鸡马立克氏病与大肠杆菌病混合感染的诊断与防制

田 芬， 彭郁霖， 肖 琨， 李晓林

(贵州省六盘水市动物疫病预防控制中心，贵州 六盘水 553000)

2019年9月，六盘水市某县蛋鸡场发生以外周神经水肿、肝脏肿大、卵黄性腹膜炎、产蛋量下降为主要特征的疫病。笔者通过临床检查、病理剖检、实验室检验，确诊为鸡立克氏病与大肠杆菌病混合感染，现将诊断及防控措施介绍如下。

1 发病情况

该场共存栏罗曼粉蛋鸡18万羽，分2栋鸡舍饲养，其中2号鸡舍存栏9.5万羽(455日龄，已开产)，死亡5 000羽，病死率5.3%(5 000/95 000)，每天死亡12～15羽，死亡高峰1天死亡30余羽。在170日龄产蛋高峰期产蛋率91%～93%，3个月后下降至85%，9月初下降至78%～80%，产软壳蛋、畸形蛋3%～10%，未进行任何治疗。

2 临床症状

病鸡精神委顿，食欲减退，消瘦，羽毛松乱，皮肤发紫；鸡冠苍白、皱缩、出血(有的鸡冠呈黑紫色)；肉髯淤血、出血、萎缩；脚部鳞片干枯脱水，两腿前后伸展，呈“劈叉”姿势；下痢，粪便呈黄白色或黄绿色；触诊腹部有硬块。

3 病理变化

剖检3只死鸡、6只病鸡，病(死)鸡主要表现为心肌、心内膜、心冠脂肪出血；肝脏异常肿大，正常肝小叶结构消失，表面呈粗糙或颗粒状外观；脾脏色泽苍白；喉头有黏液，气管环状出血，气囊浑浊；肾脏水肿、出血；腺胃乳头点状出血；卵黄破裂，卵泡充血，有卵黄性腹膜炎；坐骨神经肿大，呈黄白色，横纹消失。

4 实验室检查

4.1 鸡马立克氏病病毒PCR检测取送检鸡的肝脏组织，加入适量灭菌PBS缓冲液，研磨成匀浆后，分别离心取上清液，采用北京世纪元享公司生产的DNA提取试剂盒按说明书提取病毒的总DNA，以DNA为模板进行马立克氏病病毒核酸检测。引物序列为上游引物：5’-GGAGAAGACGCAGGAAGC-3’；下游引物：5’-GAGGGCAGAAGAGGGAAT-3’。PCR反应体系25 μL：2×TaqMix 12.5 μL，上、下游引物(10 nmol/L) 各1.0 μL，DNA 2.0 μL，补水至25 μL。PCR扩增条件：95 ℃ 3 min(95 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s)×30；72 ℃ 10 min；8 ℃ 59 min。 取PCR产物8 μL，1.2%琼脂糖凝胶电泳，预期扩增片段522 bp。结果：7个检测样品中有5个样品扩增出马立克氏病病毒特异性核酸片段，检出率71.43%(5/7)，说明存在马立克氏病病毒(见图1)。

4.2 细菌分离培养将病(死)鸡组织样品分别接种于鲜血营养琼脂培养基、麦康凯培养基，37 ℃培养 24 h。结果：均有菌落生长，其中在麦康凯培养基上生长为红色菌落。挑取单个菌落进行革兰氏染色镜检，可见为呈单、双排列的革兰氏阴性短小杆菌。挑菌纯培养，获得纯培养物，按照肠杆菌科生化鉴定方法进行鉴定，结果与大肠杆菌生化特征基相符(见表1)。根据培养特点、形态特征、生化试验综合鉴定为大肠杆菌。

表1 分离菌生化鉴定

项目对照组 样品组硫化氢+ -苯丙氨酸- -葡萄糖酸盐+ +蛋白胨水(靛基质)- -M.R.+ -V-P+ -枸橼酸钠- +尿素+ +半固体琼脂+ +葡萄糖(产气)+ +赖氨酸+ +鸟氨酸+ -棉子糖+ +山梨醇- -侧金盏花醇+ +木糖+ +氨基酸对照+ +

注：+为阳性反应，-为阴性反应

5 诊断结果

通过发病情况、临床症状、病理变化和实验室检测，确诊为鸡马立克氏病与大肠杆菌病混合感染。

6 防控措施

6.1 加强检疫防疫引进鸡苗时要注意加强检疫，从已免疫马立克氏病疫苗的种鸡场引进，确保饲鸡群无马立克氏病隐性感染，避免引入病鸡。针对大肠杆菌病可使用大肠杆菌灭活疫苗免疫。或按每500羽鸡用黄连50 g，黄芩50 g，大黄40 g，车前子40 g，连翘40 g，甘草40 g，加水25 kg，熬制30分钟后去药渣，将药液加水2.5倍稀释后供鸡自由饮用，连用3天进行预防。

6.2 加强饲养管理注意控制鸡舍温度、湿度和通风，提供优质全价饲料和符合畜禽饮用标准的饮水，使鸡群保持良好的免疫功能和体质。

6.3 加强消毒和无害化处理对禽舍、用具进行清洗，1%戊二醛消毒，避免病原滋生。发病鸡及时隔离扑杀，病死鸡进行无害化处理。

7 讨论

7.1鸡马立克氏病以免疫防控为主，采用疫苗接种是控制本病的重要措施，尽管保护率不能达到100%，但可最大限度减少病例发生，此外还应加强饲养管理和消毒灭源等综合防控措施。由于某些品种鸡对马立克氏病具有高度的遗传易感性，难以进行有效免疫，甚至免疫接种后仍然易感，因此须选育有遗传抵抗力的种鸡。

7.2对于大肠杆菌病等细菌性疾病的防控，除加强常见病的疫苗接种外，还应加强科学饲养管理，注意避免滥用和长期用药，选药前要进行药敏实验，选择对细菌敏感的药物进行治疗。