丝棉木种子化学成分及其抗肿瘤活性

庞 策，左亚奇，张冠腾，甄 攀

（1.河北北方学院药学系，河北 张家口075000； 2.河北北方学院应用化学研究所，河北 张家口075000）

丝棉木Euonymus maackiiRupr.系卫矛科卫矛属植物，又名华北卫矛、白杜卫矛，主要分布在东北南部至长江流域北部暖温带地区。丝棉木的根和皮均可用作药物，其性寒，味苦涩，有小毒［1］。前期研究报道可知，其化学成分主要包括三萜类［2-4］，其提取物有显著的昆虫拒食活性［5］。为进一步发掘该植物中的化学成分，本实验对丝棉木种子的乙醇提取物进行了分离纯化，共分离鉴定了10 个化合物，其中，化合物1 为新化合物。经过体外药理活性筛选发现，化合物6 对Hela 细胞有一定的抑制作用，IC50为9.76 μg／mL。

1 材料

WNMR-Ⅰ500 核磁共振仪（中科牛津波普有限公司）；AV600 ⅢHD 核磁共振仪（瑞士布鲁克拜尔斯宾有限公司）；IMPACT-400 型傅里叶变换红外光谱仪（美国Nicolet 公司）；Agilent 1100 高效液相色谱仪、Agilent 1200 制备色谱仪 （美国Agilent 公司）；紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；WZZ-1 自动旋光仪（申光有限公司）；反相柱色谱硅胶RP18（40～60 μm）（德国Merck 公司）；薄层色谱硅胶GF254及柱色谱硅胶（200～300 目）（青岛海洋化工厂）；YMC C-18（260 mm×4.6 mm，5 μm，美国Thermo 公司）。

丝棉木种子于2016 年9 月采自张家口市长城西大街景观树种，由河北北方学院医学院魏会平教授鉴定为丝棉木Euonymus maackiiRupr.。

2 提取与分离

取丝棉木种子764 g，干燥，粉碎，95% 乙醇浸泡，回流提取，重复提取2 次，合并提取液，减压浓缩得膏状物约100 g。膏状物用100～200 目硅胶柱分离，分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯洗脱，各洗脱液减压浓缩，分别得膏状物21.24、29.58、41.27 g。乙酸乙酯洗脱部分用D101 大孔吸附树脂柱进一步分离，以乙醇-水洗脱（30%、50%、70%、90%、100%），各洗脱液减压浓缩。70%和100%乙醇-水洗脱部分，分别用C18色谱柱进一步分离，甲醇-水（30%、50%、60%、70%、90%、100%） 洗脱，每10 mL 收集一试管，用薄层板检识，相同部分合并。最后用制备色谱仪纯制，甲醇-水为流动相，得到单体化合物。取100%乙醇部分，再用C18色谱柱分离，从90%甲醇-水洗脱部分，得到化合物1～4。取70%乙醇洗脱部分，再用C18色谱柱分离，从70%甲醇-水洗脱部分，得到化合物5～7；从90%甲醇-水洗脱部分，得到化合物8～10。

3 结构鉴定

化合物 1： 白色固 体。［α］D20＝-315（0.286 g／100 mL，CH3OH ）；HR-ESI-MSm／z：707.266 2 ［M+Na］+（计算值 707.268 0，C36H44NaO13），结 合 NMR 推测其 分子式 为C36H44O13，不饱和度 为15。其IR 谱显示羟基（3 300 cm-1）、羰 基 （1 645 cm-1）、苯 环（1 416.6，1 468.3 cm-1） 吸收峰。1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ：6.2 （1H，s，H-9），5.75 （1H，m，H-2），5.70 （1H，d，J＝3.6 Hz，H-1），5.28 （1H，d，J＝6.01 Hz，H-6），5.25／4.53 （2H，AB（13.2），H-12），2.58 （1H，s，H-7），2.21 （2H，s，H-3），2.2 （2H，s，H-8），1.56 （3H，s，H-15），1.51 （3H，s，H-13），1.49 （3H，s，H-14）；13CNMR （150 MHz，CDCl3）δ： 91.3 （C-5），84.7 （C-11），78.2 （C-9），69.6 （C-4），69.2 （C-6），69.0（C-2），67.6 （C-1） 66.2 （C-12），55 （C-10），49.3（C-7），42.0 （C-3），34.7 （C-8），29.5 （C-15），25.7 （C-13），25.7 （C-14）。表明含有一个1，2，4，6，9，12 -六取代的β 二氢沉香呋喃倍半萜［6］。

