高毒力肺炎克雷伯菌耐药情况和分子特征研究

李丽娟，陈丹娜，谢小燕

（东莞市人民医院 检验科，广东 东莞523000）

肺炎克雷伯菌 （Klebsilla pneumoniae，KP）属于常见的革兰氏阴性杆菌，在院内感染和社区感染的致病菌中，肺炎克雷伯菌属于常见的细菌之一。近年来细菌耐药监测显示，肺炎克雷伯菌的分离率在不断增加，在患者机体免疫力下降的时候，可能会出现病菌的转移，造成其他系统出现感染的情况［1］。1986年，高毒力肺炎克雷伯菌 （hypervirulentKlebsilla pneumoniae，hvKP）在台湾被首次报道后，由hvKP引起的患者感染逐年上升，与医院获得性感染的 “经典”肺炎克雷伯菌 （classicKlebsiella pneumoniae，cKP）相比，hvKP所致感染区别在于［2］：主要导致流动性、健康人群严重感染；易发生感染的远处转移和扩散，如脾脓肿、肺炎、眼内炎和脑膜炎等，且患者更容易出现血液感染，不能及时控制将发展成为多脏器衰竭、感染性休克，威胁患者的生命。本研究分析东莞地区高毒力肺炎克雷伯杆菌的耐药情况和分子分型，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 研究菌株收集2018年6月至12月东莞市人民医院临床非重复标本分离的255株肺炎克雷伯菌菌株作为试验菌株，并剔除同一个患者相同部位的重复菌株。

1.2 拉丝试验将分离的菌株接种于哥伦比亚血琼脂平板上，放置在温度37℃恒温箱中孵育24 h，使用接种环在菌落表面轻挑，当挑起过程中出现丝状物，且丝状物大于5 mm可判定拉丝试验阳性，则为hvKP。

1.3 药敏试验采用Vitek2 Compact全自动微生物分析系统进行常用抗菌药物的敏感性检测，按照美国临床和实验室标准协会 （2019版）［3］推荐标准进行判读。

1.4 血清型检测采取煮沸法提取DNA，应用PCR技术对肺炎克雷伯菌荚膜血清型进行检测［4］。荚膜血清型包括K1、K2、K5、 K20、 K54、 K57。

1.5 统计学分析采用SPSS 19.0进行数据分析，计数资料以百分比表示，应用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 hvKP菌株检出率收集2018年6月至12月本院临床非重复标本分离的255株肺炎克雷伯菌菌株，拉丝阳性有80株，即hvKP菌株检出率为31.37%。

2.2 血清分型hvKP菌株中血清型K2型22株 （27.50%），K1型20株 （25.00%），K57型18株 （22.50%），K54型11株（13.75%）， K5型5株 （6.25%）， K20型4株 （5.00%）。 见表1。

表1 肺炎克雷伯菌的血清分型 ［n（%）］

2.3 hvKP与cKP的抗生素敏感性比较除对氨苄西林天然耐药之外，hvKP对氨苄西林-舒巴坦、头孢唑啉、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星及复方新诺明的耐药率均低于cKP，差异均有统计学意义 （均P＜0.05）；hvKP的ESBLs检出率为 4.9%，低于cKP的27.1%，差异有统计学意义 （P＜0.05）。见表2。

表2 高毒性与经典肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物的耐药率 （%）

3 讨论

在20世纪90年代，台湾研究者首次发现了一例高致病的肺炎克雷伯菌导致的肝脓肿，高毒力肺炎克雷伯菌 （hvKP）才逐渐被人们认知，该菌株存在高毒性、高侵袭性，患者感染后病情发展迅速，易出现全身转移性病灶和感染性休克［5］。临床上hvKP与传统经典的肺炎克雷伯菌的感染情况类似，均以肺部感染和消化道感染多见。

本研究对我院肺炎克雷伯菌感染的患者进行菌株分离，结果显示hvKP菌株中检测出6种血清型，分别为K1、K2、K5、K20、K54、K57，其中以K2型和K1型为主，分别占27.50%（22／80） 和 25.00% （20／80）。 目前研究［6］发现肺炎克雷伯菌有78种血清型，不同区域的肺炎克雷伯菌的血清型有区别，亚洲地区以K1、K2、K54、K57型最常见，其中K1型和K2型具有高毒力；本研究与汪强等［7］的研究一致，hvKP以K2型和K1型为主。K1型和K2型hvKP与其他分型的hvKP相比较，可以更耐受中性粒细胞的水解吞噬等作用，并且K2型菌株产生的荚膜还能发挥逃避吞噬的作用，因此K1型和K2型更容易发生肝脓肿进而转移诱发全身感染甚至是感染性休克［8］。抗生素敏感性检测显示，hvKP除对氨苄西林天然耐药之外，对氨苄西林-舒巴坦、头孢唑啉、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星及复方新诺明的耐药率均显著低于cKP（P＜0.05）；hvKP的ESBLs检出率为4.9%，显著低于cKP的27.1% （P＜0.05）。ESBLs是一种超广谱β内酰胺酶，研究［9］显示hvKP产生的ESBLs可以水解青霉素、一代头孢、二代头孢、三代头孢、单环内酰胺类抗生素，发挥耐药作用。

综上所述，东莞地区hvKP的血清型以K2型、K1型为主，对常用抗生素敏感，可检测出ESBLs阳性菌株，临床上可据此给予hvKP患者早期诊断和治疗，改善预后。