫病长期摄取寄主能量，影响宿主生长，一旦遇到天气变化、饲养不善等情况，抵抗力变弱，极有可能大批量发病，用药治疗后，复查未见虫体，证明贝尼尔对血液原虫治疗效果明显。 因此，建议该场因将贝尼尔药物作为定期驱虫药物。