蒲公英对急性高尿酸血症大鼠肾脏的保护作用

邹传宗 王红娟 李纪纲 刘 喆 李昱婷 马宏霞

甘肃医学院，甘肃 平凉 744000

蒲公英(TaraxacummongolicumHand.-Mazz.)为菊科蒲公英属多年生草本植物，别名谷谷丁、黄花苗、蒲公草、地丁、婆婆丁等[1]。中国药典(2015版)收载的蒲公英为菊科植物蒲公英(T.Hand.-Mazz.)、碱地蒲公英(T.borealisinense Kitam.)或同属数种植物的干燥全草[2]。其具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋的功能，可用于疔疮肿毒、乳痈、瘰疬、目赤、咽痛、肺痈、肠痈、湿热黄疸、热淋涩痛的治疗[3]。现代药理作用研究表明，蒲公英还具有抗炎[4-5]、保肝[6]、抗肿瘤[7]等作用，而国内并无其关于高尿酸血症所致肾脏损伤保护作用的文献报道。本实验对蒲公英的肾脏保护作用进行研究。

高尿酸血症是由嘌呤类物质代谢紊乱和(或)尿酸排泄减少引起血尿酸增高的一组异质性疾病[8]。近年来高尿酸血症的发病率在全球呈上升趋势，同时伴有低龄化趋势[9-11]。研究表明[12-13]，高尿酸血症不仅是痛风的发病基础，其还与慢性肾病、代谢综合征、糖尿病、高血压等疾病发展密切相关。中草药在抗高尿酸领域的研究取得显著效果，开发一种廉价易得、疗效确切和副作用低的中草药显得尤为重要[14- 15]。本研究通过持续灌胃氧嗪酸钾喂养5周建立大鼠高尿酸血症肾病模型[16-17]，通过观察大鼠肾脏色泽和硬度，计算干湿重比值考察蒲公英对高尿酸血症大鼠肾脏的保护作用，为扩大蒲公英临床应用提供依据。

1 材料

1.1 实验动物 Wistar大鼠，SD级30只，雌雄各半，体重(200±10)g，由中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物中心提供，生产许可证号：(甘)2015-0001。

1.2 药品与试剂 蒲公英于2018年6月上旬采自甘肃省平凉市郊，经甘肃医学院程亚青教授鉴定为蒲公英(T.Hand.-Mazz.)，植物标本存放于甘肃医学院中药标本馆；氧嗪酸钾(武汉远成共创科技有限公司，批号：O0164)；其他试剂全为分析纯。

1.3 仪器 RE-52旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，Sartorius电子天平(BS224S，京制000000249号，北京赛多利斯仪器有限公司)。

2 方法

2.1 供试品及试剂的制备 取蒲公英1 kg。以水为溶剂，按1∶10(W/V)回流提取两次，每次3 h，得浸膏188.44 g，产率18.844%。取浸膏，以生理盐水溶解，制成含生药量10 g·mL-1的蒲公英供试液；氧氰酸钾用8 mg·mL-1的CMC-Na溶液配制成40 mg·mL-1的氧氰酸钾溶液；取水合氯醛加水配置成10% 水合氯醛溶液。

2.2 大鼠尿酸型肾病模型的建立、给药及分析方法 建模与分组 取符合体重大鼠30只，每组10只，雌雄各半，随机分为3组：空白对照组，阴性对照组、给药组。阴性对照组和给药组灌胃氧嗪酸钾(400 mg·kg-1, 2 mL)构建大鼠尿酸型肾病模型，空白对照组灌胃等体积生理盐水(2 mL)。

给药与分析 造模完成后，立即给大鼠灌胃给予受试物。空白对照组和阴性对照组灌胃等体积生理盐水(1.2 mL)，给药组按60 g·kg-1生药量灌胃给药。早中晚各给药1次，连续给药5周。最后一次给药结束3 h后腹腔注射10%水合氯醛(3 mL·kg)麻醉大鼠，取肾，称量干湿重，计算干湿重比值和肾脏系数(肾脏系数为肾脏的湿重除以体重的百分数)，统计分析[16]。

