刘春丽 罗孝坤 李建英 尚陆娥 张微思 杨珍福 岳万松 刘绍雄*
(1.中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所,昆明650221;2.云南省供销合作社科学研究所,昆明650221)
桉树为桃金娘科(Myrtaceae)桉树属(Eucalyptus)的总称,是世界性的短周期工业原料林树种,作为造纸的主要原料,我国南方地区1973年来大面积引种澳大利亚尾叶桉等品种,我国桉树人工林面积约为260万公顷,其中云南23.6万公顷[1]。桉树人工林剩余物量较大,多被丢弃或焚烧,造成严重的资源浪费和环境污染。
木耳(Auricularia ssp.)作为一种日常菜肴,含有蛋白质、粗多糖、矿物质、膳食纤维等多种营养成分,具有抗氧化、抗凝血、抑菌、降血糖和预防动脉粥样硬化等生理活性[2~4]。各地栽培面积和产量快速持续增长。但其作为木腐型食用菌,面临新、老产区木屑短缺、菌林矛盾日益突出的问题[5]。本研究筛选不同木耳菌株及不同桉树木屑比例配方,以期解决桉树人工林剩余物资源出路和木耳栽培原料的匮乏问题。
(1)供试菌株。选取6 个木耳菌株作为供试菌株(表1),均来源于中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所菌种中心。
表1 供试菌株
(2)培养基。母种(一级种)培养基:PDA培养基(马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g,水1 000 mL)。
菌株筛选试验的原种配方设2 个:①细木屑82%,麦麸15%,石灰1%,石膏1%,普钙(普通过磷酸钙)1%;②桉树木屑82%,麦麸15%,石灰1%,石膏1%、普钙1%。
配方筛选试验的原种培养料配方设5 个(表2)。
表2 原种配方配料表(%)
(1)菌株筛选。按两个配方配制原种培养料,含水量约65%。装瓶后于121 ℃高压灭菌2 h,冷却后每配方每菌株各接母种20 瓶,置于24 ℃培养箱避光培养。培养期间观察记录菌丝长势、满瓶时间及污染率等情况。
(2)配方筛选。选取菌株筛选试验中表现优良的菌株,按表2配方分别配制培养料,每菌株每配方各设20 个重复,置于24 ℃培养箱培养,记录菌丝颜色、生长速度和满瓶时间。
(3)原种培养过程中木质素、纤维素、半纤维素检测。当原种菌丝长满瓶后分别取瓶体中部培养料检测木质素、纤维素和半纤维素,每个样品设3 个重复,纤维素含量测定采用蒽酮法[6];半纤维素含量测定采用盐酸水解法[7];木质素含量测定采用硫酸酸解-滴定法[7]。
菌株筛选结果(表3)显示,黑40、黑38 和黑39 菌株在桉树木屑培养料上生长较好,满瓶较快;黑37、黑41、玉1 菌株菌丝生长缓慢,颜色淡而稀薄;在对照细木屑培养基上6 个菌株菌丝长势均良好,洁白浓密,满瓶时间在30~35 天之间。
表3 桉树木屑对6 个木耳菌株原种菌丝生长的影响
试验结果表明,黑39、黑38、黑40 三个菌株在5 个原种培养料配方上都能较好生长,菌丝均洁白浓密,以配方5 的菌丝满瓶时间最短。其中,满瓶最快的是黑39,仅需25.8 天;其次是黑38,为26.4 天;黑40 最慢,需28.5 天(表4,图1)。
由表5可知,黑39 菌株在5 个配方中半纤维素含量均为最低。表明其分解半纤维素的能力强于其他菌株,这也解释了黑39 菌株菌丝颜色及长势较好的原因。
由表6可以看出,3 个菌株不同配方培养料的木质素含量与桉树木屑的添加量没有相关性;半纤个菌株受桉树木屑的影响较小,适合在以桉树木屑 维素的含量与桉树木屑的添加量有极显著相关性;纤维素的含量,黑38 菌株与桉树木屑的添加量没有相关性,而黑39、黑40 与桉树木屑的添加量有显著相关性。
表4 5 个原种配方的黑38、黑39、黑40 菌丝生长情况
图1 5 个原种配方黑40(宁洱)的菌丝生长情况
表6 不同配方的纤维素、半纤维素、木质素含量与桉树木屑添加量的相关性分析
从图2可以看出,黑39 菌株培养基中纤维素和半纤维素含量与桉树木屑添加量总体呈正相关性,且相关性分别达到显著和极显著水准;木质素含量与桉树木屑添加量没有相关性。
6 个木耳菌株在桉树木屑和普通细木屑上的菌丝长速及形态对比结果,黑39、黑38、黑40 三 为主的培养料中生长。
表5 菌丝长满后不同配方培养料的纤维素、半纤维素和木质素含量
图2 桉树木屑添加比例与培养黑39 菌株后培养料中纤维素、半纤维素和木质素含量的关系
配方筛选结果,桉树木屑添加量为60%时,黑39、黑38、黑40 菌丝满瓶时间短,菌丝长速快,平均满瓶时间比细木屑少5.56 天。
检测结果显示,桉树木屑的添加量对3 个菌株的原种培养料中木质素、纤维素、半纤维素的利用有一定的影响,其中半纤维素含量与桉树木屑的添加量有极显著的相关性。表明桉树木屑对某些木耳菌株的生长具有一定的促进作用,可选择性地用于黑木耳菌株原种的生产。