泄泻肝气乘脾造模对小鼠血常规及脏器的影响

吴仪,湖南中医药大学 湖南省长沙市 410208

龙承星,湖南人文科技学院数学与金融学院 湖南省娄底市 417000

0 引言

泄泻肝气乘脾证,古称肠风飨泄,病机为土虚木乘,典型特征为泻前或泻时必有腹痛、泻后痛减,且与情志不畅呈正相关关系[1].中医在认识及治疗泄泻肝气乘脾具有特色和优势,随着医学模式的发展到生物-心理-社会医学模式,人们逐渐认识到心理应激所致的心身疾病其发生发展与肝脾不调证密切相关,而泄泻肝气乘脾即是其中典型而又常见的一种[2].根据临床调查,泄泻肝气乘脾证是泄泻中最常见的类型,因此对泄泻肝气乘脾的研究具有较强的临床意义.泄泻肝气乘脾造模采用番泻叶-束缚夹尾法,以番泻叶灌胃及饥饱失常造成脾虚体质[3],出现腹泻及精神不振等表现,又以随机、频繁束缚夹尾模拟心理应激,使动物产生烦躁、焦虑等情志不畅表现,造成肝气不畅病机,从而进一步横逆犯脾,加重脾虚,刺激泄泻,使其总体表现为泄泻肝气乘脾证.中医认为脾胃为“气血生化之源”、“后天之本”,与血液和卫气关系密切;肝主疏泄,主藏血,与凝血功能相关,且课题组前期研究发现脾虚泄泻造模对血常规有一定的影响.本实验经建立泄泻肝气乘脾模型,探究造模对小鼠血常规及脏器系数的影响,有一定的理论依据及研究基础.

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 动物：雄性SPF级昆明种小鼠20只[湖南斯莱克斯实验有限公司,动物许可证编号为：SCXK(湘)2016-0002],质量为18-22 g.动物饲养于湖南中医药大学第一附属医院动物实验中心,屏障环境动物房(室温23 ℃-25 ℃,相对湿度47%-53%,12 h光照/12 h黑暗).实验单位使用许可证编号为：SYXK(湘)2015-0003.

1.1.2 药物：番泻叶煎煮液制备：番泻叶(安徽毫药千草国药股份有限公司,批号：1703228) 500 g,煎煮得浓度为1 g/mL番泻叶水煎液,4 ℃保存以备用.

1.1.3 模型制备：按参考文献[4],正常组每天上午灌纯净水7 d (17.5 mL/kg·d),模型组每天上午灌番泻叶水煎液7 d (17.5 mL/kg·d),每次灌胃前均禁食12 h.下午模型组用离心管束缚并夹尾1 h,长尾夹取小鼠尾巴远端1/3处夹住,正常组不做处理.晚上所有组别均撤食,自由饮水.连续7 d,小鼠出现情绪暴怒,躁动不安、伴有腹泻便溏即模型制备成功.

1.1.4 动物分组：将20只小鼠适应性饲养2 d后随机分成2组,正常组10只与模型组10只.

1.2 方法

1.2.1 小鼠一般状态观察：实验过程中仔细观察比较小鼠有无发生泄泻及泄泻的特点,情绪及行为有无异常,肛门有无异常.观察并记录小鼠体重进食、饮水、精神状态、毛发状态等一般状态.

1.2.2 血样检测：于采血前12 h禁食,前1 h禁水,摘除眼球采血1-1.5 mL,注入EDTA-K2抗凝管中,混匀送检至湖南中医药大学第一附属医院检验科.

1.2.3 小鼠免疫器官的测定：造模结束后,小鼠称重,颈椎脱臼处死,迅速解剖取出主要脏器(肝、脾、胸腺),剔除脂肪和筋膜,用滤纸吸干表面的液体,并参考文献[5]计算相应的脏器指数：脾脏指数=脾脏体质量(g)/小鼠体质量(g)×100%,胸腺指数=胸腺体质量(g)/小鼠体质量(g)×100%,肝脏指数=肝脏体质量(g)/小鼠体质量(g)×100%.

统计学处理用SPSS 21.00软件进行分析.各组所得计量数据均采用mean±SD表示,均用独立样本t检验.P＜0.05表示差异有统计学意义.

