跨省调运活禽H7N9 亚型流感抗体监测与分析

田亚娜，刘广喜，谢 梅，李建强，张培训

（1.衡水市冀州区农业农村局 053200；2.保定冀中药业有限公司 071000）

2013 年初，我国首次发现人感染H7N9 流感病例，随后在活禽市场发现禽间H7N9 流感病毒感染。2017 年初，部分省份发现家禽高致病性H7N9 流感变异毒株，并引发多起家禽疫情。 同时， 人感染H7N9 病例骤增，2017 年1～6 月份全国人感染H7N9流感病例635 例， 死亡224 例。 为做好H7N9 流感防控工作，2017 年4 月份农业部（现农业农村部）发布第2516 号公告，对跨省调运活禽前要进行H7N9 检测， 血清学阳性的不得出具动物检疫合格证明。2017 年秋季以来，按照原农业部（现农业农村部）的要求，我省对家禽全面实施H7N9 流感免疫。2018 年12 月份，河北省农业农村厅印发 《河北省家禽H7N9 流感防治指导意见（2018-2020 年）》 的通知， 通知要求， 对跨省调运活禽要进行H7N9 流感免疫抗体检测，免疫抗体合格率达到70%以上，方可出具动物检疫合格证明；对跨省调运生长周期小于50 天的肉鸡肉鸭的，应提供H7N9 流感免疫档案。 2017 年4 月下旬以来，我区按照上级文件精神开展了H7N9 流感血清学检测。 2017 年4月份到2018 年12 月份检测未免疫H7N9 亚型禽流感疫苗的商品肉鸡12 个场75 批（每批30 份，以下相同）2250 份血清、商品肉鹅3 个场4 批次120 份血清，血凝抑制效价均小于4log2,全部为阴性；2019 年7～12 月份检测4 批次青年蛋鸡120 份血清，血凝抑制效价在6～10log2，免疫抗体合格率均为100%；2019 年9～11 月份检测末次免疫H7N9 亚型禽流感疫苗3～6 月后的淘汰蛋鸡5 批150 份血清，血凝抑制效价在7～10log2，免疫抗体合格率均为100%。 现将各类型禽免疫及抗体检测情况报告如下。

1 被采样禽免疫与采样情况

1.1 2017 年4 月份到2018 年12 月份未免疫H7N9 亚型禽流感疫苗禽血清采样情况。

1.1.1 商品肉鸡免疫与采样情况：被采样12 个商品肉鸡场，7 个场网上平养，5 个场立体笼养，均未免疫H7N9 亚型禽流感疫苗，40～42 日龄出栏前7～10d 抽血采样， 共采商品肉鸡12 个场75 批2250 份血清。

1.1.2 商品肉鹅免疫与采样情况：被采样3 个鹅场均树林下地面平养， 未免疫H7N9 亚型禽流感疫苗，70 日龄出栏前7d 左右抽样检测，共采4 批次120 份血清。

1.2 免疫H7N9 亚型禽流感疫苗禽的免疫与采样情况

1.2.1 跨省调运青年蛋鸡免疫情况与采样情况：2019 年7 月到2019 年12 月，对冀州区3 个鸡场的4 批青年蛋鸡进行H7N9亚型禽流感免疫抗体检测，4 批鸡的免疫与采样情况见下表1。

1.3 淘汰蛋鸡免疫与采样情况：2019 年10 月至11 月，对冀州区5 个鸡场的5 批淘汰鸡进行H7N9 亚型禽流感抗体检测，5批鸡的免疫与采样情况见表2。

2 实验材料与方法

2.1 检测方法：高致病性禽流感诊断技术GB/T 18936-2003血凝和血凝抑制（HA-HI）试验。

表1 青年蛋鸡免疫与采样情况表（每次每批30 份血清）

表2 淘汰蛋鸡免疫与采样情况表（每次每批30 份血清）

2.2 检测仪器：离心机、96 孔90°V 型血凝板、5～50μl 多道移液器、5-50μl 单道移液器、微量振荡器、生化培养箱等。

2.3 检测试剂

2.3.1 禽流感病毒H7 亚型血凝抑制试验抗原: 哈尔滨维科生物技术开发公司生产， 共用3 批， 批号分别是：2017004、2017006、2018003。2017 年3 月份至2018 年12 月用于检测未免疫商品肉鸡和商品肉鹅血清。

2.3.2 禽流感病毒H7 亚型（Re-2 株）血凝抑制试验抗原：哈尔滨国生生物科技股份公司生产，批号：20190415。 2019 年7月份至2019 年12 月份用于检测免疫过重组禽流感病毒H7N9H7Re-2 株灭活疫苗的鸡血清。

