无油安全套对精子受精功能与DNA碎片指数检测结果影响的观察

赵 晋 黄泗翀 黄立光 邓泽桦 关艺青 张汉奎

广东省中山市人民医院(528400)

男性精液检查标本无法通过手淫方式获取者，在家使用安全套收集精液是有效手段之一。专用的(博瑞德male freeSCD-I型)价格昂贵，且普通群众在市面上也难以购买。 国内有学者对市场上20多种安全套进行精子生物毒性研究，发现金香无油安全套对精子的生物毒性小，精子存活指数和博瑞德male freeSCD-I型精液采集器很接近[1]。本研究通过检测与金香无油安全套接触后精液的精子受精功能以及DNA碎片指数(DFI)，探讨该安全套收集精液标本的可行性。

1 标本和方法

1.1 标本

1.1.1标本收集收集本中心男科实验室行精液常规分析，根据WHO《人类精液实验室手册》第五版标准参数正常且精液体积>2.0ml的标本。

1.1.2实验组用加样器吸取液化混匀标本1.0ml加入到无油安全套(上海金香乳胶制品有限公司，批号：190772)球囊部，置于震荡器托盘上轻柔摇晃5min后转移至Falcon 5ml离心管，15min后检测精子活力，精子顶体酶活性、顶体反应和DFI。

1.1.3对照组取实验组同一份标本的精液1.0ml置于Falcon 5ml离心管中，20min后同法检测精子活力，精子顶体酶活性、顶体反应和DFI。

1.2 检测方法

1.2.1精子活力检测按SQA-V全自动精液质量分析仪(以色列)使用说明操作，结果参考相关指标和标准[2]。

1.2.2精子顶体酶活性检测严格按照精子顶体酶活性检测试剂盒(底物酶法，深圳华康生物医学工程有限公司)和雷杜RT-6500酶标分析仪检测(深圳)使用说明书操作。结果判定为在24℃反应温度下，1 U顶体酶活性=24℃水解1.0μmol/min BAPNA。正常参考值: 48.2～218.7μU/106精子。计算公式：

1.2.3诱发精子顶体反应测定在精液动态学检查结束后立即刻进行取样测定，严格按照诱发精子顶体反应检测试剂盒(钙离子载体法，深圳市博瑞德生物科技有限公司)使用说明操作。结果判定为使用钙离子载体A23187处理，诱导精子发生顶体反应，观察精子顶体区的荧光变化，判定顶体反应的发生状况。正常参考范围：钙离子载体诱发的顶体反应率≥15%。结果计算公式：

钙离子载体诱发的顶体反应率(%)=测定管顶体反应率-对照管顶体反应率

1.2.4精子DNA碎片指数检测(SCSA法)严格按照吖啶橙染色试剂盒(深圳市博瑞德生物科技有限公司，批号：2020401)说明书及流式细胞仪(迈瑞流式细胞仪BricyteE6，深圳)操作说明进行检测，记录检测结果。正常参考值：DFI<30%。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 精子活力

实验组精子活力[(PR+NP)%]为(58.7±12.4)%，低于对照组(63.6±11.4)%(t=7.3，P<0.05)。

2.2 顶体酶活性

实验组精子顶体酶活性结果低于对照组，顶体反应结果高于对照组(t=5.7，P<0.05；t=5.113，P<0.05)。而DFI与对照组无差异(P>0.05)。见表1。

表1 两组患者精子顶体酶、顶体反应、DFI检测结果比较

3 讨论

国内有学者对市面上多款安全套对精子生物毒性的研究，发现金香无油安全套的精子生物毒性比其他有油安全套要小很多，精子存活指数明显更好[1]。但该研究只涉及对精子活力方面的影响，并未对精子功能的影响进行更深入的研究，国内也未见避孕套对精子功能检测结果影响的研究报道。

精液常规分析(精液体积、精子浓度、前向运动百分率、存活率、以及形态学)是评估男性生育能力的基本检查，检测结果可为临床医生提供初步的诊断依据[3]。但精液分析不能准确反映出精子的受精功能和遗传物质的稳定性，因此有必要通过更多的检测指标评价男性生育力[4]。相关研究表明，精子顶体酶活性、精子顶体反应、DFI能够更有效、准确地判断男性患者生育能力的高低，是进行辅助生殖前的重要参考指标[5-7]。

本实验采用较低生物毒性飞金香无油安全套进行实验，对与该安全套接触的精液进行精子受精功能和DFI检测，并与未接触安全套的精液进行比较。结果表明，即使是市面上精子生物毒性相对低的金香无油安全套也会使精子活力和顶体反应检测结果降低，顶体酶活性检测结果升高，而DFI结果无差异。

市场上大多安全套都是采用天然乳胶为基质材料，添加防老剂、促进剂、硫化剂等橡胶助剂，增强安全套的物理化学性能，但对精子具有生物毒性[8-10]。特别是为使安全套更有弹性，在生产过程需要硫化处理，这过程产生亚硝胺等物质具有较强的生物毒性。顶体区的细胞膜上有识别诱发顶体反应的受体[11]。笔者认为，安全套中可能存在一些有害物质通过损伤精子细胞膜，从而使顶体反应的检测结果低于对照组。同样的，由于细胞膜受损，在膜内的顶体酶在检测过程中释放更完全，因此实验组顶体酶活性检测结果高于对照组。而精子DNA存在于更深的位置，与相关蛋白形成相对稳定的染色体结构，且外层有细胞核保护，因此精液与该避孕套短暂接触并没有影响到DNA的完整性。