不同免疫检验在抗HIV 检测中的结果对比

徐彩姝

艾滋病作为一种具有较强传染性的疾病,主要由HIV 感染后所引发,当人体感染这种病毒后会导致自身免疫系统中的CD4T 淋巴细胞受到不同程度的破坏,使人体免疫系统功能损害或者丧失,进一步增加身体感染各种疾病的风险性,对于生命安全威胁极大［1］。由于该疾病会对人体免疫功能造成损害,因此又被称为获得性免疫缺陷综合征,目前医学界尚无明确的该疾病治疗方法,同时该疾病本身具备较长潜伏期,且发病前无特殊症状,因此临床上诊断难度很高,如何有效确诊艾滋病患者,使该疾病得到有效控制已经成为目前医学界广泛关注的重点内容［2］。目前临床上常用的检测方法为免疫检验,其中以胶体金快速法与ELISA法较为常见,但对于这两种方法临床诊断准确性仍然需要进一步确定。本次研究旨在探讨胶体金快速法与ELISA 法对于HIV 抗体的检测准确性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2019 年1～12 月采集的189 例艾滋病疑似患者,其中男103 例,女86 例,年龄26～45 岁,平均年龄(33.18±4.26)岁,病程1～6 年,平均病程(2.91.±0.80)年。纳入标准：①均由免疫印迹法确诊；②自愿签署知情同意书；③病情稳定且意识处于正常状态；④经本院伦理委员会批准；⑤无严重内科疾病或者肢体功能障碍。排除标准：①合并存在严重恶性肿瘤；②存在精神障碍或者沟通障碍情况；③合并存在严重代谢异常情况；④临床资料不够完善。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 本次研究所涉及的仪器与试剂包括：HIV 抗体检测试剂盒(英科新创科技)、Anti-HIV ELISA Kit(北京万泰生物药业)、全自动时间分辨荧光-酶联免疫分析仪(深圳爱康)。

1.2.2 检测方法 所有患者分别接受胶体金快速法与ELISA 法。

1.2.2.1 胶体金快速法 ①待标记蛋白溶液制备：将提前准备好的pH=7.0 氯化钠溶液(0.005 mol/L)与待标记蛋白进行透析,确保其中多余盐离子去除后,再将10000 g 4℃进行离心处理,以1 h 为标准时长,将其中聚合物彻底清除。②待标胶体金溶液准备：使用适量的碳酸钾(0.1 mol/L)或者适量的氯化氢(0.1 mol/L)对胶体金液pH 值进行适当调节。根据不同标记类型适当调节pH 值,在标记IgG 时需调节至9.0,在标记单克隆抗体(McAb)时需调节至8.2,在标记亲和层析抗体时需调节至7.6,在标记金黄色葡萄球菌A 蛋白(SpA)时需调节至5.9～6.2,在标记刀豆凝集索A(ConA)时需调节至8.0,在标记亲和素时需调节至9～10。按照待标记蛋白需求的相应要求,对胶体金的pH 进行调节后分别装入10 个不同试管内,每个试管1 ml。以免疫球蛋白G(IgG)为例,通过pH=9.0 硼酸盐缓冲液(0.005 mol/L)对标记蛋白进行稀释处理后,将1 ml 的稀释液加入金胶溶液内,确认混匀；其中对照组试管仅加入1 ml 的稀释液,待5 min 后再次添加浓度为10%的0.1 ml 的氯化钠溶液于上述各试管内,待混匀后静置一段时间,以2 h 为标准,对结果进行观察记录。最后通过超速离心法对胶体金标记蛋白纯化情况进行准确检测,记录相应结果。

1.2.2.2 ELISA 法 严格按照HIV 抗体检测试剂盒说明书进行操作,对检测结果进行观察与记录。

1.3 观察指标 以免疫印迹法诊断结果作为金标准,分别统计ELISA 法、胶体金快速法与免疫印迹法诊断结果。按照相应计算公式对两种检测方法的敏感性、特异性及检测准确率。敏感性=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%；特异度=真阴性/(真阴性+假阳性)×100%；检测准确率=(真阳性+真阴性)/总例数×100%。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0 统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

189 例疑似艾滋病患者经由免疫印迹法确诊,经血清检验后其中HIV 抗体阳性114 例,HIV 抗体阴性75 例。ELISA 法检测HIV 抗体阳性114 例、HIV 抗体阴性75 例。胶体金快速法检测HIV 抗体阳性115 例、HIV 抗体阴性74 例。ELISA 法检测HIV 的敏感性、特异性、准确率分别为92.1%、88.0%、90.5%高于胶体金快速法检测的83.3%、73.3%、79.4%,差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1,表2,表3。

表1 ELISA 法与免疫印迹法诊断结果比较(n)

表2 胶体金快速法与免疫印迹法诊断结果比较(n)

表3 两种免疫检测方法敏感性、特异性、准确率比较(%)

3 讨论

根据相关资料显示,艾滋病多见于青壮年群体,HIV 病毒在人体内潜伏期较长,平均潜伏时间可达到8～9 年；许多患者在发病前均可正常工作与生活,但发病后会表现出多种临床症状,包括盗汗、持续性发烧、全身淋巴结肿大、虚弱等,当病情逐渐加重会导致导致消化道症状、神经系统症状、呼吸道症状、皮肤损害、肿瘤、黏膜损害等。艾滋病存在较强传染性,传染途径包括母婴传播、性接触传播、血液传播［3,4］。

目前临床上针对该疾病的检查方法较多,主要包括机体免疫功能检查、病原体检查、HIV 抗体检测等,其中以HIV 抗体检测应用较为广泛,其中常见的检测方法为胶体金快速法与ELISA 法［5］。ELISA 法即酶联免疫吸附试验,其检测原理为：当抗体与酶相结合后,不会造成抗体免疫性反应的特异性发生变化,也不会对酶活性造成影响,在补充相应底物后造成基质水解呈色,可改变还原型氢体颜色,使其从无色逐渐转变为有色,通过呈色反应可发现酶,该方法能够在细胞水平上显示抗体存在部位,不仅具备较高特异性与敏感性,还可通过纳米水平或者微克水平进行定量,可有效避免正常受检者假阳性检出结果,整体应用效果较好,目已经广泛应用于临床［6,7］。而胶体金快速法主要通过胶体金进行检测,由于胶体金呈现为红色,检测过程中安全性较高,且标记物稳定性较强,整体检验过程较为简便,具备较高准确性,反应时间不超过30 min,对于仪器药物不高,因此该方法也得到广泛应用［8,9］。

在本次研究中,胶体金快速法检测HIV 抗体阳性115 例、HIV 抗体阴性74 例。ELISA 法检测HIV 的敏感性、特异性、准确率高于胶体金快速法检测,差异有统计学意义(P＜0.05)。说明该方法能够两种方法对于HIV 抗体均具有较高检测准确性,临床应用价值均较高；但其中ELISA 法的阳性准确性更高,因此在实际检验中更推荐以ELISA 法进行检测,与刘丹丹等［10］的研究结果具有一致性,值得临床推广应用。

综上所述,在抗HIV 临床检测过程中,胶体金快速法与ELISA 法均能够达到较高检测准确性,两种方法检验特异度与灵敏度均较高,均能够为临床治疗提供相应指导；但ELISA 法阳性准确性更高,更推荐临床应用。