罗翔宇
(禹州市妇幼保健院 检验科,河南 许昌 461670)
阴道炎是女性高发的一种妇科病,患者多因细菌性感染发病,多种细菌均可诱发阴道感染,因此临床治疗女性细菌性阴道炎前需鉴别出感染细菌种类[1]。临床发现念珠菌是细菌性阴道炎的主要致病菌之一,且复发率较高,对患者生活影响较大。细菌培养法是常规诊断细菌性阴道炎的方法,耗时较长,不利于及时治疗。荧光定量PCR是新型PCR检测技术,快速高效[2]。本研究旨在探讨荧光定量PCR在念珠菌性阴道炎诊断中的应用价值。
1.1 一般资料选取2017年8月至2019年8月禹州市妇幼保健院接收的62例疑似阴道炎患者,年龄29~57岁,平均(42.86±7.26)岁,病程3~8个月,平均(5.83±1.24)个月。所有患者均接受阴道分泌物核酸杂交法检测,结果作为金标准。排除真菌感染患者。患者自愿参与本研究并签署知情同意书。本研究经禹州市妇幼保健院医学伦理委员会批准。
1.2 检测方法
1.2.1荧光定量PCR 使用无菌性棉签蘸取患者阴道分泌物,使用美国Bio-Rad伯乐实时荧光定量PCR仪(规格:CFX384 Touch)及其配套的试剂盒、器皿,将患者阴道分泌物和生理盐水混合成1 000 μL,1 500 r·min-1离心15 min,静置10 min后去除上层清液,加入组织裂解液,60 ℃水育15 min,再次1 500 r·min-1离心15 min,取上层清液进行PCR扩增。反应体系:2×蒸馏水55 μL、10×反应缓冲液(北京博尔迈生物科技有限公司)10 μL、4×dNTPs(各1.25 mmol·L-1,由赛默飞世尔科技有限公司提供)16 μL,上海博雅生物技术有限公司提供的DNA模板10 μL,Taq聚合酶0.5 μL。将反应体系配置好后置于实时荧光定量PCR仪上,设置参数:以94 ℃ 60 s;37 ℃ 60 s,72 ℃ 120 s顺序依次进行,循环30次后使用琼脂糖凝胶电泳观察结果,与阳性对照样本和阴性对照样本对比。阳性诊断标准:条带宽度≤1 mm,并在预期碱基范围内,背景无药斑或引物二聚体。在预期碱基范围之外为假阳性。
1.2.2细菌培养法 将采集的患者阴道分泌物置于干净的细菌培养皿中,加入适量的细菌培养液,然后置于细菌培养箱中,温度设置为32 ℃,湿度为50%,培养48 h后使用融智生物科技青岛有限公司提供的微生物鉴定质谱系统(规格:Quan TOFⅠ/Ⅱ)进行细菌鉴定。阳性诊断标准:48 h后器皿内出现典型菌落,鉴定为念珠菌。
1.3 统计学方法采用SPSS 20.0统计软件进行数据处理。计数资料以频数和率(%)表示,组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2.1 检测结果62例患者经阴道分泌物核酸杂交法检测诊断出念珠菌性阴道炎48例,其他类型细菌感染14例,检出率为77.42%;荧光定量PCR检出念珠菌性阴道炎46例,其他类型细菌感染11例,误诊5例,检出率为74.19%;细菌培养法检出念珠菌性阴道炎34例,其他类型细菌感染8例,误诊20例,检出率为54.84%。荧光定量PCR检出率与核酸杂交法诊断检出率比较,差异无统计学意义(χ2=0.176,P=0.675);荧光定量PCR检出率高于细菌培养法,差异有统计学意义(χ2=5.072,P=0.024)。见表1、2。
表1 荧光定量PCR诊断结果(n)
表2 细菌培养法诊断结果(n)
2.2 诊断价值荧光定量PCR检测的灵敏度、特异度、准确性[95.83%(46/48)、78.57%(11/14)、91.94%(57/62)]均高于细菌培养法[70.83%(34/48)、57.14%(8/14)、67.74%(42/62)](均P<0.05)。
念珠菌性阴道炎是临床较常见的一种阴道炎类型,常伴有外阴瘙痒、尿痛、白带增多、分泌物异味等临床症状,对患者生活影响较大[3]。细菌培养法是目前临床运用较为广泛的一种细菌鉴别技术,可以鉴别感染性疾病的菌群种类,但临床耗时较长,往往需要2~3 d才能得出诊断结果,不能满足临床治疗要求。荧光定量PCR诊断技术是由传统PCR技术发展而来的一种新型诊断技术,应用广泛,可对多种病原菌进行诊断,效果较好[4]。
本研究中荧光定量PCR检出率与核酸杂交法诊断检出率相近,荧光定量PCR检出率、灵敏度、特异度、准确性均高于细菌培养法,表明相对比细菌培养法,荧光定量PCR诊断念珠菌性阴道炎效果更好,结果更准确,临床应用价值更高。荧光定量PCR在检测过程中,将荧光基团加入PCR反应体系中,利用荧光信号积累对整个PCR进程进行实时检测,然后与标准曲线进行对比得出检测结果。荧光定量PCR对样本量要求较低,无需过多的样本容量,检测灵敏度、特异度均较高,且检测耗时短,当天即可获得检测结果,从而缩短检测结果等待时间,可及时进行治疗[5]。与传统的PCR技术相比,无PCR后续操作流程,降低产物污染的风险性,同时荧光定量PCR具有数千种细菌的荧光对照谱,对念珠菌的特异度较高;而细菌培养法易受到外部细菌的影响,造成诊断结果误差,对念珠菌的特异度并不高;而对于部分细菌培养法无法进行培养或培养要求较高的特殊菌种,荧光定量PCR检测也提供了新的思路,为临床诊断提供新的诊断方法,临床医生可灵活选择运用。因此,荧光定量PCR的诊断结果较可靠,但对操作人员的素质要求较高,需熟悉各项流程的操作事项[6]。
综上所述,荧光定量PCR诊断念珠菌性阴道炎效果较好,值得临床推广应用。