不同生境、不同生长年续断的川续断皂苷Ⅵ的含量

熊厚溪，徐 荣，石海霞，丁 铃

(毕节医学高等专科学校，贵州 毕节 551700)

续断为川续断科草本植物川续断(DipsacusasperWall.ex Henry)的干燥根，味苦、辛，微温，归肝、肾经，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏的功效，常用于治疗肝肾不足、腰膝酸软、风湿痹痛、跌扑损伤、崩漏等[1]。续断为川产道地药材之一，贵州主产于毕节、兴义、安顺、贵阳、遵义等地。主要生于草丛、路旁、沟边、林缘矿地等潮湿处，野生资源丰富[2]。近10年，市场需求量逐渐增加，野生资源日渐减少。但就目前而言，续断的种植面积较少，研究基础薄弱，来源主要依靠于野生资源。目前，有关续断的研究主要集中在炮制、化学成分、药理作用等方面[3-12]，关于不同生境和不同生长年限的相关研究较少。笔者通过对续断的不同生境、不同生长年限进行采样，测定续断根中川续断皂苷Ⅵ含量，综合分析续断的适宜生长环境和采收时间，为续断资源的合理种植和采收提供参考。

1 材料与方法

1.1 样方设置与样品采集

1.1.1 野生样品 在前期完成续断群落调查基础上，2018年8月15日于贵州织金县少普乡喇叭河村(位于东经105°35′45.73″～105°38′5″，北纬26°33′25″～26°34′15″，海拔1 670～1 840 m)的自然分布区设定样方，每个样方面积2～4 m2，通过记录样方内的续断植株、多度、盖度等，评估重要值划分样方中续断的生境，采集样方中的全部续断植株，带回实验室。

1.1.2 栽培样品 选取毕节市远程民族研究所续断种植基地作为研究对象，基地位于贵州省七星关区朱昌镇(位于东经105°18′57.18″，北纬27°10′37.48″，海拔1 614 m)随机挖取一年生、二年生、多年生续断植株各5株，带回实验室。

1.1.3 鉴定 所采样品均经过毕节医学高等专科学校中药教研室熊厚溪鉴定为川续断科川续断(DipsacusasperWall.ex Henry)的干燥根。将所有续断样本先清洗干净，用烘箱(约50℃)烘至半干，再发汗，当药材断面变绿后，取出，烘干，再粉碎，用于续断药材中川续断皂苷Ⅵ的含量测定。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器 高效液相色谱仪(LC-20AD，日本岛津)、电子分析天平(EL104，梅特勒-托利多仪器有限公司)、超声波清洗器(SK8210HP，上海科导超声仪器有限公司)、电热鼓风干燥箱(101-1AB，天津市泰斯特仪器有限公司)等。

1.2.2 试剂 甲醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)、乙腈(色谱纯，天津市大茂化学试剂厂)、川续断皂苷Ⅵ对照品(批号：111685-201506，中国食品药品检定研究院)。

1.3 测定方法

参照2015版《中国药典》一部续断药材“含量测定”项下的方法进行测定[1]。

1.3.1 色谱条件与适应性 色谱柱：C18(5 μm 4.6×250 mm S/N 4K9705-07)。流动相：流动相A，水；流动相B，乙腈；乙腈与水比例为30∶70。检测条件：检测波长212 nm，柱温30℃，流速1 mL/min。

1.3.2 对照品溶液的制备 取适量川续断皂苷Ⅵ对照品，精密称定，置容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成含川续断皂苷Ⅵ0.153 7 mg/mL的对照品溶液。

1.3.3 供试品溶液的制备 取续断粉末约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率100 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。

1.3.4 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定，根据外标一点法计算各组分含量。测得续断样品共计40份。将各样品峰面积带入下式计算，得样品川续断皂苷Ⅵ含量。

W=AXCRX×2/ARW×1 000×100%

式中，W为川续断皂苷Ⅵ含量；Ax为供试品峰面积；CR为对照品浓度；AR为对照品峰面积；X为稀释因数，W为样品重。

1.4 数据处理

运用SPSS 22.0软件对不同生境、不同生长年限续断根中川续断皂苷Ⅵ的含量进行单因素方差分析。

2 结果与分析

2.1 续断群落生境类型

通过对样方中乔木、灌木、草本植物的数量进行评估，将续断生境划分为5种：乔木林生境、灌木丛生境、杂草丛生境、林缘矿地生境、退耕地。乔木林生境是以乔木为主的植被类型，植株高大，群落郁闭度大，土层厚、湿润，样方中续断生长茂盛，叶片大。灌木林生境是以灌木为主体的植被类型，植株一般高在5 m以下。杂草丛生境一般灌木较少，多见草本类植物，一般以禾本科、毛茛科、玄参科及蕨类植物等为主。林缘矿地生境中植株多生长在路边、田坎等地，一般土层薄、贫瘠，续断叶片枯绿、小。退耕地前几年以种植农作物为主，现土地荒废，生境中也有续断植株生长，多伴生草本类植株，一般以菊科植物为主。

2.2 不同生境下续断根中川续断皂苷Ⅵ的含量

由表1可见，川续断皂苷Ⅵ含量为0.352 3%～1.1651%，平均为0.733 9%。其中，川续断皂苷Ⅵ在林缘矿地生境中的含量最高，为1.165 1%；在退耕地生境中的含量最低，仅0.352 3%；退耕地和乔木林生境中含量无显著差异，杂草丛和乔木林、灌木丛生境中无显著差异。

表1 不同生境下续断中川续断皂苷Ⅵ的多重比较

注：同列小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，下同。2.3不同生长年限续断根中川续断皂苷Ⅵ的含量

由表2可见，二年生续断根中川续断皂苷Ⅵ的含量最高，为1.408 1%；其次为多年生续断根中川续断皂苷Ⅵ的含量，为1.1694%；一年生续断根中川续断皂苷Ⅵ的含量最低，仅0.640 9%，而二年生和多年生续断根中川续断皂苷Ⅵ的含量无显著差异。

表2 不同年限续断中川续断皂苷Ⅵ的多重比较

3 结论与讨论

试验探讨了不同生境环境下续断植株中川续断皂苷Ⅵ含量分布情况，同时探讨了不同生长年限的续断植株中川续断皂苷Ⅵ的含量变化。在5种生境下，续断植株在多个生境中的川续断皂苷Ⅵ含量有明显差异，林缘矿地生境>灌木丛生境>杂草丛生境>乔木林生境>退耕地。其中在林缘矿地生境和退耕地生境中相差3倍，表明川续断皂苷Ⅵ在续断植株生境中具有选择性。林缘矿地生境具有很好的光照，可以为续断叶片提供很好的光合作用，同时林缘矿地续断植株生长环境中土层薄、土壤贫瘠，续断植株只有不断制造次数代谢产物来对抗恶劣的环境。

从续断生长年限中川续断皂苷Ⅵ结果分析来看，一年生与两年以上植株具有显著性差异，而川续断皂苷Ⅵ作为续断的次生代谢产物，受生长年限影响较大。一年生续断植株未抽薹，地下部分生长较缓慢，次生代谢产物累计较少；二年生续断植株中川续断皂苷Ⅵ的含量显著高于一年生植株，而与三年及以上生植株无显著差异。故建议种植续断药材采收时间以两年以上为宜，并结合产量进行综合考虑。