抗-E合并抗-Dia致疑难配血试验分析*

杨红梅，许 飞，郑皆炜，向 东，虞 茜，曹锁春△

1．江苏省常州市中心血站，江苏常州 213004；2.上海市血液中心，上海 200050

不规则抗体是指除抗-A、抗-B红细胞以外的血型抗体。不规则抗体是导致溶血性输血反应、新生儿溶血病、疑难配血及血型鉴定困难的主要原因[1-2]。对献血员和患者进行抗体筛选，可避免因为找不到相合的血液给患者而延误治疗，因此抗体筛查试验在临床配血中非常重要。引起临床疑难交叉配血最常见的抗体是Rh血型系统的相关不规则抗体，该系统不规则抗体可单独存在，也可以联合其他抗体的形式存在。本实验室在工作中发现1例抗-E合并抗-Dia引起的交叉配血不合，现将试验分析过程报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 患者韩某，女，30岁，因“月经量多10余年，彩超发现子宫内膜增厚等”经门诊收入院，既往有妊娠史、流产史，抗体筛查阳性，特需配悬浮红细胞4个单位而送常州市中心血站输血研究室进行相关检测。

1.2试剂与仪器 抗-A/B单克隆抗体(上海血液生物，批号：20180818)；抗-D(IgM)单克隆抗体(北京金豪，批号：2018110104)；ABO血型反定型红细胞(北京金豪，批号：20190601013)；进口谱细胞(匈牙利，批号：731911)；进口谱细胞(Sanquin，批号：8000257144)；国产谱细胞(上海血液生物，批号：20190530)；抗人球蛋白试剂(上海血液生物，批号：20185001);抗-IgG(上海血液生物，批号：20185102);抗-C3d(上海血液生物，批号：20185202);抗-Dia(CE公司，批号：MDiaM024);抗-C(上海血液生物，批号：20183003)；抗-c(上海血液生物，批号：20183102)；抗-E(上海血液生物，批号：20193201)；抗-e(上海血液生物，批号：20183301)；抗体筛选细胞(上海血液生物，批号：20197026)。聚凝胺试剂由台湾贝索企业有限公司提供。久保田KA-2200血清学专用离心机；37 ℃恒温水浴箱；卢湘仪TD4低速自动平衡离心机；博讯抗人球蛋白卡。

1.3试管法鉴定 ABO正反定型、Coombs试验、抗体鉴定、交叉配血及微柱法进行抗体特异性鉴定及交叉配血。所有试验均严格按照文献[3]的方法和试剂操作说明书进行操作。

2 结 果

2.1血型鉴定(试管法) ABO正反定型结果见表1，血型为A型。

表1 患者ABO正反定型结果

注：4+表示凝集强度；0表示阴性。

2.2抗体筛选(试管法) 医院送检单显示抗体筛选试验阳性，提示有不规则抗体存在。笔者进一步做不规则抗体筛查发现筛选Ⅰ、Ⅲ细胞在盐水介质中无凝集，在聚凝胺和抗人球蛋白介质中均凝集，结果见表2，其中在聚凝胺介质下的凝集强度达到2+，提示该抗体对聚凝胺介质敏感。

表2 患者血清与抗筛细胞反应格局与结果(批号：20197026)

注：+表示极小的细胞凝集混合众多游离红细胞；0表示阴性；1+、2+表示凝集强度。

2.3鉴定抗体其特异性(试管法——抗人球蛋白和聚凝胺介质) 从筛选试验格局中初步推断血清中存在Rh系统血型抗体，进一步鉴定抗体特异性。国产谱细胞和进口谱细胞在盐水介质均出现凝集。进口谱细胞在聚凝胺介质2、4、9号出现凝集，在抗人球蛋白介质中2、4、7、9号出现凝集。国产谱细胞在聚凝胺介质2、4、5、6号出现凝集，在抗人球蛋白介质中2、3、4、5、6号出现凝集。对照进口谱细胞格局表和国产谱细胞初步判断为抗-E合并抗-Dia不能排除抗-Cw；试验结果见表3、4。进一步做Rh系统和Diego系统抗原表型分型试验，结果见表5。该患者Rh分型为CCee，Diego系统分型为Di(a-)，与血清中相应抗体基本吻合，仍需采用吸收放散试验来进一步排除是否存在抗-Cw。

表3 患者血清与进口谱细胞反应格局及结果(REAGENS，批号：731911)

注：+表示极小的细胞凝集混合众多游离红细胞；0表示阴性；1+、2+表示凝集强度；s表示稍强；w表示稍弱。

表4 患者血清与国产谱细胞反应格局及结果(批号：20190530)

