大豆磷脂中α-生育酚的检测方法学研究

徐璠峰，王 翠，时 晨

（南京威尔药业股份有限公司，江苏南京 210042）

大豆磷脂不仅具有较强的乳化、润湿、分散作用，还在促进体内脂肪代谢、肌肉生长、神经系统发育和体内抗氧化损伤等方面发挥很重要的作用。大豆磷脂可以抑制肠内胆固醇的吸收，故能降低血液胆固醇和抗脂肪肝的作用。此外本品还能促进细胞增殖，使其活力旺盛。主要用于动脉粥样硬化，急、慢性肝炎，脂肪肝，肝硬化，神经衰弱等。制成软膏可用于慢性溃疡等。

大豆磷脂作为药用辅料目前已收录于中国药典2015版，EP9.0和USP40中，对相关质量指标提出了更高的要求，但在这几国药典中，均未对大豆磷脂中的抗氧剂做出要求，抗氧剂的加入会对以大豆磷脂为辅料的制剂稳定性和安全性产生未知的影响，所以增加抗氧剂的检测是必不可少的。

本文主要介绍一种抗氧剂α-生育酚的检测方法，通过HPLC 的分析手段，能准确、迅速、简便地分析出大豆磷脂中α-生育酚的含量。

1 试验样品

甲醇，ACS 公司，63Y1808AD，色谱级；乙醇，ACS 公司，43Y1803AT，色谱级；α-生育酚，阿拉丁，K1729039，分析纯；大豆磷脂，上海太伟。

2 方法验证

2.1 专属性和系统适用性实验

分别取空白溶剂、α-生育酚对照溶液各10µL，分别注入液相色谱仪，结果空白溶剂在生育酚出峰位置没有干扰。

2.2 检测限和定量限

取α-生育酚对照溶液逐级稀释至S/N 约为10作为定量限，S/N 约为3作为检测限。结果分析：α-生育酚达到0.1226µg/ml（24.52×10-6）时可以被检出，浓度达到0.306 5µg/mL（61.3× 10-6）时可以被定量。如表1所示：

表1 α-生育酚检测限和定量限

2.3 线性范围

精密称取α-生育酚对照品0.103 2g，置于100mL 容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度作线性储备液（α-生育酚1.032mg/ml），取此溶液适量，加乙醇分别稀释至不同浓度的溶液，作为不同浓度的对照溶液，分别取不同浓度的混合对照溶液10µL 注入液相色谱仪，实验结果显示：y=1.021x-1.364，R2=0.999，表明线性良好。

2.4 进样精密度实验

精密称取α-生育酚对照品0.1032g，置于100ml 容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度作储备液（α-生育酚1.032mg/ml），取α-生育酚对照品储备液0.25ml 至50ml 容量瓶，加乙醇溶解并稀释至刻度即得对照溶液（α-生育酚5.16µg/ml）。取对照溶液连续进样6针，考察进样精密度，结果表明α-生育酚进样的相对标准偏差RSD 小于0.48%，说明测定数据间的波动性小，即本方法精密度试验符合要求。如表2所示。

表2 α-生育酚进样精密度

2.5 重复性

取大豆磷脂（R161-150-1）样品100mg，精密称定，置20ml 量瓶中，加乙醇适量使溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液，按照测定方法进行测定，平行操作6份，计算α-生育酚的含量，均未检出。结果表明，该方法重复性良好。

2.6 回收率试验

精密称取α-生育酚对照品0.106 0g，置于100mL 容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度作储备液（α-生育酚1.060mg/mL），取α-生育酚对照品储备液1mL 至20mL 容量瓶，加乙醇溶解并稀释至刻度即得对照溶液（α-生育酚53µg/mL）。取大豆磷脂（R161-150-1）样品100mg，精密称定，置20mL量瓶中，加溶剂适量使溶解，分别加入α-生育酚对照品溶液1.2、1.0、0.8mL，加溶剂稀释至刻度，作为供试品溶液，按外标法以峰面积计算测得量，计算回收率，每个水平平行操作3份，计算回收量和回收率。如表3所示。

表3 α-生育酚加样回收率

结果表明：相对标准偏差RSD 为1.17%，该方法测定α-生育酚，回收率良好。

2.7 α-生育酚方法的建立

2.7.1 供试品溶液的制备取本品100mg，精密称定，置20mL 量瓶中，加乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.7.2 对照溶液的制备精密称取α-生育酚对照品适量，加乙醇定量稀释至α-生育酚浓度为5µg/mL，作为对照品溶液。

2.7.3 限度

按外标法以峰面积计算，α-生育酚不得过1 000×10-6。

2.8 样品检测

按已建立的方法检测本品中的α-生育酚，检测太伟和我司产品，结果显示：太伟和我司产品Well（R161-150-1）中α生育酚均未检出。

3 结束语

上述大豆磷脂中α-生育酚含量的检测方法在专属性、线性和范围、检测限、定量限、准确度、精密度等方面均表现良好。