紫外分光光度法测定市售檀香中总黄酮含量

陈依春 李 捷 姚 欢 阿 多 白玛央金 旦增次仁 洛桑桑旦 丹增色珍 孙芳云

西藏民族大学基础医学院生命科学基础研究实验室、藏药筛选实验室，陕西 咸阳 712082

檀香，豆科植物青龙木 Pterocarpus indicus Willd．的干燥心材。原产于印度至东南亚各地，我国云南、海南等地亦有栽培，别名：蔷薇木、青龙木、赤血树，是一种集药用、香料、工艺雕刻材料于一身的经济植物[1]。系藏医常用药材，味辛、性温，归脾、胃、心、肺经，具有行气温中、开胃止痛之功效[2]。主要用于寒凝气滞、胸膈不舒、胸痹心痛、脘腹疼痛、呕吐食少等病症[3]。

多年来，国内外学者对檀香的引种栽培、主要成分及其药理作用等方面作了大量研究，有研究显示，黄酮类化合物是檀香的主要有效成分之一[4-6]，黄酮类化合物有抗氧化、抗炎、镇痛、调节免疫、抗衰老、降血脂作用[7]。但目前对于檀香黄酮类化合物的药理作用研究较少，本研究旨在为市售檀香建立一种可操作性强的总黄酮含量测定方法，为进一步研究檀香药材的药理作用提供依据。

1.仪器与试剂

1.1 仪器 Lambda25紫外分光光度计(美国PE)；超声提取仪：HAD-SY-800，长春乐璞科技有限公司；摇摆式中草药粉碎机：DFY-200，大德药机；

1.2 试剂 芦丁对照品：中国食品药品检定研究院提供(100080-201610，供含量测定用，100mg/支)；檀香对照药材：批号121310-201302 (ID:H9WL-8HQ5)，中国食品药品检定研究院提供。三氯化铝、亚硝酸钠、氢氧化钠、无水乙醇等均为分析纯。

1.3 样品 购自广东、澳大利亚、马来西亚、印度，拉萨(样品依次为1，2，3，4，5)等地的市售檀香(批号20170625；20170717；20170728；20170812；20170815)，由西藏拉萨甘露藏药厂鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 总黄酮含量测定

2.1.1 供试品及对照品溶液的制备 精密称取市售檀香药材粉末0.1 g, 置25 mL锥形瓶中, 加入50%乙醇15 mL，摇匀，密塞，超声振荡30 min，放冷，过滤，滤液收集于25 mL容量瓶中，即得。精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品28.66 mg，置25 mL容量瓶中, 用无水乙醇定容。精密量取10.00 mL芦丁对照品溶液于50 mL容量瓶, 用无水乙醇稀释、定容，摇匀即得芦丁对照品溶液(0.22928 mg/mL)。

2.1.2 测定波长的选择 精密移取对照品溶液2.00 mL置25 mL容量瓶中,按顺序依次加入5%NaNO2溶液1 mL，摇匀,放置6 min,加10% AlCl3溶液1 mL摇匀,放置6 min,再加入4% NaOH溶液10 mL,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀，放置15 min。精密移取蒸馏水2.00 mL，同法配制25 mL混合溶液作为空白对照,在400～700 nm范围内进行扫描,确定芦丁显色液的最大吸收波长为508 nm。

2.1.3 线性试验 精密移取芦丁对照品溶液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、 4.00 mL、5.00 mL、6.00 mL,分别置于25 mL容量瓶中，按顺序依次加入5%NaNO2溶液1 mL，摇匀,放置6 min,加10% AlCl3溶液1 mL摇匀,放置6 min,再加入4% NaOH溶液10 mL,并加蒸馏水稀释至刻度,摇匀，放置15 min。

在波长为508 nm处进行检测，然后以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线，最小二乘法直线回归，得芦丁回归方程为:A=11.714·C+0.0503，A 为吸光度，C为质量浓度，r=0.9995，n=5。实验表明芦丁在9.17～55.0 μg/mL范围内呈良好的线性关系。结果见表1。

表1 线性试验结果

2.1.4 方法学考察

2.1.4.1 精密度试验 取样品1檀香药材粉末0.1 g，按2.1.1项下方法制备样品溶液。精密量取2.00 mL，其余同2.1.3项下操作,测定吸光度，重复测定6次，其吸光度的平均值为0.331，RSD=0.8%，说明该方法精密度良好。

2.1.4.2 稳定性试验 将样品1檀香药液样品依2.1.3项下方法显色，分别于显色后的0、15、30、45、60、75、90 min时测定吸光度，RSD=1.83%，结果表明样品显色后在90 min内稳定。

2.1.4.3 重复性试验 平行取样品1檀香药材粉末1 g各6份，按2.1.1项下方法制备样品溶液。精密量取2.00 mL，其余同2.1.3项下操作，测得其平均含量为5.55%，RSD=1.99%，表明该方法重复性良好。

2.1.4.4 样品含量测定 取檀香药材粉末0.1 g制备样品溶液。精密移取2.00 mL，其余按2.1.3项下方法测定吸光度，代入回归方程中，样品中总黄酮的含量测定结果见表2，结果显示拉萨檀香中的总黄酮含量较高，可进一步开发。

表2 样品含量测定结果 (n=5)

2.1.4.5 回收率试验 精密吸取芦丁溶液(浓度为0.1 mg/mL)1.0 mL、 2.0 mL、3.0 mL各2份，置25 mL容量瓶中，分别加入已知含量的檀香药液(已测得其总黄酮含量为0.1999 mg/mL)样品溶液3.00 mL，其余按2.1.3项下进行测定，结果见表3，回收率为98.11%，RSD=1.03%，表明该方法科学合理。

回收率试验计算公式：

总黄酮增加量/mg=(C-0.0240mg/mL)·25mL

表3 样品的回收率试验

3 讨论

黄酮类化合物是一类广泛存在于蔬菜、水果和中草药中的化合物, 是植物的次级代谢产物。根据文献报道，黄酮的提取方法有水煎煮法、醇提取法、微波提取法、超声波法等。本实验采用超声提取法，以芦丁标准品为对照，在波长为508 nm处进行检测，然后以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线，在9.17～55.0 μg/mL范围呈良好的线性关系，得芦丁回归方程为:A=11.714·C+0.0503，A为吸光度，C为质量浓度，R2=0.9995，n=5。本研究采用紫外分光光度法回对市售檀香心材中总黄酮含量进行测定，经考察，该方法精密度高，重复性好，回收率也符合定量分析要求，操作简便，可作为檀香总黄酮含量测定的一种方法，可用于檀香的日常分析及质量控制。