此外，含有2 个乙酰基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ：2.10 （H-9′，3H，s，-CH3），2.30 （H-7′，3H，s，-CH3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：21.3（C-7′），170.4 （C-6′），21.7 （C-9′），170.8 （C-8′）。1 个甲基 正丁酰氧基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 1.25 （H-12′，2H，m），0.90 （H-11′，2H，q，J＝7.09 Hz），0.80 （H-14′，3H，d，J＝7.05 Hz），0.56 （H-13′，3H，t，J＝7.98 Hz）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 174.6 （C-10′），41.0 （C-12′），25.4 （C-11′），16.1 （C-14′），11.4 （C-13′）。1 个苯甲酰氧基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 8.11 （H-22″，2H，d，J＝7.18 Hz），8.11 （H-6″，2H，d，J＝7.18 Hz），7.57 （H-4″，1H，m），7.50（H-3″，2H，d，J＝7.18 Hz），7.50 （H-5″，2H，d，J＝7.18 Hz）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：165.7（C-15′），133.6 （C-4″），129.9 （C-6″），129.9（C-2″），129.4 （C-1″），128.9 （C-3″），128.9 （C-5″）。1 个呋喃甲酰基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 8.01 （H-4′，1H，s），7.41 （H-3′，1H，s），6.73（H-2′，1H，m）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：161.1 （C-5′），148.5 （C-4′），143.9 （C-3′），118.2 （C-1′），109.8 （C-2′）。

H-1／H-2／H-3 和H-6／ H-7／H-8／H-9 出现1H-1H COSY 相关信号，结合CH3-4 与C-5，H-6 与C-10，H-9 与C-5，H-12 与C-1、C-9 的HMBC 相关，进一步确证了母核结构为β 二氢沉香呋喃倍半萜。此外，在HMBC 谱图中，H-1 与MeButO 羰基碳（174.6） 相关，H-2 与苯甲酰基羰基碳（165.7）相关，H-6 与呋喃酰基羰基碳（161.1） 相关，H-9与甲酰基羰基碳（170.4） 相关，H-12 与甲酰基羰基碳（170.8） 相关，由此确定了平面结构。在NOESY 谱中，H-12 与H-1、H-9 相关，H-2 与H-1相关，确定H-1、H-2、H-9 的相对构型均为β 型。综合上述信息，确定该化合物的结构为1β-甲基正丁酰氧基-2β-苯甲酰氧基-4α-羟基-6α-呋喃酰氧基-9β，12-二乙酰氧基-β-二氢沉香呋喃，为一新化合物。结构见图1。

图1 化合物1 的结构和重要的HMBC 和NOESY 相关Fig.1 Structure and key HMBC and NOESY correlations of compound 1

化合物2： 白色无定形固体。HR-ESI-MSm／z：757.284 6［M+H］+（计算值757.777 3，C42H45O13），结合NMR 推测其分子式为C42H44O13。根据1H-NMR和13C-NMR 分析，该化合物具有β-二氢沉香呋喃型基本母核结构。母核1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ：6.93 （6-H，1H，s），6.03 （H-1，1H，d，J＝3.80 Hz），5.83 （H-2，1H，m），5.76／4.65 （H-12，A／Bq，2H，J＝13.01／12.99 Hz），5.67 （H-8，1H，dd，J＝3.9／6.5 Hz），5.62 （H-9，1H，d，J＝5.9 Hz），2.67 （H-7，1H，d，J＝3.80 Hz），2.44 （H-4，1H，m），1.62 （H-14，3H，s），1.53 （H-15，3H，s），1.25 （H-13，3H，d，J＝6.6 Hz）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 90.2 （C-5），81.3 （C-11），77.7 （C-9），74.7 （C-8），72.2 （C-6），70.8 （C-2），69.9 （C-1），61.2 （C-12），53.5 （C-7），50.9（C-10），32.6 （C-4），31.9 （C-3），30.4 （C-15），24.7 （C-14），16.8 （C-13）。

取代 基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 1.62（3H，s，-CH3），1.53 （3H，s，-CH3），1.25 （3H，d，J＝6.6 Hz，-CH3），1.40、1.99、2.14 （3×3H，3×s），δ7.30-8.17 （15H，m，-C6H5）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 20.0、21.3、21.3 （3 ×-CH3），δ128.40-133.40 （-C6H5），171.4，169.9，169.2，166.4，166.0，165.0 （6×-COO-）。以上数据与文献［7］ 基本一致，故鉴定为6α，9β，12-三乙酰氧基-1β，2β，8β-三苯甲酰氧基-β-二氢沉香呋喃。

