重庆市渝东南少数民族地区182例学龄前期急性呼吸道腺病毒感染患儿的特征及基因分型研究

黄俊 马华兰 张玲 冉涛 周克俭 郭仲莉 潘峰

人腺病毒(Adenovirus, ADV)是学龄前儿童呼吸道感染的常见病原之一，可引起咽炎、肺炎和胃肠炎等多种疾病，对患者及其家属造成严重影响[1]。根据免疫学和生物化学特性的不同，ADV可分为A～G共7个亚组，通常感染呼吸道的有C组、D组、E组以及部分B组ADV，根据其免疫特性的不同，ADV又可分为52个血清型，其中与呼吸系统有关的ADV包括B组的3型、7型、11型和14型，C组的1型、2型、5型、6型以及E组的4型[2]。据统计，急性呼吸系统疾病是导致儿童发病和死亡的重要原因之一，其中由ADV感染引起的呼吸系统疾病占5%～7%[3]。ADV某些型病毒传播迅速，可引起局部暴发流行，导致社会恐慌[4]。因此，有必要借助分子流行病学和基因分析的方法对ADV进行检测。近年来，重庆市渝东南少数民族地区学龄前期儿童呼吸道ADV感染情况较为严重，故此，本研究特对2018年1月～2019年1月重庆市渝东南少数民族地区来医院就诊的182例学龄前期急性呼吸道ADV感染患儿的资料进行回顾，调查其特征，并据此提出防控建议。

资料与方法

一、临床资料

对2018年1月～2019年1月重庆市渝东南少数民族地区来医院就诊的182例学龄前期急性呼吸道ADV感染患儿的资料进行回顾性分析。纳入标准：均经检查确诊为急性呼吸道ADV感染；均为重庆市渝东南少数民族地区的原住居民，均登记在册且接受定期跟踪随访；排除标准：认知障碍者；合并严重呼吸系统疾病患者；临床资料不完整患者；严重心肝肾功能不全患者。本研究统计黔江区、四县(彭水自治县、秀山自治县、酉阳自治县、石柱自治县)区域内上述时间段登记入册的学龄前期急性呼吸道ADV感染患者，共182例。

二、方法

设计调查表，对所有入选者进行调查，调查表内容包括性别、年龄、地区、季节、家庭收入、临床表现、感染途径、混合感染情况以及基因分型，其中年龄按照“3岁≤年龄<4岁”，“4岁≤年龄<5岁”和“5岁≤年龄<6岁”分段。季节分为春、夏、秋、冬。临床表现包括头痛、咳嗽、流清涕、打喷嚏、流泪、恶心、呕吐、高热惊厥、咽部充血、扁桃体肿大、其他。感染途径包括空气传播、接触传播、粪-口途径传播。混合感染分为鼻病毒、呼吸道合胞病毒、博卡病毒、细菌、支原体等。

采集患者鼻或咽拭子标本，放入4 mL采样液中，于2～8℃条件下保存标本，2d内送至实验室检测。采用QIAampDNAminikit试剂盒(德国，QIAGEN公司)提取标本病毒核酸，然后进行呼吸道病毒检测，将ADV阳性标本接种到人喉表皮样癌细胞(Hep-2)，待细胞病变后收集病毒分离液，采用荧光定量PCR方法鉴定分离的病毒，根据Hexongene设计PCR引物，上游引物5′-GGACAGGATGCTTCGGAGTA-3′，下游引物5′-TTCCAGTACTGTTGTAGTAC-3′。PCR反应条件：94℃预变形5min，94℃变形1min，54℃退火1min，72℃延伸1min，共40个循环，72℃延伸7min，将PCR产物物进行1%琼脂糖凝胶电泳，切胶纯化后进行序列测定，测序结果提交基因库进行比对以确定ADV型别。

结 果

一、性别、年龄、地区、季节、家庭收入

男性(51.65%)占比与女性(48.35%)占比基本一致；年龄段分布中“3岁≤年龄<4岁”占比最高(47.25%)；地区分布中市区占比高于县区，黔江区占比为77.47%；季节分布中以春季(40.66%)和冬季(37.36%)高发；低收入家庭(<3000元)占比最高(67.03%)(见表1)。

表1 性别、年龄、地区、季节、家庭收入

二、临床表现、感染途径、混合感染情况

临床表现分布中发热占比最高(98.90%)，其次为咳嗽(56.04%)；感染途径以空气传播(61.54%)为主；与鼻病毒混合感染者占比最高(13.19%)(见表2)。

表2 临床表现、感染途径、混合感染情况

三、基因分型

测序比对结果显示，182例ADV标本分属B组、C组和E组3个亚组，其中B组ADV检出率最高为66.49%，其次C组ADV检出率为27.47%，E组ADV检出率为6.04%，按照血清型分布由高到低依次为：HAdV-3(54.40%)、HAdV-1(12.09%)、HAdV-7(9.89%)、HAdV-2(7.69%)、HAdV-5(7.69%)、HAdV-4(6.04%)、HAdV-14(2.20)(见表3)。

