牛黄解毒片中甘草酸含量的测定研究

毛 新

（吉林省药品检验所化学室，吉林 长春 130033）

牛黄解毒片具有良好的清热解毒功效，被广泛应用于治疗咽喉肿痛、目赤肿痛、牙龈肿痛、口舌生疮等疾病[1]。但是由于生产厂家众多，也没有形成更准确完善的药品质量监控标准。其中甘草有补脾益气、清热解毒、调和诸药的功效，而甘草酸是其主要的活性成分之一。测定甘草酸的含量可作为评价甘草品质和质量控制的依据。本次研究中采用HPLC测定牛黄解毒片中的甘草酸含量，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

美国沃特士的Waters 2695高效液相色谱仪、2998检测器以及Empower色谱数据工作站，北京赛多利斯的Sartorius BP211D电子天平，USC-7O2超声波清洗机。

1.2 试药

牛黄解毒片由太极集团四川绵阳制药有限公司提供，批号：20180325、20180721、20180916。甘草酸铵对照品由中国食品药品检定研究院提供，批号：110731—201813。醋酸铵和冰醋酸为分析纯，甲醇为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

选择Kromasil Eternity 5-C18(4.6 mm×250 mm×5 μm)色谱柱,流动相选择63：37的甲醇-磷酸水溶液，流速为1 mL/min,检测波长250 nm，柱温设定30℃。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备

精密称取11.76 mg的甘草酸铵对照品加入50 mL量瓶。用67：33：1的甲醇-醋酸铵溶液-冰醋酸溶解进行溶解对照品并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液(每1 mL储备液含甘草酸0.2145 mg)。

2.2.2 供试品溶液制备

取牛黄解毒片样品10片，除去包衣后研碎。称取1 g样品，加入50 mL量瓶中，并加入同样溶剂进行溶解。采用超声处理30 min后放置3 h，再加入溶剂进行定容。离心过滤后即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液制备

按牛黄解毒片的处方比例精密称取除了甘草以外的药材，并按正常制法制成牛黄解毒片的阴性对照样品，并按2.2.2中的方法制成阴性对照溶液。

2.3 线性关系考察

分别精密量取对照品储备液0.5、1、2、4、6、8 mL加至10 ml量瓶中，加入溶剂稀释至刻度并摇匀。分别取样20 μL注入色谱仪，按照2.1中色谱条件测定甘草酸。以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线经计算甘草酸的线性回归方程为Y=1780876.92X-96445.61，在0.0102～0.1665 mg/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.99996）。

2.4 专属性考察

分别吸取20 μL的对照品溶液、供试品溶液以及阴性样品溶液，以同样色谱条件进行进样测定，结果显示供试品溶液中的甘草酸主峰分离良好，阴性样品溶液中在相应保留时间处未见明显干扰峰，表明阴性样品无干扰。

2.5 稳定性试验

在供试品溶液制成的0、2、4、6、8、12 h分别精密称取20 μL加入色谱仪并测定峰面积。经计算甘草酸峰面积的RSD为1.26%，表明12 h内的稳定性较好。

2.6 精密度试验

精密量取甘草酸对照品溶液20 μL，在相同色谱条件下进行连续进样测定6次峰面积，经计算得到甘草酸峰面积的RSD为1.19%，表明仪器的精密度良好。

2.7 重复性试验

精密称取6份20180721批号的牛黄解毒片供试品1 g，制备成供试品溶液，在相同色谱条件分别进行测定峰面积。甘草酸峰面积的RSD为1.24%，重复性良好。

2.8 加样回收实验

精密称取6份1 g 20180721批号的牛黄解毒片供试品，分别加入0.2145 mg的甘草酸对照品，制备成加样回收试验的供试品溶液并进行加样测定，计算甘草酸回收率，结果加样平均回收率为97.62%(RSD=0.96%）。

2.9 样品含量测定

分别精密称取1 g三个不同批号的牛黄解毒片供试品，制备成供试品溶液各三份，分别进样测定三批牛黄解毒片供试品中的甘草酸含量，结果见表1。

表1 三个批号供试品中甘草酸含量

3 讨 论

牛黄解毒片是常用的清热解毒制剂。其中含有的甘草是一种补益中草药，具有补脾益气,中和药性的功效。甘草酸是甘草的中药成分，易溶于热醇溶液，可采用超声波处理促进其提取。对于流动相的选择，经过考察了甲醇-磷酸水溶液、甲醇-2%醋酸溶液、乙腈-乙酸溶液，发现甲醇-磷酸水溶液（63:37）的样本分离效果较佳。本次实验中应用HPLC法测定牛黄解毒片中甘草酸含量，结果显示线性关系良好，专属性佳，且具有较好的稳定性和重复性，是一种理想的甘草酸测定和质量控制方法。