化合物3： 白色无定形固体。HR-ESI-MSm／z：773.313 4 ［M+Na］+（计算值 774.076 0，C41H50O13Na），结 合 NMR 推测其 分子式 为C41H50O13。根据1H-NMR 和13C-NMR 分析，该化合物具有β-二氢沉香呋喃型基本母核结构。母核1HNMR （500 MHz，CDCl3）δ： 6.94 （H-6，1H，s），5.82 （H-1，1H，d，J＝3.96 Hz），5.65 （H-8，1H，dd，J＝3.8／5.9 Hz），5.57 （H-9，1H，d，J＝5.79 Hz），5.53 （H-2，1H，m），5.51／4.72 （H-12，A／Bq，2H，J＝12.96／12.98 Hz），2.62 （H-7，1H，d，J＝3.18 Hz），1.62 （H-14，3H，s），1.50 （H-15，3H，s），1.14 （H-13，3H，d，J＝7.4 Hz）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 90.8 （C-5），80.9 （C-11），80.0 （C-9），74.9 （C-8），72.6 （C-6），70.8 （C-2），68.6 （C-1），61.2 （C-12），53.5 （C-7），51.3（C-10），33.0 （C-3），32.8 （C-4），30.4 （C-15），24.6 （C-14），16.8 （C-13）。

取代基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 2.22、1.96、1.47 （3×3H，3×s），2.37 （2H，q，J＝6.84 Hz，-CH2-），1.24 （6H，d，J＝8.39 Hz，3×-CH2-），0.86 （3H，t，J＝6.56 Hz，），7.38-8.11 （10H，m，2×-C6H5）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ： 22.25、21.70、20.10、12.99 （4×-CH3），34.13、31.56、24.56、22.25 （4×-CH2-），128.4-133.4 （-C6H5），172.55、170.72、169.78、169.24、166.33、164.96 （6×-COO-）。以上数据与文献［7］ 基本一致，故鉴定为6α，9β，12-三乙酰氧基-1β，8β-二苯甲酰氧基-2β-正己酰氧基-β-二氢沉香呋喃。

化合物4： 白色无定形固体。HR-ESI-MSm／z：801.344 8 ［M+Na］+（计算值 801.848 6，C43H54NaO13），结 合 NMR 推测其 分子式 为C43H54O13。根据1H-NMR 和13C-NMR 分析，该化合物具有β-二氢沉香呋喃型基本母核结构。母核的1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ：6.95，（H-6，2H，s），5.87 （H-1，1H，d，J＝3.96 Hz），5.69 （H-8，1H，dd，J＝3.51／5.52 Hz），5.58 （H-2，1H，m），5.57 （H-9，1H，d，J＝5.49 Hz），5.51／4.61 （H-12，A／Bq，2H，J＝13.02／13.03 Hz），2.60 （H-7，1H，d，J＝3.49 Hz），1.63 （H-14，3H，s），1.50（H-15，3H，s），1.17 （H-13，3H，d，J＝6.9 Hz）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ： 90.3 （C-5），81.1 （C-11），77.3 （C-9），74.8 （C-8），72.2 （C-6），71.6 （C-2），70.1 （C-1），61.2 （C-12），53.7（C-7），51.2 （C-10），32.7 （C-4），31.7 （C-3），30.4 （C-15），24.6 （C-14），16.8 （C-13）。

取代 基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 1.62（3H，s，-CH3），1.42 （3H，s，-CH3），1.22 （3H，d，J＝7.4 Hz，-CH3），2.16、1.96、1.38 （3×3H，3×s，3×-CH3），7.49-8.21 （10H，m，2×-C6H5）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ： 21.3、20.8、20.1（3×-CH3），128.4-133.4 （-C6H5），170.7、169.7、169.1、166.3、165.8、164.9 （6×-COO-）。以上数据与文献［8］ 基本一致，故鉴定为6α，9β，12-三乙酰氧基-1β，8β-二苯甲酰氧基-2β-正辛酰氧基-β-二氢沉香呋喃。

