高效液相色谱法同时测定辣椒中氯虫苯甲酰胺和溴氰虫酰胺的残留

宋文芳

摘 要：本文建立了一种同时测定辣椒中氯虫苯甲酰胺和溴氰虫酰胺残留的高效液相色谱方法。辣椒样本采用丙酮提取，盐析后取上清液，用GCB/PSA复合固相萃取柱进行净化，经浓缩后用甲醇复溶，待测。结果表明，这2种被测物在0.60～14.40 mg·mL-1范圍内线性关系良好，相关系数r（均）>0.999;这2种被测物在3个加标水平下的平均回收率为62.2%～95.1%，日内和日间精密度均≤14.9%。该法灵敏度高、准确性好、成本较低，可用于辣椒中这2种农药残留的同时检测。

关键词：氯虫苯甲酰胺;溴氰虫酰胺;高效液相色谱法;残留

Abstract：A method was developed for the simultaneous determination of chlorantraniliprole and cyantraniliprole residues in capsicum by high performance liquid chromatography.The sample was extracted with acetone. The supernatant was purified by GCB/PSA solid phase extraction column after salting out. After concentration， it was reconstituted with methanol， waiting for the test. The calibration curves of the two compounds were linear in the range of 0.60～14.40 mg·mL-1（correlation coefficient （r） >0.999）. The recoveries were 62.2%～95.1% in the three spiked levels，and the intra-day and inter-day precisions were no more than 14.9%. The method is high sensitivity， good accuracy and low cost， and can be used for the simultaneous determination of chlorantraniliprole and cyantraniliprole residues in capsicum.

Key words：Chlorantraniliprole; Cyantraniliprole; Residue; HPLC

氯虫苯甲酰胺是杜邦公司研发的第一代鱼尼丁受体抑制剂类农药杀虫剂，于2000年开发，2007年正式投放市场，对鳞翅目的夜蛾科、螟蛾科、蛀果蛾科等均有很好的控制效果[1]。溴氰虫酰是由科研人员对氯虫苯甲酰胺苯环上的各种极性基团进行改变调整，用氰基替代了氯基，活性和内吸性都有所提高，除了能防治鳞翅目害虫外，还可用于防治半翅目和鞘翅目害虫，更具有杀虫广谱性[2]。

国内有关氯虫苯甲酰胺果蔬残留量测定主要采用QuEChERS[3]或固相萃取法[4]这2种前处理技术联用色谱-质谱检测技术[5]来进行测定，而有关溴氰虫酰胺果蔬残留量测定大多是田间防效作用的研究[6-7]，对在农作物中残留量测定的报道较少。色谱-质谱联用仪价格和维护费用高，方法较难推广。本文拟采用固相萃取法联用高效液相色谱法实现对辣椒中氯虫苯甲酰胺和溴氰虫酰胺这2种杀虫剂的残留进行测定。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

P230高效液相色谱仪（依利特）;RE-2000A旋转蒸发器（上海亚荣）;HP-5011氮吹仪（上海济成）;HX-12A固相萃取装置（恒信科技）;AB204-S分析天平（美国梅特勒）。

1.2 标准溶液的配制

精密称取氯虫苯甲酰胺和溴氰虫酰胺这2种标准品，用DMF溶解并稀释成0.6 mg·mL-1的标准储备液。将上述储备液用甲醇稀释，配制成氯虫苯甲酰胺浓度为12.00 mg·mL-1、溴氰虫酰胺浓度为3.00 mg·mL-1的混合标准溶液，置于0～4 ℃冰箱避光保存。

1.3 样品前处理

辣椒10个，切成小片，放入捣碎机中捣碎，再用组织匀浆机打浆，称取6 g匀浆样品于50 mL塑料离心管中，加入20 mL丙酮溶液，于振荡器上振荡提取3 min。加入2 g氯化钠，再振荡提取1 min，取全部上清液于50 ℃水浴旋转蒸发浓缩至近干，用2 mL甲醇-水（体积比70∶30）复溶。

将上述样品提取液加入事先活化的小柱，用8 mL甲醇-水（体积比70∶30）溶液进行洗脱，收集流出液，再用4 mL甲醇-水（体积比70∶30）溶液分2次洗涤烧瓶，将洗涤液注入萃取小柱，收集并合并流出液，于50 ℃水浴旋转蒸发浓缩近干，用氮气吹干。用甲醇溶液定容至1 mL，过0.45 mm滤膜，待测。

1.4 分析条件

色谱柱：ODS-BP（4.6 mm×200 mm，5 mm）;柱温：25 ℃;流动相：甲醇-水（体积比60∶40）;检测波长：268 nm;流速：1.2 mL·min-1。