2 结果

2.1 小鼠一般状态观察 实验过程中正常组小鼠的饮水正常,食欲佳,皮毛平整有光泽,粪便柔软成型,干湿适中,呈黑褐色,肛周干净.造模2 d后,模型组小鼠排便变稀或便溏,排便次数增加,情绪激动,开始出现打斗现象,呈站立姿态,毛发竖起.造模第4-5天,模型组小鼠大便溏稀,且肛周不洁,肛门红肿,常有粪便附着,频频出现爬笼、站立姿势,下午束缚夹尾时便溏量多而频繁.造模第7天,模型组小鼠灌胃抵抗增强,情绪依旧激动,暴躁易怒.与泄泻肝气乘脾证症状基本相符.

2.2 泄泻肝气乘脾造模对小鼠血常规的影响

2.2.1 泄泻肝气乘脾造模对小鼠血小板的影响：由表1可知,模型组血小板计数(platelet count,PLT)、血小板比容(platelet specific volume,PCT)均低于对照组且具有显著性差异(P＜0.05,P＜0.05).实验结果表明造模对血小板平均体积、血小板分布宽度无影响.

2.2.2 泄泻肝气乘脾造模对小鼠红细胞的影响：由表2可知,模型组红细胞计数、红细胞比容较正常组低,但差异不明显(P＞0.05);模型组红细胞平均体积、红细胞分布宽度变异系数、红细胞分布宽度标准差与正常组之间无明显差别.

2.2.3 泄泻肝气乘脾造模对小鼠血红蛋白的影响：由表3可知,与正常组相比,模型组红细胞平均血红蛋白浓度升高且具有显著性差异(P＜0.05);模型组血红蛋白含量、红细胞平均血红蛋白含量升高或降低,但差异不显著(P＞0.05).造模对小鼠红细胞功能无影响.

2.2.4 泄泻肝气乘脾造模对小鼠白细胞的影响：由图1可知,与正常组相比,模型组小鼠白细胞计数降低且具有显著性差异(P＜0.05).

2.3 泄泻肝气乘脾造模对小鼠脏器的影响 从表4可知,经造模处理小鼠后,模型组小鼠胸腺系数和脾脏系数均低于正常组,其中模型组胸腺系数与正常组相比具有显著性差异(P＜0.05).肝脏系数方面模型组虽高于正常组,但与正常组相比不具有显著性差异(P＞0.05).

3 讨论

肝气乘脾证病机为土虚木乘,即机体脾胃功能降低、肝气旺盛而导致肝脾功能失调出现泄泻.土虚主要体现在脾气虚,运化失常,症状表现在食欲降低、精神不佳、免疫力下降.木旺体现在情志的不畅,症状表现在情绪易怒、烦躁、不稳定.《黄帝内经·营卫生会第十八》云“人受气于谷,谷入于胃,以传与肺,五脏六腑,皆受其气.其清者为营,浊者为卫,营在脉中,卫在脉外”.此条文说明了以下两个观点,一为脾胃为“后天之本”,为“气血生化之源”,故脾胃之异常会影响到血液生成与运行,一般来说,脾虚会导致脾气的生成不足甚至导致血液的生成不足.二为脾胃与机体免疫功能也密切相关,中医认为卫气是人体内具有抵御外邪、保护机体功能的一类精微物质,并有观点认为卫气是“免疫细胞”的中医表达形式[6,7].脾胃是卫气的重要生成来源,脾胃与卫气的关系可以表达为“脾胃—营卫—脾胃”反馈调节机制[8],即脾胃与卫气能相互作用而非单向作用.而在肝气乘脾证当中究竟对脾与肝产生什么样的影响,通过本次实验可说明.