化合物5： 白色无定形固体，HR-ESI-MSm／z：827.360 3 ［M+Na］+（计算值 827.884 4，C45H56O13Na），结 合 NMR 推测其 分子式 为C45H56O13。根据1H-NMR 和13C-NMR 分析，该化合物有β-二氢沉香呋喃型基本母核结构。母核的1HNMR （500 MHz，CDCl3）δ： 6.92 （H-6，2H，s），5.83 （H-1，1H，d，J＝3.96 Hz），5.67 （H-8，1H，dd，J＝3.53／5.53 Hz），5.56 （H-2，1H，m），5.54（H-9，1H，d，J＝5.51 Hz），5.52／4.62 （H-12，A／Bq，2H，J＝13.03／12.98 Hz），2.59 （H-7，1H，d，J＝3.50 Hz），1.61 （H-14，3H，s），1.51 （H-15，3H，s），1.15 （H-13，3H，d，J＝6.8 Hz）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 90.3 （C-5），81.1 （C-11），77.3 （C-9），74.8 （C-8），72.2 （C-6），71.6 （C-2），70.1 （C-1），61.2 （C-12），53.7 （C-7），51.2（C-10），32.7 （C-4），31.7 （C-3），30.4 （C-15），24.6 （C-14），16.8 （C-13）。

取代 基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 2.10（3H，t，J＝6.23 Hz，-CH3），1.95 （3H，d，J＝2.81 Hz，-CH3），1.61 （3H，s，-CH3），1.47 （3H，d，J＝4.97 Hz，-CH3），1.37 （3H，d，J＝17.42 Hz，-CH3），1.24 （3H，d，J＝7.22 Hz，-CH3），7.49-8.20 （10H，m，2×-C6H5）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ： 128.1-133.1 （-C6H5），170.7、170.0、169.6、166.2、164.9、164.9 （6×-COO-）。以上数据与文献［8］ 基本一致，故鉴定为6α，9β，12-三乙酰氧基-1β，8β-二苯甲酰氧基-2β-正癸酰氧基-β-二氢沉香呋喃。

化合物6： 无色无定形固体，HR-ESI-MSm／z：762.236 1 ［M+H］+（计算值 762.719 4，C36H44O17N），结 合 NMR 推测其 分子式 为C36H43O17N。根据1H-NMR 和13C-NMR 分析，该化合物具有β-二氢沉香呋喃型基本母核结构。母核1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 6.75 （H-6，1H，s），5.67 （H-1，1H，s），5.55 （H-9，1H，s），5.27（H-2，1H，m），4.77 （H-3，1H，d，J＝2.7 Hz），4.55，4.80 （H-12，2H，dd，J＝13.09／14.93 Hz），3.73，6.03 （H-15，2H，dd，J＝11.40／11.66 Hz），3.02 （H-7，1H，br，s），1.62 （H-14，3H，s），1.60（H-13，3H，s）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：196.3 （C-8），94.5 （C-5），85.6 （C-11），78.2 （C-9），75.0 （C-3），73.8 （C-6），71.7 （C-1），70.4（C-4），70.3 （C-15），68.2 （C-2），61.0 （C-7），60.1 （C-12），52.4 （C-10），23.0 （C-13），19.8（C-14）。

取代 基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 4.70（H-7′，q，J＝8.75／17.4 Hz），8.10 （H-4′，d，J＝7.02 Hz），8.69 （H-6′，d，J＝3.29 Hz），7.26 （H-5′，dd，J＝7.92／14.92 Hz），2.59 （H-8′，q，J＝7.99 Hz），1.40 （H-9′，d，J＝6.9 Hz），1.19 （H-10′，d，J＝6.04 Hz），2.22、2.15、2.09、2.04、1.88 （15H，5×s，5×-CH3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ： 174.0 （C-11′），168.5 （C-12′），164.2（C-2′），151.1 （C-6′），137.6 （C-4′），125.4 （C-3′），121.3 （C-5′），44.5 （C-8′），36.2 （C-7′），11.0 （C-9′），8.7 （C-10′），169.6、169.58、169.4、168.91、168.6 （5 ×-CO-），19.8、19.2、19.1、19.0、18.8 （5×-CH3）。以上数据与文献［9］ 基本一致，故鉴定为卫矛羰碱。

