VPS45在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

火钟坤，史晓奕，郭文治，张水军

(1.郑州大学第一附属医院 肝胆胰外科，河南 郑州 450052；2.河南省消化器官移植重点实验室，河南 郑州 450052；3.郑州市器官移植技术与应用工程重点实验室，河南 郑州 450052)

肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是消化系统常见的恶性肿瘤之一，发病率在所有肿瘤中排第6位，在肿瘤致死原因中居第2位。HCC患者5年生存率低于20%，预后较差[1]。因此，寻找新的治疗靶点，开发新的治疗药物显得尤为重要。液泡分选蛋白45(vacuolar protein sorting 45，VPS45)是Sec1/Munc18蛋白家族的成员，参与细胞内囊泡的转运和分泌过程[2]。VPS45在先天性中性粒细胞减少症和骨髓纤维化的发生发展中起重要作用[2-3]，可能与肿瘤的发生发展有关。VPS45在HCC发生发展中的作用尚未报道。本研究拟用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas，TCGA)数据库分析VPS45在HCC中的表达情况，探讨其与HCC患者临床、病理资料及预后的关系，探讨VPS45对HCC发生发展分子机制的潜在作用和意义。

1 资料与方法

1.1 获取TCGA数据库中VPS45相关数据通过TCGA数据库下载得到369例肝癌组织样本和50例癌旁组织样本所对应的VPS45表达情况的资料，同时得到369例HCC患者的临床、病理及生存资料。利用VPS45在癌组织和癌旁组织表达情况的资料计算VPS45在癌组织和癌旁组织中的表达。通过筛选最终得到225例HCC患者的临床、病理及生存资料。

1.2 数据分类对TCGA数据库中的临床、病理、生存资料等相关数据进行筛选和整理：筛选出完整包含相关临床、病理、生存资料的病例，并对病例中的性别、年龄、病理学分级、TNM分期、血管侵犯、家族史、血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)水平、生存状况和总生存期进行数据整理。依照VPS45的中位表达水平1 313将HCC患者分为低表达组(≤1 313)和高表达组(>1 313)，低表达组113例，高表达组112例。血清AFP水平以≤400 μg·L-1和>400 μg·L-1分为低浓度组和高浓度组。

1.3 观察指标(1)VPS45在癌组织与癌旁组织中的表达水平；(2)VPS45表达水平与HCC患者临床、病理资料的相关性；(3)VPS45表达水平与HCC患者预后的相关性。

1.4 统计学方法VPS45基因表达水平以中位数和四分位数M(P25，P75)表示，采用edgeR软件包计算其表达水平。计数资料以频数表示，采用SPSS 22.0统计软件对肝癌组织中VPS45表达水平与患者性别、年龄、病理学分级、TNM分期、血管侵犯、家族史、血清AFP水平的相关性进行χ2检验；采用Cox单因素和多因素回归分析性别、年龄、病理学分级、TNM分期、血管侵犯、家族史、血清AFP水平、VPS45表达水平与患者预后的关系。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1VPS45表达水平VPS45在肝癌组织中的中位表达水平为1 313.0(917.5，1 845.5)，VPS45在癌旁组织中的中位表达水平为447.0(345.5，575.3)，VPS45在肝癌组织中的表达水平是癌旁组织的2.24倍，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2VPS45表达水平与HCC患者临床特征的相关性病理学分级、血清AFP水平均与肝癌组织VPS45的表达水平有关(均P<0.05)。性别、年龄、TNM分期、有无血管侵犯、有无癌症家族史均与肝癌组织VPS45表达水平无关(均P>0.05)。见表1。

表1 VPS45表达水平与HCC患者临床特征的相关性(n)

2.3VPS45表达水平与HCC患者预后的相关性Cox单因素回归分析结果显示，TNM分期中Ⅲ～Ⅳ期患者总生存期短于Ⅰ～Ⅱ期患者，有血管侵犯患者总生存期短于无血管侵犯患者，VPS45高表达患者总生存期短于低表达患者，有癌症家族史患者总生存期短于无家族史患者，差异有统计学意义(均P<0.05)。Cox多因素回归分析结果显示，有血管侵犯、癌症家族史及VPS45表达水平是影响 HCC患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。见表2、3。

表2 VPS45表达水平与HCC患者预后的Cox单因素分析

注：AFP—甲胎蛋白；HR—风险比；CI—置信区间。

表3 VPS45表达水平与HCC患者预后的Cox多因素分析

注：HR—风险比；CI—置信区间。

3 讨论

HCC是全世界癌症相关死亡的主要原因之一，全球发病率不断上升[4]。虽然目前可应用索拉菲尼、瑞戈非尼等多种分子靶向药物延长进展期肝癌患者生存时间，但由于肝癌细胞具有高度侵袭性，容易对药物迅速产生抵抗性，HCC患者的预后仍较其他肿瘤差[1,5]。因此，探讨HCC发生发展的分子机制具有重要的临床意义。

VPS45是Sec1/Munc18蛋白家族的成员之一，可与可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor，SNARE)结合[6]。VPS45在整个进化过程中都是保守的，通过调节SNARE蛋白，参与调节通过内体系统的膜运输[2]。在酵母中，VPS45功能缺陷导致细胞生长速度减慢，内体运输缺陷，伴随的SNARE蛋白质的细胞水平降低，对渗透压的敏感性增加以及转运囊泡的积累[7]。与VPS45相关的先天性中性粒细胞减少的特征是进行性骨髓纤维化，器质性肿大和骨硬化，主要表现在颅骨[8]。VPS45突变患者表现为中性粒细胞减少，可能表现为神经运动发育延迟、小头畸形、视神经萎缩或视网膜营养不良[9]。

本研究对TCGA数据库中的369例HCC患者的肝癌组织及50例癌旁组织的VPS45表达水平进行比较，并进一步分析了225例HCC患者的VPS45表达情况与临床、病理资料和预后的相关性。发现VPS45在HCC中为促癌基因，在肝癌组织中的表达水平显著上调。VPS45表达水平与HCC患者的病理学分级、血清AFP水平有关，HCC患者病理学分级、血清AFP水平越高，VPS45表达量越高，提示VPS45作为促癌基因与肝癌的发生发展密切相关，且不受患者性别、年龄、TNM分期、血管侵犯、家族史影响，有望成为诊断HCC的检测指标。Cox单因素回归分析结果显示，存在血管侵犯、有癌症家族史、TNM分期越高、VPS45表达水平越高，HCC患者总生存期越短，提示TNM分期、血管侵犯、家族史和VPS45表达水平均是影响HCC患者生存时间的潜在危险因素。Cox多因素回归分析结果提示，血管侵犯、家族史和VPS45表达水平均是影响HCC患者总生存期的独立危险因素，存在血管侵犯、有癌症家族史、VPS45表达水平越高，HCC患者总生存期越短。以上结果说明VPS45可能在HCC的发生发展过程中起重要作用，可作为判断HCC患者预后的指标之一。

综上所述，VPS45高表达是促进HCC发生发展的独立危险因素，对HCC患者的预后产生不利影响，提示VPS45基因可作为诊断HCC的检测指标和判断HCC患者预后指标，为研究HCC的分子机制和靶向药物治疗提供理论依据。