3 实验结果

3.1 蒲公英水提物对大鼠肾脏干湿重比值的影响 表1和表2结果表明，与空白对照组大鼠比较，阴性对照组大鼠肾脏干湿重比有极显著性差异(P<0.01)，给药组大鼠肾脏干湿重比没有明显差异，说明持续性高尿酸血症可以导致大鼠肾脏干湿重比升高，而蒲公英水提物可以起到很好的保护作用，防止干湿重比升高。

组别剂量/g·kg-1干湿重比空白对照组-0.2389±0.0051##阴性对照组-0.3306±0.0266**给药组600.2488±0.0047##

注：与空白对照组相比，*P<0.05，**P<0.01；与阴性对照组相比，#P<0.05，##P<0.01。

组别剂量/g·kg-1干湿重比空白对照组-0.2397±0.0038##阴性对照组-0.3191±0.0307**给药组600.2495±0.0161##

注：与空白对照组相比，*P<0.05，**P<0.01；与阴性对照组相比，#P<0.05，##P<0.01。

3.2 蒲公英水提物对大鼠肾脏系数的影响 通过对各组大鼠肾脏系数统计表明，阴性对照组大鼠与空白对照组大鼠肾脏系数相比有极显著性差异(P<0.01)，说明本次实验造模成功；给药组与阴性对照组大鼠肾脏系数相比有显著性差异(P<0.05)，与空白对照组大鼠肾脏系数相比则无差异，说明蒲公英水提物对持续性高尿酸血症所导致的大鼠肾脏损伤具有保护作用。见表3。

组别剂量/g·kg-1肾脏系数空白对照组-0.0319±0.0004##阴性对照组-0.0347±0.0011**给药组600.0328±0.0008#

注：与空白对照组大鼠相比，*P<0.05，**P<0.01；与阴性对照组相比，#P<0.05，##P<0.01。

3.3 大鼠肾脏解剖结果观察 通过对大鼠解剖发现，空白对照组大鼠肾脏呈红褐色(图 1)，质软；阴性对照组大鼠肾脏呈紫黑色(图 2)，质硬；给药组大鼠肾脏呈深褐色(图 3)，相对于空白对照组大鼠而言质稍硬。

4 讨论分析

王培培[16]对大鼠高尿酸血症肾损害模型进行了研究，通过腺嘌呤法与氧氰酸钾法对比研究发现，腺嘌呤法不适合用于研究原发性高尿酸血症，氧氰酸钾法则类似人类原发性高尿酸血症对肾脏的损害，结合王凯[17]对尿酸性肾损伤动物模型的研究，氧氰酸钾400 mL·kg-1灌胃可成功诱导出适用于原发性高尿酸血症和降尿酸药物筛选的动物模型，因此本次试验选用氧氰酸钾法进行模型的建立。通过本次试验对大鼠的观察，空白对照组大鼠与给药组大鼠表现基本一致，而阴性对照组大鼠则出现颤抖、精神状态差等病态现象，对比王培培所作实验结果，一般情况观察所得结果基本一致。通过分析大鼠肾脏干湿重比值及肾脏系数发现，阴性对照组与其他两组有极显著性差异(P<0.01)，而给药组和空白对照组质地无明显差别。结合大鼠肾脏形态及质地观察实验，初步确定蒲公英水提物对持续性高尿酸血症大鼠肾脏具有保护作用。

庞蕾蕾等[18]研究复方崩大碗灌肠剂对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏系数、电解质和血液的影响发现，正常对照组和给药组大鼠肾脏系数低于模型组。苗世环[19]用黄芩素对大鼠肾间质纤维化内质网应激通路干预作用研究时，各组肾脏系数变化也是模型组高于给药组与空白对照组。周玉叶[20]对于RAGE在SAP大鼠胰腺和肾脏中表达及作用的研究中提出肾脏系数变化与肾脏病变程度密切相关。本文研究发现正常对照组大鼠肾脏系数显著性极低于阴性对照组(P<0.01)，给药组大鼠肾脏系数显著低于阴性对照组大鼠(P<0.05)，而空白对照组大鼠与给药组大鼠肾脏系数无显著性差异。因此，可以分析确定蒲公英水提物对持续性高尿酸血症大鼠肾脏具有保护作用。