MTHFR C677T基因多态性对H型高血压患者叶酸降低同型半胱氨酸治疗的影响

张云飞，徐炳欣，赵艳，吴帆，杨琼琼

(许昌市中心医院，河南 许昌 461000)

H型高血压是指合并高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia，HHcy)的原发性高血压，约占我国成年高血压患者的75%[1]。高血压和HHcy均为心脑血管病的独立危险因素[2]，中国人群高血压与HHcy同时存在，将使心血管事件发生风险比单纯高血压病患者高5倍[3]。既往研究显示，MTHFRC677T基因多态性与HHcy发生之间的关系密切[4]。然而，MTHFRC677T基因多态性是否会影响H型高血压患者应用叶酸降低同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)的治疗效果，目前尚缺少临床研究证据，且该基因多态性在不同地区人群中的分布有所不同[5]。基于此，本研究检测河南中部地区H型高血压患者MTHFRC677T的基因多态性，探讨MTHFRC677T基因多态性对叶酸降低Hcy治疗的影响，以期为当地高血压的防治及降低Hcy治疗工作提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将2018年6—12月在许昌市中心医院心血管内科就诊的260例河南中部汉族H型高血压患者作为研究对象。年龄28～51岁，平均(38.4±7.5)岁，男152例，女108例。纳入标准：H型高血压患者，其临床诊断符合中国高血压防治指南(2018年修订版)[6]。排除标准：(1)入院就诊前1个月内曾规律服用叶酸及其他维生素类药物；(2)严重肝肾功能不全者；(3)合并恶性肿瘤患者；(4)妊娠期妇女。依据MTHFRC677T基因检测结果，将患者分为A、B、C 3组，基因类型分别为CC、CT、TT型。记录3组患者年龄、性别、血浆Hcy、合并疾病等临床资料。该研究通过医院伦理委员会的批准并与患者签署知情同意书。

1.2 治疗方法 所有患者入组后接受常规降血压治疗。降低血浆Hcy治疗方案：口服给予叶酸片(常州制药厂有限公司，国药准字H32023302)，每次5 mg，每日1次。所有患者随访6个月。

1.3 检测方法 采用荧光染色原位杂交技术测定MTHFRC677T基因多态性。用1X NH4Cl 预处理液处理血样，离心、制备白细胞悬液、加入MTHFRC677T基因(rs1801133)耀金分试剂(北京华夏时代基因科技发展有限公司)，将样本置入TL998A 荧光检测仪(西安天隆科技有限公司生产)，其结果由天隆700软件分析和自动判读，给出MTHFRC677T基因SNP 信息。采用化学发光法检测血浆Hcy浓度，Hcy检测试剂盒购自美康生物科技股份有限公司(产品编号H422T2)。以上步骤严格按试剂盒和检验仪器标准操作规程操作。

1.4 观察指标 记录3组服用叶酸前后血浆Hcy检测结果，计算3组治疗6个月后降低血浆Hcy治疗有效率，本研究以血浆Hcy水平<15 μmol·L-1定义为降低Hcy治疗有效[7]。观察3组患者饮酒史、熬夜史、吸烟史对降低血浆Hcy治疗的影响，其中患者住院前3个月内平均每周饮酒次数>2次定义为有饮酒史，平均每周4 d及以上晚上10点以后入眠定义为有熬夜史，平均每日吸烟>5支定义为有吸烟史，定义标准均为本研究需要自行制定。

2 结果

2.1 3组一般资料比较 3组患者年龄、性别比例、肝功能、肾功能、糖尿病和高脂血症比例差异无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

表1 3组基线资料比较

2.2MTHFRC677T等位基因的Hardy-Weinberg遗传平衡 纳入研究的260例患者，MTHFRC677T基因CC、CT、TT的例数及比例分别为53例(20.4%)、119例(45.8%)和88例(33.8%)，各基因类型分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡(χ2=0.510，P=0.775)，样本具有群体代表性。

2.3 3组治疗前后血浆Hcy水平比较 重复测量方差分析显示，治疗前3组血浆Hcy水平差异无统计学意义(P>0.05)，治疗后，A组血浆Hcy水平低于B组(t=-4.343，P<0.001)和C组(t=-5.679，P<0.001)。见表2。MTHFRC677T基因类型(CC、CT、TT)对叶酸降低Hcy治疗有影响(F=4.451，P=0.017)；3组血浆Hcy水平有随治疗时间变化的趋势(F=1 129.653，P<0.001)，各组治疗后血浆Hcy水平均低于治疗前；MTHFRC677T基因类型(CC、CT、TT)与治疗时间有交互作用(F=5.132，P=0.006)，3组血浆Hcy水平随时间的变化趋势不同，见图1。