化合物7： 白色无定形固体，HR-ESI-MSm／z：697.245 4 ［M+Na］+（计算值 697.663 3，C34H42NaO14），结 合 NMR 推测其 分子式 为C34H42O14。根据1H-NMR 和13C-NMR 分析，该化合物具有β-二氢沉香呋喃型基本母核结构。母核1HNMR （500 MHz，CDCl3）δ： 6.18 （H-6，1H，s），5.72 （H-1，1H，d，J＝3.41 Hz），5.67 （H-2，1H，d，J＝3.42 Hz），5.35 （H-9，1H，d，J＝7.76 Hz），5.05／4.54 （H-12，A／Bq，2H，J＝13.07／13.08 Hz），2.58 （H-7，1H，m），2.02-2.32 （H-3，2H），2.02-2.32 （H-8，H-3，2H），1.57 （H-15，3H，s），1.55 （H-14，3H，s），1.50 （H-13，3H，s）；13CNMR （150 MHz，CDCl3）δ： 90.1 （C-5），84.3 （C-11），78.2 （C-9），70.8 （C-6），69.6 （C-4），68.7（C-2），68.0 （C-1），65.3 （C-12），55.1 （C-10），49.0 （C-7），41.4 （C-3），34.2 （C-8），27.8 （C-15），25.8 （C-14），24.3 （C-13）。

取代基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 2.14、2.31 （6H，2×s，2×-CH3），2.42 （1H，m，-CH-），1.51 （2H，m，-CH2-），1.13 （3H，d，J＝6.49 Hz，-CH3），0.83 （3H，t，J＝7.05 Hz，-CH3）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 20.16、19.78、19.07 （3×CH3），170.99、170.23、169.77、166.52、165.58（5×-COO-）。以上数据与文献［6］ 基本一致，故鉴定为6α，12-二乙酸基-1β，9α-二乙酸（β-呋喃羧氧基） -4α-羟 基-2β-2-甲基丁 酯-β-二氢沉 香呋喃。

化合物8： 白色无定形固体，HR-ESI-MSm／z：653.258 7 ［M+H］+（计算值 653.683 5，C35H42O12），结合NMR 推测其分子式为C35H40O12。根据1H-NMR 和13C-NMR 分析，该化合物具有β-二氢沉香呋喃型基本母核结构。母核1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 6.89 （H-6，1H，s），5.77 （H-1，1H，d，J＝2.97 Hz），5.65／4.67 （H-12，ABq13，2H，J＝14.3／13 Hz），5.65 （H-8，1H，dd，J＝3.8／6.2 Hz），5.54 （H-9，1H，d，J＝5.53 Hz），4.29（H-2，1H，s），2.59 （H-7，1H，d，J＝3.18 Hz），1.59 （H-14，3H，s），1.47 （H-15，3H，s），1.21（H-13，3H，d，J＝7.13 Hz）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：90.9 （C-5），80.6 （C-11），80.0 （C-9），74.8 （C-8），72.3 （C-6），70.8 （C-2），67.5 （C-1），61.1 （C-12），53.3 （C-7），51.5 （C-10），33.1（C-3），33.1 （C-4），29.4 （C-15），23.3 （C-14），15.9 （C-13）。

取代基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 2.14、1.95、1.42 （3×H，3×s，3×-CH3），2.60 （1H，brs，-OH），7.4-8.13 （10H，m，2 ×-C6H5）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 20.2、19.8、19.1 （3 ×CH3），128.1-133.1 （-C6H5），171.0、170.2、169.8、166.6、165.6 （5×-COO-）。以上数据与文献［7］ 基本一致，故鉴定为6α，9β，12-三乙酰氧基-1β，8β-二苯甲酰氧基-2β-羟基-β-二氢沉香呋喃。

化合物9： 白色无定形固体，HR-ESI-MSm／z：697.245 6 ［M+Na］+（计算值 697.663 3，C34H42NaO14），结 合 NMR 推测其 分子式 为C34H42O14。根据1H-NMR 和13C-NMR 分析，该化合物具有β-二氢沉香呋喃型基本母核结构。母核1HNMR （500 MHz，CDCl3）δ： 6.15 （H-6，1H，s），5.66 （H-1，1H，s），5.66 （H-2，1H，s），5.29 （H-9，1H，d，J＝6.62 Hz），5.23／4.43 （H-12，ABq13，2H，J＝12.3／12.3 Hz），2.53 （H-7，1H，m），2.11-2.36 （H-3，2H），2.11-2.36 （H-8，2H），1.56 （H-15，3H，s），1.49 （H-14，3H，s），1.47（H-13，3H，s）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：90.5 （C-5），84.5 （C-11），78.0 （C-9），69.9 （C-4），69.5 （C-6），69.0 （C-2），68.3 （C-1），65.6（C-12），54.9 （C-10），49.0 （C-7），40.8 （C-3），34.1 （C-8），28.0 （C-15），25.3 （C-14），24.6（C-3）。

