β2-肾上腺素能受体基因多态性与慢性心力衰竭后室性心律失常的关系

王保功，刘华玲，王瑞丽，王学惠

(1.周口市中心医院心血管内科，河南 周口 466000；2.周口市中心医院小儿内科，河南 周口 466000；3.新乡医学院第一附属医院心血管内二科，河南 卫辉453100)

慢性心力衰竭主要由各种心脏疾病进展引起，其发生、发展中神经内分泌系统被激活后发挥重要作用：维持循环稳定。β肾上腺素能受体作为神经内分泌系统重要组成部分,其表达与心血管疾病发生密切相关,对心肌收缩能力介导且舒张血管[1]。慢性心力衰竭易合并心律失常，是导致患者死亡的主要原因之一[2,3]。目前临床治疗慢性心力衰竭合并心律失常以β受体阻滞剂、利尿剂等为主，关于其治疗相关报道较多。近年来随着对基因学研究的深入，关于基因多态性与心血管疾病诊断、治疗或预后评估的关系报道不断增多,而关于β肾上腺素能受体基因多态性与慢性心力衰竭患者的关系报道较少。有文献发现β2受体基因改变是决定心力衰竭进展的1个重要要素[4]。基于此，本文主要分析β2-肾上腺素能受体基因多态性与慢性心力衰竭后室性心律失常的关系,为临床疾病诊治提供依据。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院2016年5月-2018年1月就诊的慢性心力衰竭后室性心律失常患者115例，计为观察组。入选标准：⑴年龄＞18岁，均为汉族人群；⑵经既往病史、症状、相关实验室检查确诊为慢性心力衰竭；⑶美国纽约心脏病学会 (NYHA)心功能分级II～IV级；⑷心电图或心动图检查显示室性心律失常。排除标准：⑴近期有急性心肌梗死病史；⑵肝、肾功能严重障碍：⑶肿瘤、严重感染、急性感染者；⑷慢性心力衰竭急性发作者；⑸合并严重糖尿病、心房颤动、甲亢者；⑹合并自身免疫性疾病、代谢异常者。其中男67例，女48例，年龄 40～72 岁，平均（52.46±5.86）岁，病程 6 个月～10 年，平均（3.62±2.48）年；其中冠心病 29 例，冠心病并发高血压心脏病34例，扩张型心肌病52例；心功能分级：II级21例，III级46例，IV级48例。选择同期行健康体检的正常人员90例为对照组，其中男 53 例,女 37 例,年龄 38～69 岁,平均（50.96±6.00）岁。年龄、性别构成两组比较差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。本次研究所有对象均知情，并自愿参与。

1.2 方法 通过聚合酶链式反应法（PCR）测定β2-肾上腺素能受体基因多态性,脱氧核糖核酸（DNA）相关试剂盒购自美国GRENTRA公司，主要步骤：⑴标本采集：清晨空腹状态对两组对象肘静脉采集4mL，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，保存于零下80℃环境中。⑵DNA处理：严格按照试剂盒说明书操作，采取酚/氯仿法对标本中DNA提取，紫外分光光度计对DNA纯度、浓度测定，依据结果将DNA浓度适当稀释，保证OD1（波长260nm）/OD2（波长 280nm）比值 1.8～2.0；⑶PCR 扩增：本研究β2-肾上腺素能受体基因多态性位点包括16Arg/Gly、27Gln/Glu、178Arg A/C。PCR 反应体系体积50μl，包括正向引物 10μmol/L、逆向引物 10μmol/L、Taq酶、三磷酸脱氧核糖糖苷2mmol/L及DNA模板 10ng/μL。PCR 反应条件：94℃ 240s，94℃ 20s，55℃ 30s，72℃ 30s， 共 35 个循环，72℃最后延伸300s。⑷测序：测序反应含有引物1μmol/L、PCR产物 3μl和 测 序 试剂 Big Dye Terminator 1μl，共5μl。96孔板各孔内加入醋酸钠乙醇溶液25μl，溶液中包括醋酸钠3mol/L与100%乙醇，之后将Hi-Di甲酰胺10μl加入，95℃变性300s后快速放入冰内，冷却后通过测序仪测序。

对观察组患者性别、年龄、心功能分级、疾病类型等资料收集，分析上述资料与β2-肾上腺素能受体基因多态性的关系。

1.3 统计学处理 应用SPSS21.0统计软件分析数据，Hardy-Weinberg平衡定律对样本的群体代表性进行分析；计数资料以%表示,行χ2或秩和检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡定律分析结果 16Arg/Gly、27Gln/Glu、178Arg A/C 位点在观察组与对照组基因型分布频率方面符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05），提示样本有群体代表性。

2.2 各组β2-肾上腺素能受体基因型及等位基因频率比较 观察组多态性位点27Gln/Glu基因型中G/C型频率明显高于对照组，等位基因G频率明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；多态性位点16Arg/Gly、178Arg A/C基因型及等位基因频率两组比较差异均无统计学意义 （P＞0.05）。见表1。

