探讨结核感染T 细胞检验联合结核菌素试验在肺结核早期诊断中的应用价值

张小军，叶建婷，彭燕芳，洪苓苓

1.厦门市第五医院呼吸内科，福建厦门 361101；2.厦门市第五医院体检站，福建厦门 361101

肺结核是临床常见的结核疾病之一， 在我国及全球范围内均有较高发病率，且具有一定传染性，对于人类公共卫生安全及患者健康均具有较大危害， 且发病后需积极接受药物治疗手段控制病情进展， 以降低患者肺功能受肺结核杆菌侵蚀性影响而发生肺不张、肺气肿等严重并发症， 故早期治疗的实施对于肺结核患者疾病治疗及预后均具有积极影响。 目前随着检验技术发展， 对于肺结核的早期诊断已具备较为完整的发展体系，如组织活检、血液检验、影像学诊断等，以痰结核分枝杆菌检验为金标准进行诊断， 但在此类检验中部分稳定期非活动期肺结核患者可能存在连续阴性情况，增加疾病潜在风险性，故需结合现阶段结核病诊断技术发展，选取更具诊断优势的检验技术，实现对肺结核患者病情准确的早期诊断[1-2]。 因此，为探讨结核感染T 细胞检验联合结核菌素试验在肺结核早期诊断中的应用价值，特方便选取该院2019 年5 月—2020 年5 月接诊207 例患者开展研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取该院收治疑似肺结核患者共207 例设为研究对象，实施回顾性诊断研究。

207 例患者中男105 例，女102 例；年龄24～76 岁，平均年龄（50.02±4.25）岁。 患者经肺组织活检、影像学及实验室检验后确诊活动性肺结核45 例，非活动性肺结核30 例。

纳入标准： 患者均在详解研究细则后确认参与该次研究，确认医院可收集其诊断结果用于该次研究；家属同意患者参与研究；研究由该院伦理会批准。 排除标准：研究期间自愿退出研究者；合并呼吸系统及口腔急性感染疾病者。

1.2 方法

患者入院后需同期接受结核感染T 淋巴细胞酶联免疫斑点试验及肺泡灌洗液结核菌核酸检测。

1.2.1 肺泡灌洗液结核菌核酸检测 灌洗肺部前需先进行局部麻醉， 其后将纤维支气管镜顶端置入亚段支气管开口处，经活检孔注入灭菌生理盐水进行灌洗，灌洗液总量为100～300 mL，单次灌洗用量为25～50 mL，灌洗完毕后负压吸引回收灌洗液，回收液滤去黏液后，将样本放入灭菌玻璃容器后冷藏送检。 检验当日需取出结核分枝杆菌培养基，并填写患者相关信息及样本编号，其后取出检验样本加入6～10 mL 氢氧化钠溶液（4%浓度）稀释，经震荡处理0.5～1 min 后，于室温环境中静置15 min 后， 吸取经预处理痰稀释液0.1 mL 后接种于培养基后在37℃环境中孵育。 接种3～7 d 后需对痰结核分枝杆菌培育情况进行观察记录， 若培养基上有菌落则需经染色处理后确认是否为结核分枝杆菌， 若连续观察至第8 周时，培养基中仍无菌落生长则为阴性[3-4]。

痰结核杆菌培养阳性判定指标： 若菌落占培养基斜面面积1/4、1/2、3/4 或全部面积时，则均为阳性，分别记录1+、2+、3+及4+。

1.2.2 T-SPOT.TB 试验 患者完成痰结核分枝杆菌样本采集后，取其外周中心静脉血5～8 mL 为检验样本，经CPT管储存后待检。 检验当日需将血液样本以1 600 r/min转速，离心处理25～30 min 后，取上清液。 其后将CPT管内核细胞层移至无菌尖底离心管后， 滴入10 mL 培养液后进行二次离心处理，以600 r/min 转速，离心处理7 min 后，取上清液，其后滴入1 mL 培养液至沉淀后进行3 次离心处理，基本参数同第2 次、第3 次离心处理完成后去除上清液， 滴入0.7 mL 重旋细胞培养液后混匀，予以稀释计数处理。处理后所得最终样本需以N、P、T 顺序依次滴入含有培养液的细胞培养板内，经恒温培养后进行检测分析[5-7]。

阳性判定标准： 以校准品浓度及发光值建立定标曲线后，以检测样本发光值回算样本浓度值。 若T-N≥0.348，则为阳性。

1.3 观察指标

以肺泡灌洗液结核菌核酸检测及涂片找抗酸杆菌和分枝杆菌培养阳性结果为金标准， 分析T-SPOT.TB肺结核早期诊断效果。

1.4 统计方法

采用SPSS 25.0 统计学软件对数据进行分析，计数资料以频数及百分比表示，组间差异比较采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检出效果

