不同香型白酒添加植物提取物动物醉酒实验研究

倪书干，杨 强，童国强，罗高建，石莹莹，石 姣，朱美玲，乐细选

（劲牌有限公司，湖北大冶 435100）

通过前期的人群食用测试[3]研究，已经得出浓香型白酒、清香型白酒、酱香型白酒、复合香白酒的最佳陈酿期[4-9]和比例的基础酒配方，具体为：小曲清香型白酒（4 年陈+40%原酒）、酱香型白酒（7 年酱酒+85%原酒）、浓香型（10 年陈+100%原酒）、复合香型（黑荞基础酒）。再通过动物试验对人群食用测试结果进行验证及研究，具体为：通过观察不同香型白酒，添加不同单药提取物的醉酒度变化，对比研究不同单药提取物、不同香型分别对酒体醉酒度的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

酒样：小曲清香型白酒，酱香型白酒，浓香型白酒，复合型白酒，酒精，市售。

实验动物：小鼠，雄性，18～22 g。

仪器设备：电子天平（ME2002E/02，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）、灌胃针、一次性注射器、一次性手套、一次性口罩、温湿度计、低温冷冻离心机（1-14K，sigma），冰点渗透压仪（德国罗泽，OM815）。

提取物样品规格见表1。

表1 提取物样品规格

1.2 试验方法

1.2.1 酒体样品处理

1.2.1.1 小曲清香型白酒

按4 年陈小曲清香型白酒+40%原酒比例调配5 L，分装6 瓶/500 mL，分别加入苦荞提取物（10/万）、葛根提取物（2/万）、枸杞子提取物（1/万）、山楂提取物（4/万）、罗汉果提取物（1/万），600 r/min搅拌30 min，过滤，采用201、203活性炭（各5/万）进行处理[10-12]，同时不添加提取物（201、203 各2.5/万处理）作为对照。

1.2.1.2 酱香型白酒

按7 年陈酱香型白酒+85%原酒比例调配5 L，分装6 瓶/500 mL，分别加入苦荞提取物（10/万）、葛根提取物（2/万）、枸杞子提取物（1/万）、山楂提取物（4/万）、罗汉果提取物（1/万），600 r/min 搅拌30 min，过滤，采用201、203 活性炭（各5/万）进行处理，同时不添加提取物（201、203 各2.5/万处理）作为对照。

1.2.1.3 浓香型白酒

按10年陈浓香型白酒+100%原酒比例调配5 L，分装6 瓶/500 mL，分别加入苦荞提取物（10/万）、葛根提取物（2/万）、枸杞子提取物（1/万）、山楂提取物（4/万）、罗汉果提取物（1/万），600 r/min 搅拌30 min，过滤，采用201、203 活性炭（各5/万）进行处理，同时不添加提取物（201、203 各2.5/万处理）作为对照。

1.2.1.4 复合香型白酒

采用黑荞基础酒调配5 L，分装6 瓶/500 mL，分别加入苦荞提取物（10/万）、葛根提取物（2/万）、枸杞子提取物（1/万）、山楂提取物（4/万）、罗汉果提取物（1/万），600 r/min 搅拌30 min，过滤，采用201、203 活性炭（各5/万）进行处理，同时不添加提取物（201、203各2.5/万处理）作为对照。

1.2.1.5 酒精对照组酒体

采用42%vol 酒精为基酒调配5 L，分装6 瓶/500 mL，分别加入苦荞提取物（10/万）、葛根提取物（2/万）、枸杞子提取物（1/万）、山楂提取物（4/万）、罗汉果提取物（1/万），600 r/min 搅拌30 min，过滤，采用201、203 活性炭（各5/万）进行处理，同时不添加提取物（201、203 各2.5/万处理）作为对照。同时制备50%vol 酒精为基酒，作为小曲清香型的空白对照。

1.2.2 酒体给药信息

鉴于试验样品涉及到5 种单个提取物，并对应4 种香型酒体，加上对照空白样品，样品组别较多,耗材较大,经讨论决定，实验分三阶段进行，具体如下：

1.2.2.1 第一阶段试验酒体给药信息

第一阶段实验主要考察添加高剂量（用H 表示）单药提取物的浓香酒体与酒精对照，及各香型空白酒体的动物醉酒度[13-16]差异，共计15 组，具体见表2。

1.2.2.2 第二阶段试验酒体给药信息

第二阶段实验主要考察添加高剂量单药提取物对小曲清香型、复合香型酒体的动物醉酒度变化影响，共计14组，具体见表3。

1.2.3 第三阶段试验酒体给药信息

第三阶段实验主要考察添加高剂量单药提取物对酱香型酒体，及提取物剂量（中剂量用M 表示）对不同香型酒体的饮后醉酒度[17-18]变化影响，共计13组，具体见表4。

1.2.4 实验步骤

实验动物购入后，适应性喂养5 d 之后进行实验。参考38%vol 酒体灌胃剂量确定为0.16 mL/10 g·bw，在确定酒精摄入量一定的情况下，计算不同酒精度酒体的灌胃剂量。实验前12 h 禁喂食，自由饮水。按体重随机分组，并用苦味酸进行标记。按体重给予不同样品，依次灌胃后观察小鼠醉酒的潜伏期（从开始灌胃到入睡时间，即翻正反射消失），沉醉期（从入睡到苏醒时间，即翻正反射恢复），并做好记录。灌胃后观察其翻正反射，从灌胃至结束共5 h，翻正反射后进行摘眼球取血（按照灌胃顺序），静置30 min 后，以3500 r/min、15 min 离心，吸取上清液后-20 ℃冰箱保存。渗透压测定时室温解冻，直接吸取上清液进行检测。实验数据采用统计软件spss19.0进行单因素方差分析。