取代基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 2.30、2.11 （6H，2×s，2×-CH3），1.98 （1H，m，-CH-），1.25 （2H，m，-CH2-），0.83 （3H，d，J＝6.79 Hz，-CH3），0.60 （3H，t，J＝7.38 Hz，-CH3）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 19.98、19.62 （2×-CH3），174.52、171.17、170.98、170.72、161.76 （5×-COO-）。以上数据与文献 ［6］ 基本一致，故鉴定为6α，12-二乙酸基-1β，9α-二乙酸 （β-呋喃羧氧基） -4α-羟 基-1β-2-甲基丁 酯-β-二氢沉 香呋喃。

化合物10： 白色无定形固体，HR-ESI-MSm／z： 696.268 9 ［M+H］+（计算值696.719 4，C37H44O13），结合NMR 推测其分子式为C37H43O13。根据1H-NMR 和13C-NMR 分析，该化合物具有β-二氢沉香呋喃型基本母核结构。母核1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 6.89 （H-6，1H，s），5.83 （H-1，1H，d，J＝2.78 Hz），5.81 （H-2，1H，m），5.67（H-8，1H，dd，J＝3.8／6.3 Hz），5.55 （H-9，1H，d，J＝5.15 Hz），5.46／4.60 （H-12，ABq13，2H，J＝5.1／12.4 Hz），2.59 （H-7，1H，J＝3.25 Hz），1.59 （H-14，3H，s），1.47 （H-15，3H，s），1.17（H-13，3H，d，J＝7.15 Hz）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：90.1 （C-5），80.8 （C-11），77.4 （C-9），74.5 （C-8），72.0 （C-6），70.6 （C-1），70.6 （C-2），60.5 （C-12），53.3 （C-7），50.9 （C-10），32.8（C-4），30.8 （C-3），30.6 （C-15），23.1 （C-14），15.5 （C-13）。

取代基1H-NMR （500 MHz，CDCl3）δ： 2.15、2.09、1.98、1.42 （4×3H，4×s，4×-CH3），7.39-8.13 （10H，m，2×-C6H5）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ： 20.0、20.0、19.6、18.9 （4×-CH3），170.8、170.0、170.0、169.6、166.3、164.9 （6×-COO-），128.1-133.1 （-C6H5）。以上数据与文献［7］ 基本一致，故鉴定为6α，9β，12-四乙酰氧基-1β，8β-二苯甲酰氧基-β-二氢沉香呋喃。

4 药理活性筛选

采用MTT 法［10-14］研究10 种化合物对Hela 细胞的体外抑制作用，采用5-氟尿嘧啶做阳性对照。取对数期生长的Hela 细胞，经胰酶消化，用RPMI 1640 完全培养基稀释成单细胞悬液，调整细胞密度为5×104个／mL，以每孔100 μL 加到96 孔板中，常规培养过夜。次日加入以上10 个受试化合物并 设5 个不同 质量浓 度 （0.1、1、5、10、15 μg／mL） 作用24 h 后终止培养，设置正常组并分别设置6 个复孔。于每孔中分别加入10 μL MTT试剂，继续培养4 h 后，弃去上清液，每孔加入DMSO 100 μL，轻度振荡10 min 后，用酶标仪测定各孔在490 nm 下的吸光度，计算细胞增值率和IC50值。结果显示化合物6 对Hela 细胞有一定的抑制作用，其IC50为9.76 μg／mL，其他化合物没有抑制作用，结果见表1。

表1 各化合物对Hela 细胞的抑制作用Tab.1 Inhibition of various compounds on Hela cells

5 讨论

丝棉木是民间常用的活血通络的草药之一，关于其化学成分及活性筛选的研究较少，但关于β-二氢沉香呋喃类化合物的研究较多，张海艳等［15］从苦皮藤种子中提取了6 个β-二氢沉香呋喃多醇酯类化合物；朱辉等［16］发现卫矛属植物中含有β-二氢沉香呋喃类化合物；赵兴增等［17］研究了永瓣藤茎叶中的β-二氢沉香呋喃型的化合物；贺正山等［18］对灯油藤进行了研究，发现种子中β-二氢沉香呋喃型化合物较多。

本研究从中分离得到10 个化合物，其中化合物1 为新化合物。采用体外抗肿瘤的方法，研究10 个化合物对Hela 细胞的抑制作用，其中化合物6 对Hela 细胞有抑制作用，其他化合物对Hela 细胞无抑制作用，表明化合物6 对于Hela 细胞的抑制可能有良好的发展前景。