科学防控雨生红球藻的生物敌害

唐淑萍,马 昆,程 贝

(内蒙古兰太实业股份有限公司，内蒙古 阿拉善 750333)

内蒙古兰太实业股份有限公司(以下简称“公司”)拥有120 km2的内陆盐湖(吉兰泰盐湖)，具有丰富的卤水资源。地下水极为丰富。该地干旱少雨，昼夜温差大，全年光照时间长、强度大、年无霜期长，非常适合藻类养殖产业发展。雨生红球藻是一种淡水单胞绿藻，隶属绿藻门,团藻目，红球藻科，红球藻属。该藻能大量累积虾青素而呈现红色，故名红球藻，又称雨生红球藻。红球藻是目前科学界发现的继螺旋藻、小球藻之后，富含营养价值和药用价值的藻类食品。虾青素作为一种最高效的纯天然抗氧化剂，最主要的功能是清除自由基，提高人体抗衰老能力，近年来已成为国际上藻类研究的热点之一。

公司为充分利用现有资源、设施条件，开拓新产品生产，提高企业经济效益，引进宁波象山恒阳水产有限公司开发的雨生红球藻粉生产技术及其选育的“恒阳一号”藻种，开始进行红球藻粉试生产工作。

1 材料与方法

1.1 材料

所选藻种为宁波象山恒阳水产有限公司选育的“恒阳一号”藻种;卤水为来自吉兰太盐湖饱和卤水(25 °Be′);培养池为公司部分玻璃温棚及精养池。

绿色游动细胞光照时间平均10 h，光照强度范围1 000 lx～1 500 lx;红色不动孢子光照时间平均13 h光照强度范围10 000 lx～11 000 lx之间。

玻璃温棚绿色培养藻液温度在17 ℃～31.5 ℃之间，红色培养藻液温度在19 ℃～31 ℃之间。养殖池绿色培养藻液温度在5 ℃～24 ℃之间，红色培养藻液温度在5 ℃～31 ℃之间。

营养盐配方:绿色游动细胞，CO(NH2)250 mg/kg；NaNO3,42 mg/kg；KH2PO4,10 mg/kg；FeCl3,2.5 mg/kg；MnSO4,0.5 mg/kg。红色不动孢子：8‰盐湖卤水替代氯化钠2.5 g/m3；所有营养盐按水体比例一次性加入。

1.2 方法

25×16型血球计数板法计数，每个样计3次，取其平均数，每天计数1次。

2 结果

表1为不同浓度的化学试剂(A：NH4CO3,B:氨水)对红球藻中敌害的影响。

表1 不同浓度的化学试剂对红球藻的影响Tab.1 Effect of different concentrations of chemical reagent on haematococcus

从表1实验可以看出，在大面积养殖过程中，定期对培养池进行消毒，每个培养池专池专用依然有生物敌害的发生，因敌害是原生动物，大量吞噬红球藻，导致培养失败，采取将藻液中加入100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg、400 mg/kg 的NH4CO3及28%氨水的化学试剂灭杀敌害，其灭杀敌害的的同时严重影响红球藻的生存，淡水养殖中人为控制难度大，没有有效的化学试剂，也常常受到单细胞栅藻污染。

经过反复养殖发现，利用1 m2养殖池，用孢子萌发模式，藻种易杂化，最终选择在实验室用固体培育法选取较纯的优级种，逐级扩大培养，使用的藻种均是经过单克隆选育出来，在无菌操作台中由50 mL的三角瓶逐步扩养光生物反应器至温棚8 m2的养殖池，通过这种选育可以确保雨生红球藻藻源的洁净，通过显微镜观察藻种活性好、纯度高。并且这种种源只使用一次，缩短了绿色阶段的生长周期，防止杂藻的污染。

红球藻在绿色培养阶段一个细胞能分裂出2个～16个孢子，将光照强度控制在2 000 lx以内，实验平均密度0.9万个/mL ，藻液盐度 2 °Be′，采用遮阴网遮阴，透光率为10%。待藻密度增加。培养4 d～5 d后，密度达到4万个/mL～5万个/mL，使其进入红色培养期。为积累大量红色虾青素利用盐湖卤水8‰替代氯化钠2.5 g/m3，加快搅动速度，暴晒。该阶段藻形状呈圆形，颜色变化：绿色→绿多红少→红多绿少→红色，不活动，不分裂。经检测红球藻藻粉平均类胡萝卜素含量在1.0%～1.5%之间。2 °Be′盐度红球藻的生长情况见表2。

表2 2 °Be′红球藻的生长情况Tab.2 Growth of haematococcus on 2 °Be′

3 结论

雨生红球藻是一种生活在淡水中的单细胞微藻，在培养的工序中，有重复污染的可能性。因此有人采用玻璃管道培养红球藻，该方法虽然克服了微生物污染的问题，但是培养成本相对提高了。从实验结果可看出，以下几个方面可控制生物敌害。1)可以将藻液盐度调至2 °Be′。即可去除轮虫又不影响藻的生长。2)曝晒可以杀灭来自绿色培养的少部分原生动物敌害，如先后出现的噬藻并影响藻正常生长的喇叭虫、肾形虫、吸虫，避免因使用化学试剂灭杀敌害，影响产品的食用安全性。对于杂藻污染，藻培养时间越长，越容易发生污染。但在经过离心及冷藏后再次萌发，绿色阶段基本上不会有杂藻出现。培养期pH值会随着细胞密度增长而上升，意味着红球藻正处于对数生长期，pH值超过最适合范围7～8时，雨生红球藻生长达到顶峰，随后下降。