表2 酒体给药信息(n=12)(第一阶段试验)

表3 酒体给药信息(n=12)(第二阶段试验)

表4 酒体给药信息(n=12)(第三阶段试验)

2 结果与分析

2.1 第一阶段试验结果及分析

2.1.1 第一阶段试验结果（表5）

2.1.2 第一阶段试验结果分析

2.1.2.1 潜伏期比较

与酒精（空白）组比较，添加提取物的酒精酒体的潜伏期均明显缩短（P＜0.01）；四大香型空白酒体的潜伏期均缩短，但四大香型酒体之间的潜伏期无统计学差异。与浓香（空白）组比较，浓香（枸杞H）组潜伏期明显延长（P＜0.01）。相同提取物添加的浓香酒体与酒精酒体比较，浓香（苦荞H）潜伏期缩短、浓香（葛根H）和浓香（枸杞H）潜伏期延长。

表5 不同单药提取物添加的酒精与浓香型酒体的动物醉酒对比研究结果(n=12只)(第一阶段试验)

2.1.2.2 沉醉期比较

与酒精（空白）组比较，添加提取物的酒精酒体的沉醉期均无统计学差异；清香型（空白）、酱香型（空白）组的沉醉期均延长（P＜0.05，P＜0.01）。与浓香型（空白）组比较，浓香型（罗汉果苷H）组沉醉期明显延长（P＜0.01），酱香型（空白）组的沉醉期延长。相同提取物添加的浓香酒体与酒精比较，浓香型（罗汉果苷H）组沉醉期明显延长。

2.1.2.3 未醒率和未醉率比较

浓香（苦荞H）、浓香（葛根H）、清香（空白）、酱香（空白）、复合香（空白）出现未醒现象，分别为1只、1 只、1 只、1 只、2 只；酒精（苦荞H）、酒精（葛根H）、浓香（枸杞H）、酱香（空白）出现未醉现象，分别为1 只、1 只、1 只、3 只；酱香（空白）出现1 只死亡现象。

2.1.2 第一阶段试验结果讨论

5 种单药提取物的添加，对酒精空白酒体的饮后醉酒度无明显影响，但对浓香型空白酒体的醉酒度存在一定差异。其中，浓香型酒体中添加枸杞提取物醉酒度明显减轻，添加罗汉果提取物醉酒度明显加重。四大香型（空白）酒体相互比较，酱香型（空白）酒体的以后醉酒度明显加重。

2.2 第二阶段试验结果及分析

根据第一阶段试验的结果与分析，相对其他香型，酱香型的饮后醉酒度较重，本阶段先重点考察清香型和浓香型空白酒体添加5 个单药提取物的酒体饮后醉酒度，暂不考察酱香型。具体见“1.2.2酒体给药信息”。

2.2.1 第二阶段试验结果（表6）

2.2.2 第二阶段试验结果分析

2.2.2.1 潜伏期比较

与50%vol酒精（空白）组比较，小曲清香型（空白）酒体潜伏期明显延长（P＜0.01）；与42%vol 酒精（空白）组比较，复合香型（空白）酒体潜伏期无统计学差异。与小曲清香型（空白）组比较，不同提取物添加清香型酒体潜伏期均缩短（P＜0.01）。与复合香型（空白）组比较，复合香（枸杞H）组潜伏期明显缩短（P＜0.05），其他提取物添加的复合香型酒体潜伏期无统计学差异。相同提取物添加的不同酒体间比较，各组潜伏期无差异。

2.2.2.2 沉醉期比较

与50%vol酒精（空白）组比较，小曲清香型（空白）酒体沉醉期缩短（P＜0.01）；与42%vol 酒精（空白）组比较，复合香型（空白）酒体沉醉期均延长。与50%vol 清香型（空白）组比较，苦荞、葛根、山楂、罗汉果提取物添加清香型酒体沉醉期均延长（P＜0.01）。与复合香型（空白）组比较，不同提取物添加复合香型酒体沉醉期均无统计学差异，其中添加罗汉果提取物的酒体沉醉期有缩短的趋势。相同提取物添加的不同酒体间比较，山楂和罗汉果提取物添加在复合香型酒体较清香型酒体，沉醉期缩短（P＜0.01），其余各组无差异。

表6 不同单药提取物添加的清香型与复合香型酒体的动物醉酒对比研究结果(n=12只)(第二阶段试验)