2.3.3 1%红细胞悬液

按照高致病性禽流感诊断技术GB/T 18936-2003 血凝和血凝抑制（HA-HI）试验要求制备1%红细胞悬液。

2.3.4 被检血清

上述1 中12 个商品肉鸡场75 个批次2250 份鸡血清，3 个商品肉鹅场4 批次120 份血清，3 个青年蛋鸡场4 个批次120 份血清，5 个淘汰蛋鸡场150 份血清，合计2640 份鸡血清。

2.3.5 PBS 液

按照高致病性禽流感诊断技术GB/T 18936-2003 血凝和血凝抑制（HA-HI）试验要求自制pH7.2 0.01mol/LPBS 液。

3 抗体检测结果

3.1 2017 年4 月 份 至2018 年12 月 份 检 测75 批 次2250 份商品肉鸡血清，血凝抑制效价全部＜4log2，均为阴性。

3.2 2017 年5 月份至2018 年9 月份检测3 个鹅场4 批120份血清，血凝抑制效价全部＜4 log2，均为阴性。

3.3 2019 年7 月份到2019 年12 月份检测免疫青年蛋鸡4批次120 份血清。A 鸡场2 批次60 份血清血凝抑制效价均≧10 log2， 免疫抗体合格率均为100%;B 鸡场血凝抑制效价在6～8 log2 ，平均血凝抑制效价为7.29 log2;C 鸡场血凝抑制效价在7～10 log2 之间，平均血凝抑制效价为7.93 log2。 B、C 两鸡场免疫抗体合格率均为100%。

3.4 2019 年10 月-2019 年11 月份检测淘汰蛋鸡5 批150份血清。 D 养鸡场H7N9 血凝抑制效价在9～10 log2，平均血凝抑制效价为9.87log2；E 养鸡场H7N9 血凝抑制效价在7～10 log2、平均血凝抑制效价为8.87log2；F 养鸡场H7N9 血凝抑制效价在9～10 log2， 平均血凝抑制效价为9.67log2；G 养鸡场H7N9 血凝抑制效价在8～9 log2， 平均血凝抑制效价为9.47log2 ；H 养鸡场H7N9 血凝抑制效价均≥10 log2 。这5 批淘汰蛋鸡的免疫抗体合格率均为100%。

4 结果分析

4.1 从实验结果3.1 和3.2 可以看出，2017 年4 月份到2018年12 份期间， 共检测未免疫的12 个场75 批次2250 份血清，3个肉鹅场4 批次120 份血清，血凝抑制效价均小于4log2,全部为阴性。这说明，2017 年4 月份到2018 年12 月份期间冀州区内商品肉鸡和商品肉鹅未感染H7N9 亚型流感或冀州区内无H7N9亚型流感流行。

4.2 从实验结果3.3 可以看出，2019 年检测的A 场2 批60份血清H7N9H7Re-2 血凝抑制效价都≥10log2，血凝抑制效价水平高，且比较整齐，说明所用疫苗质量好，加强免疫效果好。 仅做过一次政府采购禽流感疫苗的B、C 两场各30 份鸡血清血凝抑制抗体效价分别6～8log2 和7～10log2, 免疫抗体合格率均达到100%，免疫抗体效价也较高。在此以前的高致病性禽流感免疫抗体检测工作中，对于仅做过1 次高致病性禽流感疫苗免疫的鸡，免疫21d 后抽血进行免疫抗体检测，血凝抑制效价往往水平低，参差不齐， 没有一次血凝抑制效价全部合格的情况， 无论是H5亚型禽流感，还是H7 亚型禽流感。

4.3 从实验结果3.4 中可以看出，D、E、F、G 养鸡场春天3～4月份末次免疫后至10～11 月采血做H7N9 抗体检测，各批鸡平均血凝抑制效价在8.87～9.87log2， 且免疫抗体合格率均为100%，说明H7N9 免疫抗体水平高，持续时间长达6～7 月，这与开产前的基础免疫效果分不开的。H 养鸡场末次免疫间隔3 个月的血凝抑制效价≧10 log2，免疫抗体水平高，还有待跟踪检测。

4.4 本实验仅检测了3 个青年蛋鸡场的4 批青年鸡120 份血清和5 个蛋鸡场的5 批150 份淘汰鸡血清的H7N9 免疫抗体，检测批次和检测分数均较少， 还有待于增加检测批次和检测数量，更进一步摸清H7N9 免疫抗体的变化规律。 由于目前养鸡生产的实际情况，也未能做对照实验。

4.5 免疫抗体检测结果仅能代表疫苗株的免疫抗体水平，如流行毒株和疫苗毒株不匹配， 还不能真正代表鸡体对当前流行疾病的实际免疫能力。 建议：兽医工作者根据禽疫病流行情况及时开展疫病检测，为动物疫病防控工作提供科学依据。