注：+表示极小的细胞凝集混合众多游离红细胞；0表示阴性；/表示未检测；1+表示凝集强度；s表示稍强；w表示稍弱。

表5 患者Rh抗原分型和Diego抗原分型结果

注：1+、2+、3+、4+表示凝集强度；0表示阴性。阳性对照S3细胞为筛选细胞中的Ⅲ号细胞；Diego系统阳性对照细胞为国产谱细胞3号细胞。

2.4吸收放散试验 该患者Rh基因分型为CCDee，Diego系统分型为Di(a-)。不同血型系统抗体在谱细胞试验中可能会有干扰而影响反应格局，为了进一步确定抗体特异性，于是对患者标本进行吸收放散试验，挑选E抗原阳性、Dia抗原阴性的细胞混合液(进口谱细胞2号和4号)与患者血清采用热吸收酸放散方法(37 ℃ 30 min),将放散液与吸收后的血清进一步进行谱细胞试验，见表6，试验结果表明患者血清中确实存在抗-E和抗-Dia。为排除抗-Cw，选择了Sanquin谱细胞中的1、2、6号细胞检测，发现1、2号谱细胞均为阴性，6号阳性；说明血清中未检出抗-Cw，试验结果见表7。

2.5抗-Dia和抗-E效价测定 采用试管法对血清倍比稀释(准备2排试管)，第1管血清50 μL，第2管为血清50 μL与50 μL生理盐水混合液，将第2管中的50 μL混合液移置第3管，以此类推。第1排试管效价测定所用细胞为进口谱细胞7号与国产谱细胞3号细胞混合液；第2排效价测定所用细胞为进口谱细胞2号与国产谱细胞4号细胞混合液。向相应的试管中加入混合细胞量50 μL，整个体系为100 μL，分别做室温、37 ℃抗人球蛋白介质下抗-E和抗-Dia的抗体效价。结果在抗人球蛋白介质中抗-E、抗-Dia效价分别为2、4；试验结果见表8。本实验室以出现±的最高稀释倍数为最终效价。

表6 吸收放散谱细胞试验结果(进口谱2号和4号)

注：0表示阴性；1+、2+表示凝集强度；w表示稍弱。

表7 患者血清与部分谱细胞反应结果

注：+表示极小的细胞凝集混合众多游离红细胞；0表示阴性；/表示未检测；1+表示凝集强度。

表8 抗-E和抗-Dia效价测定

注：J7+G3为匈牙利谱7号+国产谱细胞3号红细胞混合液；G4+J2为国产谱细胞4号与匈牙利谱2号红细胞混合液；0表示阴性；±表示弱阳性；1+、2+表示凝集强度；w表示稍弱。

2.6交叉配血试验 根据疑难配血申请单筛选2袋献血者条码为9001819233675/9001819233675、A型、RhD阳性、其他血型为“CCee且Di(a-)”的血样做主次侧交叉配血试验，在盐水、聚凝胺、抗人球蛋白3种介质中均无凝集、无溶血，可输注上述悬浮红细胞4个单位。跟踪该患者，血红蛋白上升了25 g/L左右，输血效果良好。

3 讨 论

临床上交叉配血不合的原因众多，在进行血液筛查的每个环节都可能导致配血不合。在输血前的血液检测中，不规则抗体筛选阳性是导致不合的常见现象。Rh血型系统在输血工作中的重要性仅次于ABO血型系统。当抗体性质为IgG类，优先考虑Rh血型系统抗体，这是因为Rh血型系统抗原性强度仅次于ABO血型系统。抗-E是RhD阳性者最易产生的抗体，往往抗-c会伴随着抗-E同时出现。该患者Rh抗原分型为CCDee，缺乏E和c抗原，妊娠、流产等过程受免疫刺激导致产生了免疫性抗-E和抗-c，当再次输血时就可能会出现交叉配血不合[4-6]。Diego血型系统包含21个抗原，其中Dia和Dib、Wra和Wrb两对等位基因是最具有临床意义的抗原[7]。在Diego血型系统中，Dia抗原是相对低频抗原，Dib抗原是相对高频抗原。有文献报道中国汉族Dia抗原频率约为10%且大多数人表型为Di(a-b+)。Diego血型抗体都是免疫产生，属于IgG性质，只能借助抗人球蛋白介质试验才能检出，酶法和补体均不能增强反应；一般抗-Dia引起的输血反应多为迟发型和温和型。本案例在试验过程中发现，抗-Dia在聚凝胺介质中未见凝集，抗人球蛋白介质中出现2+凝集强度；而抗-E在聚凝胺介质中格局清晰。当血清中出现Diego血型抗体时，往往会伴随1种或2种以上的抗体，此时混合抗体使得红细胞破坏程度增加，导致出现溶血性输血反应临床症状。因此应根据抗体性质采用灵敏度和特异度相适宜的检测方法，对于两种及以上的混合抗体要结合吸收放散试验等方法鉴定清楚以确保结果准确、快速，最大限度避免输血反应，保障临床输血安全。不规则抗体阳性的患者一旦输注含有相应抗原的红细胞，抗原抗体在补体的参与下发生免疫反应，导致输注的红细胞溶解破坏，严重时甚至危及生命。因此输血前应尽可能了解患者输血史、妊娠史、用药史，及时发现有临床意义的抗体，以选择其抗原阴性的血液，保证输血安全有效[8-10]。

(志谢：在此感谢上海市血液中心血型参比实验室老师们的远程指导！)