2.2.2.3 未醒率和未醉率比较

50%vol 酒精（空白）、小曲清香（葛根H）、小曲清香（山楂H）、复合香（苦荞H）、复合香（枸杞H）均出现未醒现象，分别为3 只、2 只、4 只、1 只、1 只；小曲清香型（空白）、小曲清香（枸杞H）、小曲清香（山楂H）、小曲清香（罗汉果苷H）、复合香（葛根H）、复合香（枸杞H）、复合香（山楂H）均出现死亡现象，分别为2只、2只、1只、1只、1只、2只、1只、2只。

2.2.3 第二阶段试验结果讨论

相同酒精度和相同酒精摄入下，50%vol小曲清香型与空白酒体的醉酒度比酒精好，添加苦荞、葛根、山楂、罗汉果单药提取物反而会加重其饮后醉酒度，添加枸杞提取物对酒体醉酒度较小；42%vol复合香型与空白酒体的醉酒度比酒精差，添加苦荞、葛根、枸杞、山楂、罗汉果单药提取物对酒体的饮后醉酒度影响较小，其中添加罗汉果提取物对酒体的醉酒度有改善的趋势。

2.3 第三阶段试验结果及分析

在完成添加5 种单药提取物对酒精对照酒体、42%vol 浓香型酒体、50%vol 清香型酒体、42%vol复合香型酒体的动物醉酒度影响后，第三阶段继续开展添加5 种单药提取物对53%vol 酱香型酒体的醉酒度考察试验，同时进一步考察对不同香型酒体的醉酒度有改善作用的单药提取物的添加剂量（高剂量、中剂量）的影响作用，共计13 组。具体见“1.2.2 酒体给药信息”。

2.3.1 第三阶段试验结果（表7）

2.3.1.1 潜伏期比较

与42%vol酒精（空白）组比较，酱香型（空白）、复合香型（罗汉果H）潜伏期均延长（P＜0.05），酱香型（葛根H）、酱香型（枸杞H）、浓香型（枸杞H）、浓香型（枸杞M）潜伏期均缩短（P＜0.05）。与53%vol酱香型（空白）组比较，酱香型（葛根H）、酱香型（枸杞H）、酱香型（山楂H）潜伏期均明显缩短（P＜0.01）。相同香型、不同提取物添加比例酒体潜伏期无差异。

2.3.1.2 沉醉期比较

与42%vol酒精（空白）组比较，酱香型（空白）、酱香型（苦荞H）、酱香型（山楂H）、酱香型（罗汉果H）、复合香型（罗汉果H）、复合香型（罗汉果M）沉醉期均缩短（P＜0.05）。与53%vol 酱香型（空白）组比较，酱香型（枸杞H）、酱香型（山楂H）、酱香型（罗汉果H）沉醉期均延长（P＜0.05）。相同香型、不同提取物添加比例酒体沉醉期无差异。

表7 不同单药提取物添加、不同香型酒体的动物醉酒对比研究结果(n=12只)(第三阶段试验)

2.3.1.3 未醒率和死亡率比较

酱香型（罗汉果H）、浓香型（枸杞M）、清香型（枸杞H）、清香型（枸杞M）、42%vol 酒精（空白）均出现未醒现象，分别为1 只、3 只、3 只、3 只、3 只；除酱香型（山楂H）、酱香型（罗汉果H）、清香型（枸杞H）外，其余各组均出现死亡现象。

2.3.1.4 第三阶段试验讨论

相同酒精摄入下，53%vol 酱香空白酒体的醉酒度比酒精好，添加枸杞、葛根、山楂、罗汉果单药提取物加重酒体的醉酒度，添加苦荞提取物对其酒体醉酒度影响较小。且初步显示，提取物添加比例对浓香型、清香型、复合香型酒体的醉酒度无影响。

3 结论

3.1 通过开展动物醉酒试验，完成苦荞、葛根、枸杞、山楂、罗汉果5 种单药提取物及比例对酒体醉酒度的影响研究。

3.2 研究显示，与酒精（空白）比较，酒精中添加5种单个提取物对酒体醉酒度均无明显影响。浓香型、清香型、复合香型、酱香型四大香型的空白酒体相互比较，酱香（空白）醉酒度有加重趋势。

3.3 研究显示，单药提取物的添加对不同香型酒体的醉酒度影响不同。其中，42%vol 浓香型酒体中添加枸杞单药提取物（浓香+枸杞）可明显改善其醉酒度，添加罗汉果单药提取物酒体（浓香+罗汉果）醉酒度较差；50%vol 清香型酒体中添加枸杞单药提取物（清香+枸杞）可明显改善其醉酒度，添加苦荞、葛根、山楂、罗汉果单药提取物酒体醉酒度较差；42%vol 复合香酒体添加罗汉果提取物（复合香+罗汉果）可改善醉酒度，添加苦荞、葛根、枸杞、山楂、罗汉果单药提取物对酒体的饮后醉酒度影响较小；53%vol 酱香型酒体中添加苦荞提取物的醉酒度较好，添加枸杞、葛根、山楂、罗汉果单药提取物其酒体醉酒度较差。

3.4 初步研究显示，在一定添加量范围内，提取物添加比例（高剂量、中剂量）对浓香型、清香型、复合香型酒体的醉酒度无影响。