希森美康XN血液分析仪淋巴细胞结构参数在IM与B-CLPD鉴别诊断中的临床意义

周正宇，马 炜，吴 康，张 明，岳展伊

(海军军医大学附属上海长海医院实验诊断科，上海 200433)

传染性单核细胞增多症(IM)是一种以咽喉肿痛、淋巴结肿大、发热和疲劳为典型临床症状的传染性疾病，可合并肝脾大，外周血淋巴细胞增多，其中含大量异型淋巴细胞(>10%)，多种病原体可以导致IM,约90%的病例由一种γ疱疹病毒EB病毒(EBV)引起，另一种疱疹病毒人类巨细胞病毒(CMV)通常被认为与EBV阴性的IM有关[1-3]。B细胞慢性淋巴增殖性疾病(B-CLPD)是一组累及外周血和骨髓的成熟B细胞克隆增殖性疾病，包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)、淋巴浆细胞淋巴瘤(LPL)、毛细胞白血病(HCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区淋巴瘤(MZL)等疾病，各类型均可出现淋巴结/脾大，或可出现发热、贫血等症状，血常规检测外周血淋巴细胞增多[4]，其临床表现与血常规仪器检测结果与IM类似，在初诊时易将二者混淆，若能便捷、快速地对二者进行鉴别，将有效提高诊断效率。希森美康 XN血液分析仪的淋巴细胞结构参数包括L-WX、L-WY、L-WZ、L-X、L-Y、L-Z，是淋巴细胞结构与形态的量化指标，本研究将探讨其在IM与B-CLPD鉴别诊断中的临床意义。

1 材料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2017年12月至2019年3月于上海长海医院门诊就诊的淋巴细胞增多患者(343例)希森美康XN血液分析仪淋巴细胞结构参数结果，根据患者临床诊断分为3组，其中IM组样本111例，B-CLPD组样本87例，其他原因引起的非肿瘤性淋巴细胞增殖组样本145例。

1.2主要仪器与试剂 希森美康 XN 血液分析流水线(含SP-10推片仪)及其配套试剂与耗材(日本希森美康公司)；EDTA-K2真空采血管(山东威高公司)。

1.3方法 患者EDTA-K2抗凝血样本使用希森美康XN血液分析流水线检测，记录各样本淋巴细胞结构参数的结果及患者的临床诊断。

1.4统计学处理 使用SPSS22.0软件进行统计学分析，所有数据经Kolmogorov-Smirnov检验均不符合正态分布，因此计量资料使用M(P25～P75)表示，3组数据间差异性比较使用Kruskal-WallisH检验，并进一步使用Dunn-Bonferroni检验比较3组中两两之间的差异，利用Logistic回归分析生成各淋巴细胞结构参数的联合诊断因子，受试者工作曲线(ROC曲线)用以评价各指标在诊断中的价值，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1各组间淋巴细胞结构参数比较 各淋巴细胞结构参数(L-WX、L-WY、L-WZ、L-X、L-Y、L-Z)水平在IM组、B-CLPD组、非肿瘤性增殖组3组间有差异，差异有统计学意义(H=46.399～190.487,P<0.001)，见表1。使用Dunn-Bonferroni检验进一步对各组间淋巴细胞结构水平进行两两比较，IM组L-WX、L-WY、L-X、L-Y、L-Z水平高于B-CLPD组，IM组L-WX、L-WY、L-WZ、L-X、L-Y、L-Z水平高于非肿瘤性增殖组，B-CLPD组L-WZ、L-X、L-Z水平高于非肿瘤性增殖组，差异均有统计学意义(调整后P<0.001),L-WZ在IM组与B-CLPD组间差异无统计学意义(调整后P=0.091),L-WX、L-WY、L-Y在B-CLPD组与非肿瘤性增殖组间差异无统计学意义(调整后P=0.079、0.841、0.507)。

表1 各组淋巴细胞结构参数水平比较[M(P25～P75)]

