miR-126和CA125在乳腺癌中的含量及其临床意义

王 卉 陆芸瑶 吴立翔 喻 垚 李光新 郭变琴

microRNA(miRNA)具有组织特异性、稳定性等优点，越来越多的miRNA被用来作为癌症诊断的标志物[1]。研究发现miR-126在胃肠道肿瘤、甲状腺肿瘤、肺癌等多种肿瘤细胞中表达异常[2]。CA125是用于卵巢癌筛查的肿瘤标志物，许多研究显示，CA125在其他癌症及免疫性疾病中也有重要作用[3]。

miR-126和CA125在乳腺癌中的研究相对较少，因此本研究检测了乳腺癌患者肿瘤组织中miR-126的含量及血浆中CA125的含量，同时分析其与患者临床病理特征间的关系，希望这些新的标志物可以为乳腺癌的诊断和治疗提供依据。

资料与方法

1.临床资料:收集重庆大学附属肿瘤医院2017年1月～2018年1月间冻存的石蜡包埋乳腺癌组织标本26例，所有患者均经病理科医生确诊，术前均未接受放疗、化疗，且临床病理资料完整,患者平均年龄52.08±7.92岁。根据美国癌症联合会(AJCC)和国际抗癌联盟(UICC)有关乳腺癌的TNM分期标准：Ⅰ期5例，Ⅱ期12例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例；有淋巴结转移者16例，无淋巴结转移者10例。癌旁组织36例，患者平均年龄 40.89±12.27岁。回顾乳腺癌患者的临床病理资料，获得26例患者的血浆CA125检测结果，随机抽取同期检测的健康对照血浆CA125检测结果39例，平均年龄43.92±15.31岁。本研究经笔者医院医学伦理学委员会批准，且所有患者均签署知情同意书。

2.试剂与仪器:石蜡包埋组织切片miRNA 提取试剂盒购自天根生化科技有限公司，miRNA反转录试剂盒、miR-126及内参U6的特异性茎环引物购自美国GeneCopoeia公司，SYBR®Premix Ex Taq 试剂盒购自宝生物工程有限公司，CA125检测试剂购自德国西门子公司。CFX-Connect荧光定量PCR仪、NanoDrop 1000核酸浓度测定仪、Fresco17 高速冷冻离心机购自美国Thermo公司，ADVIA Centaur CP全自动化学发光免疫分析仪购自德国西门子公司。

3.实验方法: (1)使用石蜡包埋组织切片miRNA 提取试剂盒提取乳腺癌及癌旁组织石蜡切片中的miRNA。经NanoDrop 1000 核酸浓度测定仪检测获得的miRNA的纯度及浓度合格后，用miRNA反转录试剂盒进行反转录。反转录产物按照 SYBR®Premix Ex Taq 试剂盒提供的方法检测组织中miR-126的含量。上述实验进行3次重复。(2)按照西门子ADVIA Centaur CP全自动化学发光免疫仪使用说明，检测乳腺癌患者及健康对照血浆中CA125的含量。

结 果

1.miR-126在乳腺癌患者癌旁组织和肿瘤组织中的含量:实时荧光定量PCR检测26例乳腺癌患者肿瘤组织及36例癌旁组织中miR-126的含量，结果显示二者间miR-126的含量比较差异无统计学意义(P=0.139,图1)。

图1 miR-126在乳腺癌患者癌旁组织和肿瘤组织中的水平

2.CA125在健康对照及乳腺癌患者血浆中的含量:应用化学发光免疫法检测26例乳腺癌患者化疗前及39例健康对照血浆中CA125的含量，与对照组比较，乳腺癌患者血浆中CA125含量明显升高(P=0.012,图2)。

图2 CA125在健康对照及乳腺癌患者血浆中的含量

3.乳腺癌患者化疗前血浆中CA125的含量与临床病理特征间的关系:以乳腺癌患者血浆中CA125含量的中位数为分界点，分为高含量组和低含量组。乳腺癌患者化疗前血浆中CA125的含量与患者区域淋巴结转移情况有关(P=0.010)，与年龄(P=0.560)、肿瘤直径(P=0.226)、临床分期(P=0.086)等无关(表1)。