2.3 不同性别患者β2-肾上腺素能受体基因多态性位点27Gln/Glu分布 观察组与对照组不同性别组间β2-肾上腺素能受体基因多态性位点27Gln/Glu基因型及等位基因频率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。 见表 2。

2.4 不同心功能分级β2-肾上腺素能受体27Gln/Glu分布 多态性位点27Gln/Glu基因型中C/G型心功能IV级8例，所占比例最大，与CC型比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表 3。

2.5 不同疾病类型β2-肾上腺素能受体27Gln/Glu分布 β2-肾上腺素能受体多位点27Gln/Glu基因型分布与原发性疾病无显著相关性，差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表 4。

3 讨论

表1 观察组与对照组β2-肾上腺素能受体基因型、等位基因频率比较[n（%）]

表2 不同性别β2-肾上腺素能受体基因多态性位点27Gln/Glu基因型、等位基因频率比较[n（%）]

表3 不同心功能分级β2-肾上腺素能受体多态性位点27Gln/Glu基因型比较

表4 不同疾病类型β2-肾上腺素能受体多位点27Gln/Glu基因型比较

慢性心力衰竭后室性心律失常发病机制复杂,主要包括[5]：⑴原发性疾病。临床上慢性心力衰竭一半以上由缺血性心肌病引起,第二则为扩张型心肌病，以心肌损伤或心肌坏死为病理改变，损伤心肌细胞经由纤维组织取代,导致心肌组织纤维化，进而促心脏重构，造成心肌肥大，最终导致室性心律失常发生。⑵机械因素。慢性心力衰竭后导致左室容量及压力上升,促心室重构，对心肌纤维牵拉，造成心肌电重构，进而诱发室性心律失常。⑶电解质异常；⑷神经-体液-内分泌系统紊乱；⑸药物因素。

目前关于慢性心力衰竭并室性心律失常的治疗相关报道较多，疗效各异，且多以综合干预为主,无标准统一方案[6,7]。β肾上腺素能受体包括β1、β 2、β3等，与心血管疾病发生、发展密切相关，β受体阻滞剂在心血管疾病治疗中比较常见。刘永生等[8]研究发现β2肾上腺素能受体基因多态性与冠心病发病有关，但与疾病严重程度无关，认为冠心病发病时多种基因改变及后天因素（环境、生活方式等）共同影响的结果。动物实验发现β3-肾上腺素能受体参与慢性心力衰竭进展,其机制可能与它促心肌重构及心肌纤维化有关[9]。β2-肾上腺素能受体为G蛋白偶联受体超家族成员之一，含有413个氨基酸，定位在5q上，已发现其多态性位点包括16Arg/Gly、27Gln/Glu等。较多研究表明β2肾上腺素能受体基因多态性与支气管哮喘、高血压等发病、进展可能有关[10-13]。李星辉等[14]研究发现β2肾上腺素能受体基因Arg16Gly、Gln27Glu多态性与高海拔地区藏族人群原发性高血压发生无关。袁铭等[15]研究发现β2肾上腺素能受体Gly16Arg、Glu27Gln多态性与动脉硬化、心室重构密切相关。目前国内外关于β2肾上腺素能受体多态性与慢性心力衰竭、室性心律失常的关系报道尚少。本文选择 16Arg/Gly、27Gln/Glu、178Arg A/C 为 β2肾上腺素能受体多态性观察位点，结果显示观察组27Gln/Glu G/C型、等位基因G频率比对照组均显著高，提示27Gln/Glu杂合子（G/C型）可能是慢性心力衰竭后室性心律失常发生的易感因子，而16Arg/Gly、178Arg A/C多态性与慢性心力衰竭后室性心律失常无关。这可能与β2-肾上腺素能受体27Gln/Glu多态性对心肌收缩能力调节、影响自主神经活性等,致使心脏自主神经功能障碍发生有关[16]。有研究发现心力衰竭患者血清β1肾上腺素能受体水平下降，β2肾上腺素能受体水平几乎不变，认为β2受体对心力衰竭引发心律失常可能有更大的判断价值[17]。本文还发现β2-肾上腺素能受体多位点27Gln/Glu基因型与心功能分级有关，心功能分级越大，27Gln/Glu中G/C型比例越大。提示β2-肾上腺素能受体基因多态性可能与慢性心力衰竭严重程度有关。另外本文发现27Gln/Glu多态性与慢性心力衰竭后室性心律失常患者性别、原发性疾病类型无关。由于本文样本量较少，且均为汉族人群，难以对全部慢性心力衰竭后室性心律失常患者反映，但通过本研究也可为慢性心力衰竭后室性心律失常分子遗传学机制研究提供一定的参考。

综上，β2-肾上腺素能受体基因多态性位点27Gln/Glu基因型G/C型可能是慢性心力衰竭后室性心律失常发生易感基因,且与慢性心力衰竭严重程度有关。