2.2Logistic回归模型的建立 以诊断结果为IM或B-CLPD作为二分类因变量，各淋巴细胞结构参数为协变量，利用SPSS软件中LR前进法功能对参数进行筛选，生成联合诊断因子pre1，建立Logistic回归方程,方程表达为logist(pre1)=-72.090+0.014(L-WY)+0.171(L-X)+0.683(L-Z)。见表2。

2.3pre1鉴别IM与B-CLPD的临床价值 利用SPSS22.0生成pre1与各淋巴细胞结构参数鉴别诊断IM与B-CLPD的ROC曲线，见图1，pre1鉴别诊断IM与B-CLPD的ROC曲线下面积为0.980，高于各淋巴细胞结构参数，差异有统计学意义(P<0.05)，当取临界值为0.594 5时，灵敏度为91.9%，特异度为96.6%，见表3。

表2 各淋巴细胞结构参数鉴别IM与B-CLPD的Logistic模型拟合参数(LR前进法)

续表2 各淋巴细胞结构参数鉴别IM与B-CLPD的Logistic模型拟合参数(LR前进法)

注：-表示该项无数据。

图1 pre1与各淋巴细胞结构参数鉴别诊断IM与B-CLPD的ROC曲线

表3 pre1与各淋巴细胞结构参数鉴别诊断IM与B-CLPD的诊断价值

项目AUC标准误Pcut-off值灵敏度(%)特异度(%)pre10.9800.008<0.0010.594 591.996.6L-WX0.8260.029<0.001557.577.579.3L-WY0.9370.017<0.0011 134.081.194.3L-WZ0.6010.0410.015710.544.188.5L-X0.7640.036<0.00179.6598.246.0L-Y0.8280.030<0.00184.9562.289.7L-Z0.8080.033<0.00160.7596.455.2

2.4联合诊断因子效能的验证 选取2019年4月至2019年7月IM患者样本与B-CLPD患者样本各16例，使用希森美康 XN血液分析仪对样本进行检测并将测得的淋巴细胞结构参数，原方程变形后得到pre1=1/{1+e-[-72.090+0.014(L-WY)+0.171(L-X)+0.683(L-Z)]}，将数据代入方程，计算pre1的值，pre1≥0.594 5诊断为IM，pre1<0.594 5诊断为B-CLPD，验证得出联合诊断因子鉴别诊断IM与B-CLPD的灵敏度为87.5%，特异度为100.0%，准确度为93.8%。

3 讨 论

IM病程多数为自限性且预后良好，少数迁延不愈则可能会出现严重并发症，外周血中出现的大量异型淋巴细胞是诊断IM的重要证据[3,5]，这些异型淋巴细胞被ICSH建议报告为反应性淋巴细胞，用以和肿瘤性增殖的淋巴细胞区分[6],异型淋巴细胞形态与正常淋巴细胞相比，胞体增大，胞质增多，胞核母细胞化，嗜碱性增强，目前国内一般根据细胞形态将其分为浆细胞型、单核细胞型、幼稚型3类[7]。B-CLPD多数进展缓慢，但可向侵袭性发展，难以治愈，淋巴细胞以成熟淋巴细胞为主[4]，但是形态与正常淋巴细胞形态相比，亦有不同：CLL与MCL常见异常的成熟淋巴细胞，偶见带有核仁的幼稚淋巴细胞；LPL细胞核具有淋巴细胞特征，其他方面具有浆细胞特征；HCL细胞胞质较丰富，有不规则“毛发样”突起，核比正常淋巴细胞大，染色质较疏松；MZL核质比较大，核仁明显，胞质一侧具有短小绒毛[8]。当怀疑IM或是淋巴组织增生时，血涂片检查是一项重要的辅诊手段，通过观察细胞形态可以辨别增殖淋巴细胞的性质：异型淋巴细胞增多、肿瘤性淋巴细胞增殖或是其他类型非肿瘤性淋巴细胞增殖。故而识别和报告血涂片中白细胞分类的能力非常重要，技术人员鉴别细胞的能力基于其个人经验，且各种细胞的形态没有标准化的定义，因此，个体技术人员识别细胞的能力存在偏差[9]。虽然通过流式细胞术等技术检测细胞表面标志物可以鉴别淋巴细胞的性质，但是与血常规及血涂片检测相比，检测时间较长，成本较高，作为初筛检测效率较低。

