子痫前期孕妇血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达与病情相关性分析

吴 敏

湖北省大冶市人民医院(435100)

子痫前期是妊娠20周后出现的以新发高血压和蛋白尿为特征的一组疾病，发生率为5%[1]。病因及发病机制尚不明确，防治缺乏有效性，探寻关键分子对防治子痫前期有重要意义。微小RNA(miRNAs)可抑制靶向mRNA表达，还可参与细胞增殖、分化、凋亡等生命活动[2-3]。有研究发现[4]miR-26a-5p可通过下调髓细胞白血病因子1(MCL-1)表达参与子痫前期发生与发展，但其在子痫前期孕妇血浆及胎盘组织中变化研究较少。本研究检测miR-26a-5p在子痫前期孕妇血清和胎盘中的表达，分析其与子痫前期孕妇临床病理特征的相关性及临床意义，为临床防治提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

用单中心前瞻性研究方法，分析2017年12月-2018年12月在本院分娩的122例孕妇，其中子痫前期孕妇为观察组，正常妊娠孕妇为对照组。纳入标准：①符合子痫前期诊断标准[4]；②心肝肾功能正常；③凝血功能正常；④未合并恶性肿瘤；⑤妊娠期未发生感染性疾病。排除标准：①合并高血压或糖尿病；②合并过敏性疾病或自身免疫性疾病；③先天性心脏瓣膜发育异常；④入院资料不全；⑤合并慢性肾脏病。本研究经本院伦理委员会审批，研究对象及其家属知情同意。

1.2 研究方法

所有研究对象入院后记录临床资料，包括年龄、孕周等，采用电子血压计(中国欧姆龙有限公司)测量收缩压、舒张压。收集24 h尿液，采用干化学法测定蛋白尿水平。抽取外周静脉血，全自动生化分析仪(深圳市瀚德标检生物工程有限公司)检测血浆白蛋白水平。采用总RNA提取试剂盒(武汉艾美捷科技公司)提取血浆及胎盘组织中总RNA，总RNA逆转录成cDNA行PCR扩增，每份RNA样本重复检测3次，根据扩增曲线读取循环数(Ct)，将GAPDH作为内参基因，采用相对定量法以2-△△Ct对血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达水平进行相对定量分析。

1.3 统计学方法

采用SPSS22.0对研究数据进行统计分析，采用t检验比较组间收缩压、舒张压、蛋白尿、miR-26a-5p，采用Pearson相关分析子痫前期孕妇血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达与临床病理特征的相关性，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组孕妇临床病理特征

观察组122例，年龄(31.2±4.2)岁(22～40岁)，孕周(38.1±2.5)周(35～41周)；子痫前期70例，重度子痫前期52例。对照组61例，年龄(30.9±3.6)岁(21～39岁)；孕周(37.5±2.7)周(35～42周)，两组基线资料无差异(P>0.05)。观察组收缩压、舒张压、蛋白尿水平高于对照组,血浆白蛋白水平低于对照组(均P<0.05)(表1)。

2.2 两组血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达

观察组血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达水平(5.33±1.99、5.86±2.35)均高于对照组(1.12±0.68、1.25±0.59)(t=15.636、14.560，均P<0.001)(图1)。

表1 两组孕妇临床病理特征

M：maker；1、2：样本(左：观察组 右：对照组)图1 胎盘组织中 miR-26a-5p PCR扩增产物电泳图

2.3 不同子痫前期程度孕妇miR-26a-5p表达

观察组中，重度子痫前期孕妇血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达水平(7.79±2.89、7.25±3.47)高于子痫前期孕妇(4.38±1.86、5.01±2.55)(t=-7.441、-3.933，均P<0.001)。

2.4 子痫前期孕妇miR-26a-5p表达与临床病理特征相关性

子痫前期孕妇血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达均与收缩压、舒张压、蛋白尿水平呈正相关，与血浆白蛋白水平呈负相关(均P<0.05)(表2)。

表2 子痫前期孕妇miR-26a-5p表达与临床病理特征相关性

3 讨论

子痫前期是临床造成孕产妇和围生儿死亡的常见原因之一，临床表现为头痛眼花、恶心呕吐、上腹不适等症状，严重者可引起抽搐或昏迷[5]。发病机制可能与遗传、胎盘缺血缺氧、内皮功能紊乱、免疫功能失调等有关[6]。本研究就miR-26a-5p在子痫前期孕妇血浆及胎盘组织中表达及其与病情相关性进行探讨，以期寻找相关生物标志物应用于临床。

miRNAs是一类调控基因表达的小RNA分子，约70 % miRNA基因位于TUs区且多数位于内含子区[7]。目前已在动植物及病毒中发现4361个miRNA分子，具高度保守性、组织细胞特异性、时序性，可参与人类1/3基因转录后调控，并可参与细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、脂肪代谢等重要生命活动[8]，如miR-26a-5p、miR-1233等。以往研究发现[9]miRNAs在急性髓细胞白血病(AML)中异常表达并与AML病情进展相关。有研究发现[10]miR-26a-5p可促进子宫内膜癌细胞凋亡。另有研究发现[11]妊娠高血压疾病患者胎盘组织中miR-1233表达水平升高。Ying Y等[12]比较子痫前期孕妇及正常孕产妇胎盘组织中miR-26a-5p表达变化时发现miR-26a-5p差异明显，而这种差异与凋亡和转录调控有关。本研究结果显示观察组孕妇血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达水平均高于对照组，提示miR-26a-5p参与孕妇子痫前期的发生：且重度子痫前期孕妇血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达水平均高于子痫前期孕妇，说明孕妇血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达随着子痫前期病情加重逐渐升高。

子痫前期临床病理特征为新发高血压和蛋白尿，其机理主要是子痫前期孕妇体循环动脉血压增高，血液稀释，血浆白蛋白开始降低，出现内皮功能紊乱而导致血管内皮损伤；血管内皮损伤后血管通透性增加，血浆白蛋白从肾小管滤过产生蛋白尿，最终导致全身多系统损害[13-14]。因此收缩压、舒张压、蛋白尿水平、血浆白蛋白水平变化可在一定程度上反映子痫前期病情。本研究显示子痫前期孕妇血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达与收缩压、舒张压、蛋白尿水平呈正相关，与血浆白蛋白水平呈负相关，提示子痫前期孕妇血浆白蛋白水平越低，miR-26a-5p表达水平越高，子痫前期病情越重；子痫前期孕妇收缩压、舒张压、蛋白尿水平越高，miR-26a-5p表达水平越高，子痫前期病情越重。本研究结论与以往研究结果有相似之处，Ghanbari R等[15]通过动物实验发现足突细胞特异性miR-26a-5p功能缺失导致小鼠出生2周后发生显著蛋白尿，导致小球和肾小管损伤。由此说明miR-26a-5p可能通过调控子痫前期孕妇肾小球滤过膜功能而导致蛋白尿增多，miR-26a-5p有助于进一步监测子痫前期病情变化，作为判断子痫前期的生物标志物应用于临床。

综上所述，miR-26a-5p在子痫前期孕妇血浆及胎盘组织中均呈高表达且与病情严重程度相关，可作为诊治子痫前期的新分子靶点，但其调控机制有待进一步研究。