不育男性生殖道沙眼衣原体感染对精子核DNA碎片化指数的影响

卢奋坚，温子娜，董梅，段礼，贾红军，钟影

（成都市锦江区妇幼保健院生殖医学中心男科实验室，四川 成都610016）

沙眼衣原体（Chlaydia trachomatis，CT）是导致生殖道感染的常见病原体,是一种专性细胞内寄生的原核细胞微生物，其脂多糖(LPS)成分可以整合到宿主的上皮细胞壁上成为其组成部分。沙眼衣原体生长期中有两种发育形式，即始体和原体，其中原体有很强的感染力,存在于宫颈、尿道分泌物、精液等易感宿主细胞内，主要通过亲密接触、性交及直接的体液交换来传播[1]。研究表明，生殖道沙眼衣原体感染率与急性附睾炎及慢性前列腺炎有十分密切的关系,由于附属性腺的感染是引起男性不育的因素之一,因此沙眼衣原体与男性不育有关[2,3]。

精子核DNA碎片化指数 (DNA fragmentation index，DFI)反映了遗传物质DNA的损伤程度,检测精子DFI对预测精子的受精能力、受精卵的分裂和胚胎的正常发育有重要的意义[4]。沙眼衣原体感染是导致男性不育的因素之一,但有关其对精子DFI的影响的报道还不多，本文旨在探讨不育男性生殖道沙眼衣原体感染对精子核DNA碎片化指数的影响。

1 材料与方法

1.1 研究对象 感染组：117例拟诊男性不育患者，并伴有沙眼衣原体属感染，年龄25～45岁。对照组：体检正常的男性92例，年龄25～45岁，均生育过 1～2名健康孩子。

1.2 研究方法

1．2.1仪器与试剂计算机辅助精子分析系统(SCA,西班牙),流式细胞仪(FCAS Calibur,美国BD），精子核完整性染色试剂盒(浙江星博)，沙眼衣原体核酸测定试剂盒(上海之江)。

1．2.2 精液常规检测 禁欲 2～7d，手淫法采集精液，置于37℃恒温箱内,液化后按照《WHO人类精液检查与处理实验室手册（第五版）》进行精液常规检测。

1.2 ．3沙眼衣原体检测采用荧光定量聚合酶链式反应（QPCR）法检测沙眼衣原体的特异性DNA核酸片段。

1.2.4 精子核DNA完整性检测SCSA法，即采用低pH缓冲液对精子核进行处理，吖啶橙染色。吖啶橙可与精子核DNA完整的双链DNA结合呈单体形式发出绿色荧光，与精子核DNA受损伤的单链DNA结合呈聚合物形式发出红色荧光。通过流式细胞仪检测红、绿荧光信号，结合软件计算，精子核DFI值描述为红色/（红色+绿色）荧光强度×100%，即受损伤的精子占总精子数的比例。

1.2 ．5 统计学处理 采用 SPSS13.0统计软件进行统计学分析。感染组与对照组精液常规参数及DFI值分析采用t检验,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

感染组的精子浓度（106/ml）低于对照组，但差异无统计学意义（P＞0.50）；感染组的前向运动精子百分比（PR）（%）低于对照组，但差异无统计学意义（P＞0.20）；与对照组相比，感染组的精子 DFI值显著升高（P＜0.05），见表 1。

3 讨论

表1 感染组与对照组的比较

大量的研究表明，精子核DNA完整性会影响精子的受精能力、受精后原核的形成、胚胎着床及子代的健康。环境污染、疾病、吸烟、生殖道感染等多种因素均可导致精子核DNA损伤。在生殖道感染中,沙眼衣原体是引起性传播疾病最常见的一种病原体，其对生殖健康影响较大[5]。2008年一项美国的研究表明,在15岁到39岁的人群中，沙眼衣原体感染的患病率达到14.69%[6]。本研究显示，生殖道感染沙眼衣原体的男性不育患者的精子核DNA损伤程度显著高于未感染者。

精子核DNA损伤机制主要包括氧化应激反应、凋亡机制和染色质组装，其中氧化应激反应是导致精子核DNA损伤的主要因素[7]。精子DNA损伤程度高的患者，自然生育的能力显著下降，甚至为零[8]。1999年Evenson等最早应用DFI来评价男性生育潜能，认为DFI在0～15%具有高生育潜能，16%～29%具有中生育潜能，30%～79%具有低生育潜能，80%～90%无生育能力[9]。

目前,沙眼衣原体影响精子质量的机制还不十分明确。Gimenes[10]指出，男性生殖系统沙眼衣原体的感染会降低精子质量,影响精子的游走和定植能力。研究表明，男性生殖系统感染对精液常规参数和精子核DNA损伤都有影响，生殖系统感染的排查对男性不育有重要的诊断价值[11]。Satta等的研究揭示男性生殖道沙眼衣原体感染者的精子膜磷脂酰丝氨酸和精子核DNA完整性发生改变，引起精子凋亡增加[12]。本研究通过SCSA试验对生殖道沙眼衣原体感染组和对照组的精子核DNA完整性进行比较,发现感染组的DFI值明显高于对照组，证实感染组的精子核DNA损伤更严重。

综上所述,精子核DNA损伤与男性不育密切相关。生殖道沙眼衣原体感染的男性不育患者的精液常规参数与未感染者相比无显著差异,但精子核DNA损伤程度明显高于未感染者。因此,精子核DNA碎片化指数可能是评估男性精液质量的独立指标，其与精液常规参数相结合，对男性生育力的评估有重要临床价值。