表2 3组治疗前后血浆Hcy水平

注：与B、C组比较，aP<0.001；Hcy—同型半胱氨酸。

a、b为字母标记法的组内时间点比较，均P<0.05；*#为与A组治疗后比较，均P<0.05；Hcy—同型半胱氨酸。

图1 3组治疗前后血浆Hcy水平

2.4 3组治疗有效率比较 治疗6个月后，A组血浆Hcy水平<15 μmol·L-1的例数为43例，有效率为81.1%，B组和C组分别为76(63.9%)和52(59.1%)。经χ2检验，3组治疗有效率差异有统计学意义(χ2=7.491，P=0.024)；经卡方分割法两两比较，A组治疗有效率高于C组，差异有统计学意义(χ2=7.311，P=0.007)；而A组和B组比较(χ2=5.128，P=0.024)、B组和C组比较(χ2=0.489，P=0.485)，差异均无统计学意义。

2.5 降低血浆Hcy治疗效果的影响因素分析 以治疗是否有效为因变量，以年龄、性别、吸烟史、熬夜史、饮酒史、MTHFRC677T基因类型(CC、CT、TT)为协变量行多因素Logistic回归分析。结果显示，与TT型患者相比，CC患者应用叶酸降低血浆Hcy治疗效果是TT型患者的2.977倍，有熬夜史患者降低血浆Hcy治疗有效的可能是无熬夜史患者的44.3%，有饮酒史患者降低血浆Hcy治疗有效的可能是无饮酒史患者的39.6%。见表3。

表3 降低血浆Hcy治疗是否有效影响因素的多因素Logistic回归分析

注：Hcy—同型半胱氨酸。

3 讨论

叶酸是临床上常用于降低Hcy治疗的药物[8]，作用机制在于叶酸体内代谢产生一碳单位参与甲硫氨酸循环，而甲硫氨酸循环是Hcy代谢的重要途径之一[9]。MTHFR是影响叶酸在体内转化为一碳单位的关键酶，该酶活性受MTHFR基因多态性的影响。编码MTHFR的基因存在多种突变，本研究检测MTHFRC677T位点，是因为既往研究显示该位点突变对汉族人群影响最大[10]。

本研究中，经过6个月的治疗，3组治疗后血浆Hcy水平均显著低于治疗前，这表明叶酸可有效降低H型高血压患者的Hcy，与田京辉等[11]的研究结果相一致。重复测量方差分析显示，MTHFRC677T基因类型对患者降低Hcy有影响，且3组血浆Hcy水平随时间的变化趋势不同，其中A组患者治疗后血浆Hcy水平明显低于B组和C组。进一步行多因素Logistic回归显示，CC患者应用叶酸降低血浆Hcy治疗效果是TT型患者的2.977倍。这表明，CC型患者应用叶酸降低血浆Hcy治疗效果较好。可能原因主要考虑与影响血浆Hcy水平的因素相关。有研究指出血浆Hcy水平升高是叶酸摄入量与叶酸代谢酶活性等因素综合作用的结果[12]。本研究中A组患者叶酸代谢酶活性正常，其血浆Hcy水平升高的主要影响因素可能是日常摄入叶酸剂量偏低；而B组和C组患者血浆Hcy水平升高可能受日常摄入叶酸剂量不足与MTHFR酶活性偏低综合因素的影响。

华文娟等[13]分析了影响体检人群血清Hcy水平升高的因素，指出吸烟、饮酒、熬夜等不良生活习惯均会影响血清Hcy水平。本研究考察了H型高血压患者住院前合并的吸烟史、饮酒史、熬夜史对降低Hcy治疗的影响，结果发现，饮酒史、熬夜史均显著影响患者降低血浆Hcy治疗效果，而吸烟史对降低血浆Hcy治疗的影响无统计学意义。饮酒影响降低血浆Hcy治疗效果的具体作用机制目前尚不清楚，考虑可能与饮酒导致的交感和迷走神经的功能平衡失调有关[14]。熬夜影响降低血浆Hcy的治疗，原因可能与患者昼夜节律的改变有关，有研究已证实昼夜节律改变是导致机体代谢紊乱的重要因素[15]。因此，H型高血压患者在降低Hcy治疗时应戒酒并改变熬夜习惯。

叶酸降低Hcy治疗有很好的安全性[16]，因此本研究中没有观察与叶酸相关的药物不良反应发生情况。目前有关MTHFRC677T基因多态性对H型高血压患者影响的临床研究，针对亚洲人群的相对较少[17]。因此本研究结论对于指导中国汉族H型高血压患者降低Hcy治疗有一定的临床应用价值。

本研究也存在一些局限性。首先是没有考察降低Hcy治疗对H型高血压患者临床症状改善的影响，这在以后有待进一步研究；其次是单中心研究纳入样本量较少，研究时间较短，因此本研究的研究结论尚需多中心更大样本量的研究予以证实。