希森美康XN系列血液分析仪虽然可以给出异型淋巴细胞或是异常淋巴细胞等报警信息，但这种报警信息的准确度不高[10]，希森美康 XN 血液分析仪分类计数白细胞的原理是通过检测前向散射光、侧向散射光、侧向荧光对不同形态的白细胞进行判断：前向散射光是激光束照射细胞时,光以0°角散射的讯号，其强度反映细胞的大小；侧向散射光是激光束照射细胞时,光以90°角散射的讯号，其强度反映细胞的复杂程度；侧向荧光是荧光染料对细胞核酸染色后产生的荧光讯号，其强度反映细胞核酸的量。相对于散点图以可视化的形式反映这3种光对白细胞的检测结果，淋巴细胞结构参数以量化的形式反映这3种光对白细胞的检测结果：X、Y、Z的值分别代表细胞胞内的平均复杂程度、细胞核酸的平均含量、细胞胞体平均大小；WX、WY、WZ的值分别代表细胞胞内复杂程度不均一性、细胞核酸含量不均一性、细胞胞体大小不均一性[11]。由于异型淋巴细胞、B-CLPD外周血淋巴细胞、正常淋巴细胞形态上的差异，IM组淋巴细胞结构参数中的L-WX、L-WY、L-X、L-Y、L-Z高于B-CLPD组(P<0.001)，IM组所有淋巴细胞结构参数均高于非肿瘤性增殖组(P<0.001)，而L-WZ在两组间差异无统计学意义(P=0.091)的原因可能为IM组与B-CLPD组淋巴细胞胞体大小均存在一定不均一性。B-CLPD组部分淋巴细胞结构参数(L-WZ、L-X、L-Z)高于非肿瘤性增殖组(P<0.001)，说明两组间淋巴细胞的体积与胞内复杂程度差异较大；反映核染色质的淋巴细胞结构参数L-WY与L-Y在两组间差异无统计学意义(P=0.841，P=0.507)著说明两组间核染色质的量差异不大，其原因可能如前文所述，虽然B-CLPD的淋巴细胞以成熟淋巴细胞为主但仍与正常淋巴细胞形态有差异。

已有一些学者研究血液分析仪提供的淋巴细胞结构参数在IM的诊断价值，谢晓英等[12]研究表明L-Y在IM患者与健康人群间有差异，王宏等[13]探讨了L-X、L-Y在筛查IM、ALL中的应用。SALE等[14]的研究虽然与本研究类似，探讨了淋巴细胞结构参数在IM与慢性淋系肿瘤鉴别中的价值，但其只探讨了L-WX、L-WY、L-WZ 3项指标，且在对3项指标设定阈值联合诊断的方法上较为粗糙，而本研究根据淋巴细胞结构参数与淋巴细胞形态间的关系，探讨所有淋巴细胞结构参数(L-WX、L-WY、L-WZ、L-X、L-Y、L-Z)，并用Logistic回归研究各参数联合鉴别诊断IM与B-CLPD、其他类型非肿瘤性淋巴细胞增殖的临床意义，本研究结果表明淋巴细胞结构参数在鉴别IM与B-CLPD方面，均具有较高的灵敏度(91.9%)、特异度(96.6%)。

本研究的不足首先在于样本量不大，其次，淋巴系统增殖性疾病远不止B-CLPD一种，较为繁多，分类较细，若能在扩大样本量的基础上探讨各类淋巴系统增殖性疾病的淋巴细胞结构参数，可能会得到更加全面的研究结果。

4 结 论

通过Logistic回归联合淋巴细胞结构参数中的L-WY、L-X、L-Z在鉴别诊断IM与B-CLPD中有较高的价值，这些指标在通过希森美康XN血液分析仪检测血常规时即可便捷获得，在拥有一定诊断准确性的同时拥有较高的筛查效率。