多发性骨髓瘤患者的循环骨髓瘤细胞与髓内瘤细胞负荷状况研究

徐玉秀 姜 芳 马东升 王 萌

多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一种常见的血液系统肿瘤，是由于免疫球蛋白异常单克隆增殖所致的恶性浆细胞病[1]。据统计MM在所有血液系统恶性肿瘤中约占10%，MM的发病率在许多国家中占血液系统恶性肿瘤的第2位[2]。贫血、骨痛、高粘滞血症、肾功能异常及溶骨性损伤是MM患者主要的临床病理性改变[3]。MM患者预后的相关因素复杂多样，有研究显示骨髓中瘤细胞的检测是反映MM患者预后的一个重要因素，但骨髓中瘤细胞检测需要抽取患者的骨髓，而骨髓抽取过程比较复杂且其骨髓液很容易被稀释等缺点，因此患者的依从性被大大降低[4]。已有文献表明MM患者的外周血中可以检测到骨髓瘤细胞，我们称之为循环骨髓瘤细胞(circulating myeloma cells，CMCs)，而CMCs对MM患者的预后判断具有重要的意义[5-6]。本研究选取68例多发性骨髓瘤患者为研究对象，来探讨MM患者CMCs与髓内瘤细胞负荷状况的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集68例2015年10月至2016年12月我院确诊的多发性骨髓瘤患者为研究对象。所选男性患者38例，女性患者30例；年龄32～76岁，平均年龄(56.5±1.6)岁；按DurieSalmon(DS)分期体系[7]：8例为Ⅰ期患者，11例为Ⅱ期患者，49例为Ⅲ期患者；按国际分期体系(ISS)[8]：3例为Ⅰ期患者，31例为Ⅱ期患者，34例为Ⅲ期患者。入选标准：①所选患者均符合美国国家综合癌症网(NCCN)中MM的诊断标准[9]；②所选患均为初诊的MM患者；③所选患者的神志均很清醒，均能表达自己的意愿；④所选患者都没有合并其他重要器官的疾病。排除标准：①患有严重溶血性疾病的患者；②患有其他部位肿瘤的患者；③患有心肝肾等重要脏器功能损伤的患者；④患有严重感染性疾病的患者。依据CMCs的阳性标准将所选患者分为CMCs阳性组与阴性组。本研究中所有研究对象或其家属均签署了知情同意书，且本研究通过我院医学伦理委员会审批。

1.2 方法

首次化疗前1 d采取每位患者的5 ml静脉血，进行大生化检查。在首次化疗前1 d分别采集2 ml所选患者的外周血与骨髓，均使用EDTA-K2进行抗凝，然后均用PBS洗液洗涤3次，最后将骨髓与外周血的细胞数均调整到(4～10)×109/l。依据欧洲骨髓瘤工作组推荐[10]来进行抗体组合的制定；然后使用FACS CANTO II流式细胞仪及由美国BD公司提供的单克隆荧光抗体、同型对照抗体和细胞透膜液等试剂盒，严格按照说明书来检测所选患者的外周血及骨髓中瘤细胞的数量，所得数据用分析软件FCS Express 4 Flow Research Edition来进行处理分析。CMCs的结果采用万分比，髓内瘤细胞的结果采用百分比，根据流式细胞学检测MM患者微小残留病灶定义的标准[4]，将流式细胞学检测瘤细胞比值>1×10-4定义为阳性，而<1×10-4定义为阴性。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS 19.0对本研究中的数字整理与分析，用均数±标准差来表示计量资料，而计数资料用百分率来表示，计量资料及计数资料分别用t检验及χ2检验来进行比较；采用Spearman进行相关性分析；采用Logistic回归分析来进行多因素分析，以P<0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 分组结果

依据流式细胞学检测MM患者微小残留病灶定义的标准所选的68例患者中37例患者为CMCs阳性患者，余31例患者为CMCs阴性患者，CMCs阳性率为54.4%。

2.2 2组患者CMCs与髓内瘤细胞比例的相关性

Pearson相关性分析结果显示：MM患者CMCs与髓内瘤细胞的比例呈正相关(γ=0.498，P=0.018)，见图1。

图1 髓内瘤细胞比例/%

2.3 MM患者CMCs与预后相关指标的单因素分析

DS Ⅲ期患者、ISS Ⅲ期患者、肾功能损伤患者、骨质破坏患者、中度以上贫血患者、β2-微球蛋白增高患者及血清肌酐增高患者的比例CMCs阳性组均明显高于CMCs阴性组；而年龄、性别、低白蛋白血症患者、高钙血症患者及乳酸脱氢酶增高患者在CMCs阳性与阴性2组MM患者中的差异不大，见表1。

2.4 MM患者CMCs与预后相关指标的多因素分析

多因素Logistic回归分析结果显示：中度以上贫血与β2-微球蛋白增高是MM患者CMCs阳性的独立危险因素，详见表2。

3 讨论

MM是骨髓浆细胞恶性增殖性的一种疾病，该病的高发人群为中老年群体。MM发病早期患者的临床症状不明显，因此许多患者就诊时的误诊率很高[11]。有研究结果显示随着年龄的增加多发性骨髓瘤的发病率有逐渐上升的趋势[12]。目前，恶性肿瘤患者外周血中肿瘤细胞的存在、数量与肿瘤的发生、转移及预后的关系已成为肿瘤生物学研究的一个热点[13]。有医学研究者提出MM患者外周血中的CMCs不仅参与了肿瘤的转移与复发，还影响患者的治疗与预后[14]。流式细胞学具有检测结果客观、检测速度快等优点，能获取大量细胞，因此能提高检测的灵敏性，流式细胞仪近年来在MM的诊断及治疗效果评价等方面均取得了很大的成效[15]。本研究选取68例经我院确诊的多发性骨髓瘤患者为研究对象，探讨多发性骨髓瘤患者的循环骨髓瘤细胞(CMCs)与髓内瘤细胞负荷状况的相关性。

表1 单因素分析

表2 多因素分析

本研究所选68例MM患者中有37例患者为CMCs阳性患者，CMCs阳性患者所占的比例为54.4%，本研究结果还显示MM患者CMCs与髓内瘤细胞的比例呈正相关。CMCs阳性组MM患者的DS Ⅲ期患者、ISS Ⅲ期患者、肾功能损伤患者、骨质破坏患者、中度以上贫血患者、β2-微球蛋白增高患者及血清肌酐增高患者的比例均明显高于CMCs阴性组。这一结果说明CMCs与髓内肿瘤细胞的比例及分期均存在一致性，即CMCs能很好地反映MM患者肿瘤细胞的负荷，这与Gonsalves等的研究结果[16]相符合，即CMCs不仅能很好地反映肿瘤的增殖活性和负荷，且对MM患者的分期及疗效的判定均有重要的价值。本研究多因素Logistic回归分析结果显示中度以上贫血与β2-微球蛋白增高均是MM患者CMCs阳性的独立危险因素，而MM患者的CMCs与髓内瘤细胞负荷状况呈正相关，因此对中度以上贫血与β2-微球蛋白增高的MM患者检测CMCs对患者的病情及预后均有很重要的临床意义。

综上所述，CMCs能很好地反映MM患者的髓内肿瘤细胞的负荷状况及病情，且与髓内肿瘤细胞相比，CMCs的检测更便捷，而且MM患者的依从性更好，值得在临床工作中进行大力的推广与应用。