2 结果与分析

2.1 样品前处理的优化

2.1.1 固相萃取柱的选择

本研究考察4种不同固相萃取柱，分别为500 mg/6 mL规格的C18、NH2、GCB和500 mg/500 mg/6 mL GCB/PSA固相复合萃取柱。结果表明，GCB/PSA复合固相萃取柱净化效果最好，处理后基体中干扰组分明显减少。因此，本文选用GCB/PSA复合固相萃取柱作为最终的SPE柱。

2.1.2 洗脱剂种类的选择

本研究选取了丙酮-水、乙腈-水、甲醇-水和二甲基甲酰胺-水作为洗脱剂。通过对净化后的加标样品溶液按1.4項下色谱条件进行测定，考察这4种洗脱剂对SPE萃取效果的影响。结果表明，用甲醇-水作为洗脱剂时，这2种杀虫剂的回收率较好。二甲基甲酰胺-水作为洗脱剂时，较多基体杂质也被洗脱下来，净化效果较差。因此，本研究采用甲醇-水（体积比70∶30）作为最终洗脱溶剂。

2.2 方法学考察

2.2.1 线性范围、检出限和定量限

在1.4项条件下，对氯虫苯甲酰胺和溴氰虫酰胺质量浓度分别为0.72、3.60、6.00、12.00 mg·mL-1和14.40 mg·mL-1和0.60、3.00、4.80、6.00 mg·mL-1和7.20 mg·mL-1的标准溶液进行测定（见表1）。结果表明，这2种化合物线性关系良好，相关系数（r）均>0.999，氯虫苯甲酰胺和溴氰虫酰胺的仪器检出限（LOD）分别为4.2 mg·kg-1和2.8 mg·kg-1，定量限（LOQ）分别为13.3 mg·kg-1和7.7 mg·kg-1。

2.2.2 回收率

氯虫苯甲酰胺在0.03、0.30、0.60 mg·kg-1这3个质量浓度添加水平下，回收率为62.2%～92.5%（见表2），溴氰虫酰胺在0.05、0.50、1.00 mg·kg-1这3个质量浓度添加水平下，回收率为62.9%～95.1%（见表3）。表明本法在样品前处理及测定中有较好的回收率，适用于辣椒样本中这2种农药残留量的测定。

2.2.3 日内和日间精密度

在低、中、高3个浓度水平进行加标试验，每个浓度分别设定5个平行样，连续测定3 d。氯虫苯甲酰胺日内精密度为4.1%～10.9%（n=5），日间精密度为3.9%～11.2%（n=3）。溴氰虫酰胺日内精密度为7.6%～12.4%（n=5），日间精密度为7.4%～14.9%（n=3）（见表4）。

2.2.4 实际样品测定

在本地菜场购买了8份辣椒，对其进行测定，结果均未检出。可见，目前市场上销售的辣椒，这2种农药的残留量均控制的比较好。

3 结论

本文建立了一种同时测定氯虫苯甲酰胺和溴氰虫酰胺这2种邻甲酰胺基苯甲酰胺类农药在辣椒中残留的高效液相色谱法。该法灵敏度高、准确性好、成本较低，可用于辣椒中这2种农药残留的同时检测。

参考文献：

[1]王海慧，章金明，涂 芹，等.氯虫苯甲酰胺抗性小菜蛾的产卵行为和交配节律观察[J].应用昆虫学报，2016，53（2）：264-272.

[2]周 操，杨 航，杨 洪，等.溴氰虫酰胺对白背飞虱室内敏感种群的亚致死效应[J].农药学学报，2016，18（5）：651-655.

[3]杨文迪.改进QuEChERS技术结合LC-MS/MS测定果蔬中农药多残留[D].泰安：山东农业大学，2017.

[4]马 琳，陈建波，赵 莉.固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定果蔬中6种酰胺类农药残留量[J].色谱，2015，33（10）：1019-1025.

[5]朱建华，赵 莉.用液相色谱串联质谱法测定果蔬中的唑虫酰胺、氟啶虫酰胺、氯虫苯甲酰胺及氟虫双酰胺残留[J].分析测试学报，2011，30（6）：646-650.

[6]何红梅，张春荣，朱亚红，等.溴氰虫酰胺及其代谢物在辣椒和土壤中的残留降解研究[J].分析化学，2017，42（8）：1177-1182.

[7]丁金凤，徐春梅，张 薇，等.QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定玉米植株和土壤中溴氰虫酰胺及其代谢物残留[J].农药学学报2018，20（1）：83-89.