表3 标本测序分型结果

讨 论

一、对重庆市渝东南少数民族地区学龄前期急性呼吸道ADV感染患儿流行病学特征调查的意义

ADV是引起人类急性呼吸道感染的重要病原之一，主要分布于腺体组织、扁桃体等部位，能够引起人胚肾原代细胞病变[5]。急性呼吸道ADV在全球多个国家和地区都有爆发和流行的报道，我国尚无大规模爆发的情况，仅在局部范围内爆发流行，目前普遍认为ADV多发于低年龄儿童，尤其是学龄前儿童[6]。学龄前儿童感染ADV可能导致肺炎等重症感染，当病毒大范围流行时，相关疾病的致死率较高，急性呼吸道ADV感染诱发的疾病中，约50%的患者会继发相关症状[7]。然而，ADV仅凭临床表现很难判断，诊断很大程度依赖于实验室检测。有研究报道[8]，52个ADV血清型中的部分血清型能够引起急性呼吸道感染，并且在不同地区和不同时期流行的ADV血清型存在差异。因此，了解ADV流行病学特征以及鉴定其基因分型具有重要意义。近年来，重庆市渝东南少数民族地区学龄前期儿童急性呼吸道ADV感染率较高，务必调查感染患者流行病学特征和基因分型，才能有针对性的进行防控，以确保当地居民的健康。

二、本研究对于性别、年龄、地区、季节、家庭收入的调查结果分析

本调查结果显示，男性与女性感染比例接近，性别对于感染急性呼吸道ADV没有影响。汪东篱等[9]调查指出，ADV引起的呼吸道感染中男女比例为1:1，与本研究结果一致，提示男女急性呼吸道ADV感染发生风险相近，均应当注意防控。在年龄段分布调查结果中，“3岁≤年龄<4岁”占比最高，与既往郝洁等[10]人报道结果相符，推测该年龄段患者自身免疫系统发育尚不完善，机体缺乏ADV特异性抗体，而4～6岁患者免疫系统逐渐发育，免疫力增强。本研究地区分布调查结果中发现，市区占比远高于县城，推测原因为市区人口密度大，流动人口多，外出游玩、聚餐次数多于县城地区，ADV传播扩散的危险因素相对较高。本研究季节调查结果显示，春季和冬季发病率远高于夏季和秋季，可知ADV有明显的季节倾向性。而许晶等[11]调查显示，腺病毒感染全年散发，无明显季节性。分析原因可能为我国地区间气候差异较大，中国地域宽广，纬度跨度较大，导致同一季节不同地区温度相差较大，对腺病毒活动和传播具有直接影响。本调查中患者感染多发于冬春季节，可能为该地区冬春季寒冷干燥，室内通风较少，外出时冷空气袭击，鼻黏膜受到刺激后，抵抗外界病菌侵袭能力降低，特别是慢性呼吸道病患者，痰液黏稠不易排出，容易滋生细菌，加重感染。家庭经济状况调查结果中，月收入<3000元者占比最高，可能原因为月收入越低，可能家庭收入高群体生活条件高，卫生意识也随之提高，生活中能够做到早期预防。结合上述结果与分析，提示对于“3岁≤年龄<4岁”年龄段、城区、低收入家庭的儿童以及冬春季节急性呼吸道ADV感染率较高，应加强卫生意识，做好个人防护，以降低急性呼吸道ADV感染率的风险。

三、本研究对于临床表现、感染途径、混合感染情况的调查结果分析

本研究调查结果显示，急性呼吸道ADV感染常见临床表现有发热、咳嗽、咽部充血、流清涕、打喷嚏、扁桃体肿大等，与大多数研究结果一致[12-14]。提示应该对上述症状进行早期预防，降低感染发生率。本研究调查结果发现，急性呼吸道ADV感染的途径主要是空气传播，其次是接触传播和粪-口途径传播。本研究还发现，混合感染占比27.47%，其中与鼻病毒感染者占比最高，可知急性呼吸道ADV感染有混合感染的风险，甚至有可能出现三重感染或多重感染。分析其中原因可能为病毒与宿主细胞表面受体结合介导病毒复制传播，同时病毒感染对呼吸道上皮的破坏可增加细菌的黏附。因此，针对上述分析结果，该地区学龄前期儿童应做好以下预防措施：(1)日常生活中家长必须要求学龄前期儿童勤洗手，勤消毒，急性呼吸道ADV高发季节尽量减少外出，外出时应戴口罩进行防护。(2)日常饮食平衡膳食营养，多吃蔬菜，多喝水，加强锻炼，室内勤通风，保持环境清洁。(3)急性呼吸道ADV感染容易传染，一旦发生疾病，及时采取治疗措施，并做好隔离，避免传染他人。

四、本研究对于基因分型的调查结果分析

本研究调查结果显示，B组ADV检出率最高为66.49%，其中HAdV-3血清型最高54.40%，其次为HAdV-7血清型，与卢桂兰等[15]研究结果一致。有研究报道[16]，7型ADV更容易引起重症肺炎，因此，根据ADV基因型特征，应加强对ADV分子流行病学检测，进一步开展疫苗研发工作，以保障学龄前期儿童健康。

综上，重庆市渝东南少数民族地区学龄前期急性呼吸道ADV感染患儿中“3岁≤年龄<4岁”、市区、春季、低收入者的占比均偏高，多见发热、咳嗽、咽部充血、流清涕等表现，多经空气传播，部分患者有鼻病毒、呼吸道合胞病毒、博卡病毒混合感染，需结合上述建议加强防控。