经痰结核分枝杆菌培养后检出肺结核患者共70例，其中活动性肺结核44 例， 非活动性肺结核26 例。 TSPOT.TB 试验中检出肺结核患者共72 例， 其中活动性肺结核45 例， 非活动性肺结核27 例。 对比后可知TSPOT.TB 肺结核检出率与痰结核分枝杆菌培养检出率对比差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表1。

表1 检出效果对比[n（%）]

2.2 诊断效果

T-SPOT.TB 检验敏感度与痰结核分枝杆菌培养结果具有一致性(P＞0.05)；T-SPOT.TB 肺结核诊断中假阴性率明显较低（P＜0.05）。 见表2。

表2 诊断效果分析（%）

3 讨论

结核杆菌感染作为我国公共卫生事业发展现阶段的一项重要防控工作内容， 多数患者在发病后面临着终生伴发风险，需长期服药治疗进行控制，而结核杆菌药物治疗以多药联合方案为主， 且治疗所用药物具有较高药物不良反应，临床治疗时间的延长，也可导致部分患者在病原菌耐药后尽快调整治疗方案， 延缓病情进展， 故早期治疗的开展对于结核杆菌感染患者的病情控制及治愈均具有积极影响。

肺结核作为临床常见结核杆菌感染疾病， 发病后对于人体肺功能具有明显损害性，且损害不可逆，患者病情虽可经药物治疗实现控制， 但仍面临较高并发症风险，造成健康损害。 随着对肺结核研究的深入，疾病危害性也开始逐渐被大众认知， 并衍生出一系列诊断措施，以实现对该类疾病的早期有效诊断。 肺泡灌洗液结核菌核酸检测作为目前肺结核疾病临床诊断金标准，可通过对患者样本处理、结核分枝杆菌培养后，根据菌落生长情况及抗酸染色结果对患者是否感染结核分枝杆菌感染进行有效评估， 其是以结核菌病原学为基础发展所得诊断技术，但此类检验操作大致需要7～8周，检验周期过长，且在痰液样本采集及处理中存在较多质量影响因素，导致检验结果或由于样本污染、样本质量未达标、 操作失误等因素影响检验结果的真实性及可参考性， 且部分非活动性肺结核患者可在痰结核繁殖杆菌检验中出现连续阴性结果， 在该次研究中痰结核菌培养假阴性率高达62.50%， 故存在较多应用局限[8-9]。

研究结果表明， 经痰结核分枝杆菌培养后检出肺结核患者共70 例，其中活动性肺结核44 例，非活动性肺结核26 例。T-SPOT.TB 试验中检出肺结核患者共72例，其中活动性肺结核45 例，非活动性肺结核27 例。对比后可知T-SPOT.TB 肺结核检出率与痰结核分枝杆菌培养检出率相似（P＞0.05）；SPOT.TB 检验敏感度与痰结核分枝杆菌培养结果具有一致性（P＞0.05）；T-SPOT.TB 肺结核诊断中假阴性率明显较低（P＜0.05）。 分析原因： 结核感染T 淋巴细胞酶联免疫斑点试验是目前所研发的一类新型细胞特异性酶联免疫检验法， 在国外肺结核疾病诊断中已经得到广泛应用， 在实际检验中通过对人体结核杆菌特异性抗原的有效刺激， 评估T淋巴细胞反应应答情况， 其后借助培养操作后检测T淋巴细胞浓度后， 根据检测结果判定受检者有无感染结核分枝杆菌，检验效果显著，且检验周期较短，不受卡介苗等外界因素影响，可参考性高，敏感度（96.15%）及假阴性率（37.50%）均有显著优势。 故在实际应用中可在此类检验结果基础上， 联合影像学诊断技术进一步提升检验对肺结核疾病的指示参考性[10-11]。 且该次研究结果与吴雪琴等[12]在《老年肺结核应用T 细胞斑点检验诊断临床价值》 研究中所得T 细胞斑点检验灵敏度94.81%、特异度100.00%研究结果存在一致性。

综上所述， 结核感染T 细胞检验结合结核菌素试验经过气管镜检查肺泡灌洗液找抗酸杆菌或核酸检测阳性确诊符合率达95%以上， 是一种可靠的利于患者或者健康体检筛查可能接受的常规检测方法， 同时具有操作方便、安全、经济，流程简单，不良反应少，易于全民推广等特点，有利于结核病防治和全民普查推广，可以大大减低肺结核传播和利于肺结核患者早期发现，早期诊断，早期治疗，对我国肺结核传播阻断传播途径有巨大潜在价值。