高效液相色谱法检测中成药中非法添加的布洛芬

童 杨，孙 蓓，罗欣杰，曹晓琴

（江汉大学，湖北 武汉 430056）

临床研究对疼痛的治疗机理尚不明了，亦无彻底消除的方法，不良商家在中成药中添加化学药物，来达到止痛的目的[1-2]。添加的化学药物成分及剂量未遵循临床用药规范，必须有更专业的检测手段及方法对其进行监控。现有文献都是应用质谱对该类药物进行检测[3-4]，但质谱仪器的普及率低，且操作繁琐，成本高，并不能作为日常快速检测的方法。而采用高效液相进行鉴定分离时，采用的流动相pH值低[5]，会给色谱柱造成损害。本文采用HPLC，对中成药中添加的化学药物成分布洛芬进行检测，方法简便快速，分离条件温和，不损害色谱柱，可用于中成药中添加的布洛芬的定性及定量检测。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

布洛芬(纯度 99.7%)，3 种中成药（网购），乙醇、乙腈、乙酸铵(均为色谱纯)，去离子水（自制）。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪(配紫外检测器)，色谱数据工作站，Milli-Q 超纯水系统，离心机，C18 色谱柱（150mm×4.6mm），紫外分光光度计。

2 实验方法

2.1 对照品溶液的制备

准确称取10mg 布洛芬对照品，乙醇溶解，10mL容量瓶定容，即得含布洛芬 1mg·mL-1的对照品贮备液（母液）10mL。再取1mg·mL-1的对照品贮备液（母液）1mL 于 10mL 容量瓶中，用乙醇定容，即得含布洛芬100μg·mL-1的对照品贮备液（中间液）10mL，用时用乙醇稀释。分别配制不同质量浓度的对照品溶液，进样前用滤膜过滤。

2.2 供试品溶液的制备

元胡止痛片、风湿骨痛宁胶囊、复方关节炎胶囊，随机取同一批号的供试品4 片，研细作为试样。称取处理好的试样约1.0g，置于5mL 离心管中，加入2mL 的乙醇水溶液（90∶10），功率143W、频率40kHz 下超声提取20min 后，4000r·min-1离心5min。取上清液过滤，再取1mL 的溶液于250mL 容量瓶中，用乙醇定容，滤膜过滤，作为供试品溶液。

所有采集的样品均采用本检测方法进行空白基质的筛选，测定结果以无干扰峰的基质作为空白基质，用于样品添加实验。色谱条件：检测波长 263nm，流动相：乙腈-0.02mol·L-1乙酸铵溶液（0.1%乙酸，60/40），柱温30℃，进样量10 µL，流速1mL·min-1。

3 结果与讨论

3.1 前处理方法的选择

中成药中含有许多杂质，而布洛芬易溶于乙醇，故采用乙醇提取法[6-7]。实验前，分别用不同比例的乙醇水溶液溶解相同质量的布洛芬，根据文献[8-9]，263nm 紫外光照下，布洛芬有最大吸收。根据测定结果，在乙醇-水（90/10）提取条件下的紫外吸收最大，即可确定在此条件下布洛芬的溶解度最佳，可作为供试品提取的最佳溶剂。

3.2 色谱条件的选择

参考相关文献[10]的研究结果，本文选用RP-18柱，以乙腈、乙酸铵混合溶液为流动相[11-13]。实验前，分别采用乙腈-0.02mol·L-1乙酸铵溶液(0.1%乙酸，60/40)、乙腈-0.02mol·L-1乙酸铵溶液(0.1%乙酸，50/50)、乙腈-0.02mol·L-1乙酸铵溶液(0.1%乙酸，40/60)为流动相，各流动相的出峰时间分别为7.5min、17min、28min。由此可知，用冰醋酸调节pH=6，乙腈-0.02mol·L-1乙酸铵溶液(0.1%乙酸，60/40)可在10min 内出现布洛芬的色谱峰，且样品有良好的分离(图 1)。同时考察了流动相中，甲醇和水的比例与出峰时间及峰形的关系，结果表明，出峰时间较快，峰型对称尖锐，无拖尾现象。

图1 空白样品中添加50μg·L-1 布洛芬的色谱图Fig.1 HPLC chromatograms obtained of 50μg·L-1 Ibuprofen

3.3 检出限、定量限及线性范围

在 配 制 的 空 白 样 品 中 按1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0µg·L-1的 水 平 加 入混 合 标准 溶 液，进样检测，绘制标准工作曲线。以峰面积Y对进样质量浓度X进行线性回归，以RSN=3 计算检出限，以RSN=10 计算定量限。布洛芬的浓度在1～200μg·L-1范围内线性关系良好，回归方程为：A=28963.45086C+16289.83687，相 关 系 数R2为0.9988，组分的检出限为2.9μg·L-1，定量限为 4.1μg·L-1。

3.4 样品测定

取3 种网购药品，按优化的操作条件进行测定，进样 20μL，平行测定3 次，用标准曲线回归方程计算布洛芬含量，结果见表 1。由表1 可知，元胡止痛片中不含布洛芬，风湿骨痛宁胶囊与复方关节炎胶囊中均检出西药成分布洛芬。

表1 3 种样品中布洛芬含量检测结果Table 2 Detection results of Ibuprofen in 3 samples

4 结论

本研究建立了 HPLC 法检测中成药中非法添加布洛芬的方法。通过对前处理样品方法和色谱条件的优化，无需将流动相调节至过酸状态，即可实现10min 内快速出峰，且峰形对称，无拖尾现象。根据方法学的考察结果，本方法的专属性强，灵敏度高，可作为非法掺入化学成分的有效检测方法。