紫外可见分光光度法测定胶囊剂中D-氨基葡萄糖盐酸盐的含量

刘士团，张 芳，刘春霖

(1.临沂海关综合技术服务中心，山东 临沂 276037；2.山东省鲁南眼科医院，山东 临沂 276002； 3.山东省食品药品检验研究院，山东 济南 250101)

盐酸氨基葡萄糖又称D-氨基葡萄糖盐酸盐，是甲壳素经盐酸降解后生成的一种还原糖[1-2]，进入人体后在胃内转化成游离的氨基葡萄糖而被身体利用[3]。氨基葡萄糖主要存在于机体的关节软骨中，可刺激软骨细胞产生正常多聚体结构的蛋白多糖，在一定程度上阻断骨性关节炎的病理发展过程，从而起到抗炎、改善关节功能的作用，对骨性关节炎具有很好的疗效[4-8]。在我国，氨基葡萄糖以盐酸盐、硫酸盐的形式申报为基本药物，以甲壳素、软骨素成份申报为保健食品。氨基葡萄糖是一种天然的氨基单糖，由于不稳定，一般被制成盐酸盐的形式以延长其稳定性[9]。D-氨基葡萄糖盐酸盐对人体有重要的生理功能，是保健食品和合成抗生素的主要原料[10]。目前D-氨基葡萄糖盐酸盐含量的测定方法主要有滴定分析法[11]、比色法[12]、高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)[13-15]等。本文采用《新药转正标准》第64册“国家食品药品监督管理局国家药品标准WS1-(X-090)-2005Z盐酸氨基葡萄糖胶囊”方法，对胶囊剂中D-氨基葡萄糖盐酸盐的含量进行测定。该方法准确度高，灵敏度好，操作简便快速，适用于胶囊剂中D-氨基葡萄糖盐酸盐含量的测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Mettler Toledo Ms十万分之一电子天平(德国梅特勒公司)；TU-1901紫外分光光度计(北京普析通用公司)；恒温水浴锅(上海树立仪器仪表有限公司)。

1.2 试剂试药

乙酰丙酮、无醛乙醇、碳酸钠、对二甲氨基苯甲醛、盐酸，均为分析纯；水，超纯水。

乙酰丙酮试液：取乙酰丙酮2 mL，加0.5 mol/L碳酸钠溶液至50 mL，临用前配置。

对二甲氨基苯甲醛试液：称取对二甲氨基苯甲醛0.8 g，加无醛乙醇15 mL及盐酸15 mL，摇匀。

D-盐酸氨基葡萄糖对照品：中国食品药品检定研究院，批号140649-201304，纯度100%。

对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的D-盐酸氨基葡萄糖对照品10.13 mg，置于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，备用。精密量取1.0 mL标准储备液，用水定容至10 mL，浓度为101.3 μg/mL，作为对照品溶液。

样品：某医药公司提供，三批编号分别为1、2、3。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

2.1.1 供试品溶液的提取

精密称取混合均匀的供试品内容物约0.07 g，置100 mL量瓶中，加水使盐酸氨基葡萄糖溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液1.0 mL，置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.2 供试品溶液的测定

精密量取供试品溶液3.0 mL，分别置25 mL具塞比色管中，补加水至5 mL，加乙酰丙酮试液1 mL，摇匀，置沸水浴中加热25 min，取出，用冰水迅速冷却后，加无醛乙醇3.0 mL，60℃水浴中保温10 min，再加对二甲氨基苯甲醛试液1.0 mL，强烈振摇，继续在60℃水浴中保温1 h，冷却至室温。用紫外分光光度计在525 nm波长处以试剂空白溶液为参比，1 cm比色皿测定供试品溶液吸光度值。计算，即得。

2.2 标准曲线溶液的制备及线性关系考察

精密量取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，置25 mL具塞比色管中，加水至5 mL，以下按“供试品溶液的测定”进行操作。用紫外分光光度计在525 nm波长处以试剂空白溶液为参比，测定吸光度值。以D-氨基葡萄糖盐酸盐质量(μg)为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=0.00707X-0.07932，相关系数r=0.9991。结果表明，D-氨基葡萄糖盐酸盐在20.26～121.56 μg范围内，线性关系良好。

2.3 重复性试验

精密称取同一批号混合均匀的供试品内容物6份，每份约0.07 g，置100 mL容量瓶中，以下按“供试品溶液的制备”进行操作。计算D-氨基葡萄糖盐酸盐平均含量为33.4 g/100g，RSD为0.90%。结果表明，该方法重复性良好。

2.4 加标回收率试验

精密称取同一批号混合均匀的供试品内容物9份，每份约0.035 g，做低、中、高(0.07 g样品含量的80%、100%、120%)三个水平的加标试验，每个水平3份样品。分别加入D-氨基葡萄糖盐酸盐对照品适量，以下按“供试品溶液的制备”进行操作，计算平均回收率，结果见表1。

表1 加标回收率试验结果

结果表明，加标试样的回收率为101.8%～103.4%，回收率良好。

2.5 检出限

参照GB/T 5009.1-2003《食品卫生检验方法 理化部分 总则》中附录A.2.2规定，检出限为3倍空白值的标准偏差(测定次数n≥20)相对应的质量，吸光法按国际理论与应用化学家联合(IUPAC)规定。检出限按下式进行计算：检出限=Ks/b；b-标准曲线回归方程中的斜率，/μg；s-20次空白值的标准偏差；K-一般为3。结果见表2。

表2 检出限试验结果

2.6 精密度试验

取标准曲线第四点显色后的溶液，按上述方法连续测定6次吸光度，计算平均吸光度为0.511，RSD为0.10%。结果表明，精密度良好。

2.7 样品含量测定

表3 样品测定结果

精密称取三批混合均匀的供试品内容物约0.07 g，置100 mL量瓶中，以下按“供试品溶液的制备”进行操作。计算样品中D-氨基葡萄糖盐酸盐含量，结果见表3。

通过对该方法线性范围、重复性试验、加标回收率试验、检出限、精密度试验、样品含量测定等方面进行验证，结果表明，该方法适用于胶囊剂中D-氨基葡萄糖盐酸盐含量的测定。

3 讨论

D-氨基葡萄糖盐酸盐的现有检测方法很多，但寻求一种适用性广，且快速、简单、准确的分析方法是我们的研究目标。现行有效的D-氨基葡萄糖盐酸盐国标检测方法为GB/T 20365-2006《硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量的测定 液相色谱法》，该方法以C18柱为分离柱，192 nm为检测波长。因目标化合物极性较大，所以出峰时间较早，和样品中的杂质峰、溶剂峰保留时间接近，而且部分制剂因辅料的影响难以分离，所以该方法对流动相和色谱柱的要求很高。本研究采用的紫外可见分光光度法，所需仪器设备简单、实验成本低，但需要严格控制时间、温度等实验条件。有文献报道，液相色谱串联质谱检测法(LC-MS/MS)在D-氨基葡萄糖盐酸盐的定量检测中取得了诸多进展，后续可对该方法做进一步的研究。