3.1 泄泻肝气乘脾造模对小鼠血液指标的影响可以在一定程度上反应模型的成功 本实验结果发现：模型组小鼠PLT、PCT均低于正常小鼠,说明泄泻肝气乘脾模型降低小鼠凝血功能.泄泻肝气乘脾证中一个重要的影响因素为情志不畅,造模过程中夹尾束缚造成小鼠情绪的暴躁甚至抑郁,李自越等[9]的研究认为：应激刺激会引起垂体-肾上腺皮质系统兴奋,糖皮质激素分泌增加,从而PLT增加,而PCT的升高是因为PLT的升高.中医认为肝的重要生理功能为肝主疏泄,调畅气机,调节精神情志,同时还能贮藏血液;若肝发为病理,则主要表现为疏泄与藏血功能失常[10],泄泻肝气乘脾造模对肝脏功能的影响主要体现在肝气旺盛,情志受到刺激.故PCT、PLT的降低可能与肝脏疏泄失常及藏血功能失常有关.但同时根据本课题组《番泻叶所致脾虚泄泻小鼠血常规的研究》发现番泻叶会降低小鼠的血小板数量,但对其他血液指标没有影响,故究竟是番泻叶还是应激刺激导致小鼠血小板降低需要进一步实验证明.白细胞是机体内负责防御的一类重要细胞,具有抵御外邪的功能,相当于中医学中“卫气”发挥的一部分作用,与脾脏功能密切相关,课题组前期脾虚造模并未发现白细胞水平降低到的趋势,而李盛强等[11]研究表明,脾虚证犬类中白细胞较正常组明显降低且差异显著(P＜0.01),考虑白细胞水平的降低可能与小鼠脾胃受损影响卫气的生成有关.但无法排除研究中情志刺激对白细胞降低的影响,或是肝脾两者共同作用导致,因此有望今后在本研究基础上进一步探究,为临床提供一定的指导意义.

表1 各组血小板的变化情况比较(mean±SD)

表2 各组红细胞的变化情况比较(mean±SD)

表3 各组血红蛋白的变化情况比较(mean±SD)

表4 各组小鼠脏器的变化情况比较(mean±SD)

图1 各组白细胞的变化情况比较.与正常组比较,aP＜0.05.

3.2 泄泻肝气乘脾造模降低了小鼠免疫功能 模型组小鼠胸腺指数的降低说明泄泻肝气乘脾造模降低了小鼠免疫功能[12,13],李云等[14]实验表明,脾虚模型的小鼠胸腺指数明显低于正常组且差异显著(P＜0.5);结合上述对白细胞的分析,本次实验组证明了泄泻肝气乘脾造模降低了小鼠免疫力(卫气/脾气),降低了凝血功能(肝藏血功能),与中医学“先伤气后伤血(先伤阳后伤阴)”的观点不谋而合;对脾虚及肝气乘脾客观化及临床指导提供了一定依据.

3.3 不足与展望 本次实验方法简单,从临床检查角度仅对血常规及脏器系数进行分析,但结果表明泄泻肝气乘脾模型值得进一步研究,除了再深入探究肝、脾对血常规、免疫力的影响外,还可进一步在本研究基础上对肠道菌群及肠道消化酶进行分析.

文章亮点

实验背景

中医药治疗泄泻肝气乘脾证十分有效,但目前对泄泻肝气乘脾证的机制研究极少.本研究创新性的于肝主疏泄、主藏血理论基础上探究泄泻肝气乘脾证对机体血常规以及脏器系数的影响.

实验动机

泄泻肝气乘脾证的病理机制及模型建立研究不够深入,从血常规角度研究该模型,有助于更好的理解泄泻肝气乘脾证,为临床提供指导,为模型提供辅助指标.

实验目标

在一定程度上辅助泄泻肝气乘脾模型的建立,探究模型对血常规及脏器系数的影响,为临床提供一定的参考.

实验方法

本研究采用“番泻叶-束缚夹尾法”7 d制备泄泻肝气乘脾小鼠模型,并使用血常规检测、脏器系数测定,选择独立样本t检验进行两组间比较.

实验结果

模型组小鼠血小板计数、血小板比容均显著性低于正常组小鼠,造模降低了小鼠凝血功能;模型组白细胞计数、胸腺系数显著性低于正常组小鼠,说明造模可能对免疫系统产生影响.

实验结论

泄泻肝气乘脾造模降低了机体凝血功能,与肝脏功能的损害密切相关.在一定程度上能反应模型的成功,并可能对小鼠免疫系统功能产生影响.

展望前景

泄泻肝气乘脾证型中医治疗效果明显,西医对症支持治疗具有局限性,研究该证型的中医病理机制对临床具有潜在意义.

4 参考文献

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