表1 乳腺癌患者化疗前血浆中CA125的含量与临床病理特征间的关系

4.CA125在乳腺癌患者化疗前血浆中不同区域淋巴结临床分类中的含量:为了进一步分析CA125的含量与乳腺癌患者区域淋巴结临床分类的关系(N0：无区域淋巴结转移；N1：同侧腋窝淋巴结转移，可移动;N2：同侧腋窝淋巴结转移,固定或融合；N3：同侧锁骨下/上淋巴结转移)，笔者分析了不同区域淋巴结临床分类中CA125的含量，结果显示N2组CA125的含量比N0组增多，差异有统计学意义(P=0.017);其他组CA125含量两两比较，差异均无统计学意义(图3)。

图3 CA125在乳腺癌患者化疗前不同区域淋巴结临床分类中的含量

讨 论

乳腺癌是世界女性最常见的恶性肿瘤之一，尽管有许多治疗乳腺癌的方法，它仍是导致女性癌症死亡的主要原因[4,5]。许多乳腺癌患者在初诊时已到中晚期，这是导致乳腺癌复发和治疗失败的主要原因。因此探究一种简单、经济成本低且能预测乳腺癌发生、发展情况的肿瘤标志物具有重要的意义。

CA125又称黏蛋白16或MUC16,是一种黏蛋白家族的膜糖蛋白，由MUC16基因编码[6，7]。CA125最早是在卵巢癌的小鼠模型中发现的，研究发现人类的胸膜、腹膜间皮细胞、乳腺导管、细支气管上皮、子宫内膜、输卵管及卵巢等均会表达CA125。正常生理状态下(如女性月经期或孕期)仅有极少量的CA125进入血液循环中[1]。临床上CA125常被用来筛查和诊断卵巢癌，也有少量研究探讨了CA125作为肿瘤标志物在乳腺癌的诊断、监测与预后中的作用[8]。本研究中，乳腺癌患者血浆中的CA125含量明显高于健康对照。这一结果与多项研究相符。Zhang等[9]分析比较了65例乳腺癌患者和50例健康对照血清中CA125的含量，结果显示乳腺癌患者血清中CA125含量明显高于健康对照。另有研究报道，151例乳腺癌患者的血清CA125水平显著高于180例健康对照[8]。笔者的另一个发现是CA125的含量与患者区域淋巴结临床分类相关，这与Zhang等[9]的研究结果相一致。而且Fang等[8]研究也发现高表达CA125的乳腺癌患者中有54.3%存在淋巴结转移。伴随淋巴结转移的乳腺癌患者CA125升高的原因可能是肿瘤细胞转移至淋巴结的过程中浸润至胸膜、腹膜间皮细胞、乳腺导管等，机体应激性分泌了大量的CA125[10]。

miR-126在胃肠道肿瘤、生殖系统肿瘤及肺癌等中，可通过对PI3K、KRAS、EGFL7、CRK等基因的调节，参与癌细胞的增殖，迁移和侵袭[2]。乳腺癌中，miR-126参与癌细胞的增殖与转移[11，12]。Wang等[13]研究表明，与癌旁组织比较，乳腺癌组织中miR-126的表达下调。笔者的研究结果发现，乳腺癌患者肿瘤组织和癌旁组织中miR-126的含量比较差异无统计学意义，可能是由于本研究的样本量偏少，并且收集的乳腺癌患者合并了不同的基础疾病，如高血压、糖尿病等，不同疾病状态可能对miR-126的表达有一定的影响。

乳腺癌的转移是导致乳腺癌患者死亡最重要的原因之一,多数患者在转移后5～10年死亡[14～16]。转移性乳腺癌的早期发现与治疗一直是研究者努力攻克的难题。CA125在乳腺癌淋巴结转移的患者中表达普遍升高，但其预警作用还需开展深入研究。