乳腺癌组织SOX11蛋白表达变化及其临床意义

张晶，李慧，杨香山，张晓莹，门康，徐保群

1 山东省立第三医院，济南250031；2 中国人民解放军联勤保障部队第970医院

近年来，乳腺癌的发病率不断上升，并呈年轻化趋势，已成为威胁女性健康的主要恶性肿瘤之一[1]。乳腺癌是一种具有高度异质性的恶性肿瘤，即使术后规律接受化疗、放疗或内分泌治疗，仍有部分患者无法获得满意疗效[2]，这表明传统治疗方法存在一些无法避免的局限性。目前，临床上正积极探索一种新的治疗模式，即精准个体化靶向治疗。但除了人表皮生长因子受体2(HER2)和乳腺癌易感基因外，尚无更多达成共识的治疗靶点。因此，深入研究乳腺癌更多有效的精准个体化治疗所需驱动基因或作用靶点具有重要意义。SOX基因家族是一类由SRY相关基因构成的基因家族，其编码的SOX蛋白是一类重要的转录调控因子，在胚胎发育过程中发挥重要作用。Grimm等[3]认为，SOX蛋白在介导或促进肿瘤转化和肿瘤进展过程中具有重要作用。SOX11蛋白作为SOX蛋白中的一员，近年来其在肿瘤发生、发展中的作用开始受到关注[4]。但目前国内外鲜见SOX11蛋白与乳腺癌发生、发展关系的报道。为此，本研究观察了乳腺癌组织SOX11蛋白表达变化，并分析其表达与患者临床病理特征的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2014年1月～2017年12月山东省立第三医院收治的乳腺癌患者145例。所有患者经术后组织病理检查明确诊断。纳入标准：①符合乳腺癌诊断，病理类型为浸润性乳腺癌；②初诊，女性；③接受乳腺癌根治术、乳腺癌改良根治术或保乳手术+淋巴结清扫术治疗；④术前未接受任何抗肿瘤治疗；⑤临床病理资料完整。排除标准：①非浸润性乳腺癌、浸润性乳腺癌复发或远处转移者；②合并心、肝、肾等重要脏器严重功能不全或其他部位恶性肿瘤者；③有乳腺癌家族史者；④临床病理资料不完整者。患者年龄28～92岁、中位年龄52岁，其中≤45岁41例、>45岁104例；肿瘤直径：≤2 cm 39例、>2 cm 106例；组织学分级[5]：Ⅰ、Ⅱ级100例，Ⅲ级45例；有淋巴结转移73例，无淋巴结转移72例；激素受体表达[6]：雌激素受体(ER)阳性107例、阴性38例，孕激素受体(PR)阳性87例、阴性58例；HER2表达[7]：0～2+ 133例，3+ 12例；临床病理分型[8]：Luminal型110例，三阴型15例，HER2阳性型20例。本研究经山东省立第三医院医学伦理委员会批准，患者或其家属知情同意。

1.2 SOX11蛋白表达检测 采用免疫组化PV-9000两步法。取手术切除的乳腺癌组织及其配对的周围正常乳腺组织(距肿瘤组织边缘≥5 cm，且经组织病理检查证实为正常乳腺组织)，在离体30 min内经4%中性甲醛固定，石蜡包埋，3～4 μm厚连续切片。切片经60 ℃烤片30 min，4 ℃冰箱保存。染色前经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，高压修复抗原，自然冷却至室温，3% H2O2室温孵育以灭活内源性过氧化物酶；PBS冲洗3 min×3次，滴加SOX11蛋白一抗，4 ℃孵育过夜；PBS冲洗3 min×3次，滴加反应增强液，37 ℃孵育20 min；PBS冲洗3 min×3次，滴加增强酶标山羊抗小鼠IgG聚合物，37 ℃孵育20 min；PBS冲洗3 min×3次，DAB显色5～8 min，自来水充分冲洗，苏木精复染，盐酸乙醇分化、氨水返蓝、梯度乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。用蒸馏水代替一抗作为阴性对照，用已知阳性切片作为阳性对照。

采用双盲法由2位病理科主治医师独立阅片。SOX11蛋白阳性染色定位于细胞核，呈浅黄色至棕褐色。每张切片随机选取10个100倍视野，评估染色强度，计算阳性细胞比例。染色强度评分标准：未着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞比例评分标准：无阳性细胞为0分，≤10%为1分，>10%～50%为2分，>50%～80%为3分，>80%为4分。以染色强度评分和阳性细胞比例评分综合评定阳性表达，二者评分乘积≥1为SOX11蛋白阳性表达。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验或Fisher精确概率检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌组织与周围正常乳腺组织SOX11蛋白表达比较 乳腺癌组织SOX11蛋白阳性表达45例(31.03%)，周围正常乳腺组织未见SOX11蛋白阳性表达。乳腺癌组织SOX11蛋白阳性表达率高于周围正常乳腺组织(P<0.05)。

2.2 乳腺癌组织SOX11蛋白表达与患者临床病理特征的关系 见表1。

3 讨论

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，据统计，2018年全球新发乳腺癌约210万例，死亡约63万例[1]。我国乳腺癌的发病率已步入快速增长期，每年以3%～4%速度持续上升[9]，已成为威胁女性健康的重要疾病之一。近年随着生物技术和基因技术的发展，乳腺癌的治疗模式已从过去的手术治疗+术后放化疗发展到精准个体化治疗，即根据不同患者肿瘤的生物学特点制定最佳的综合治疗方案，如适用于激素受体阳性患者的内分泌治疗、适用于HER2扩增患者的靶向治疗等，明显提高了乳腺癌患者的生存率。我国的一项超大样本量研究显示，乳腺癌5年生存率已从2003年的71.2%提高到2015年的83.2%[10]。但乳腺癌的高度异质性和耐药性仍是目前无法攻克的难题。随着二代测序技术和基因组学的快速发展，探索乳腺癌发生、发展过程中的驱动基因和关键分子，成为当前乳腺癌临床研究新的方向。

表1 乳腺癌组织SOX11蛋白表达与患者临床病理特征的关系

SOX基因家族是一类由SRY相关基因构成的基因家族，可编码二十多种转录因子，能够参与调控细胞分化、器官发生等过程。在生理状态下，SOX基因表达和沉默受到严格调控，但其在恶性肿瘤中经常出现表达上调或下调[11，12]。已有研究证实，在乳腺肿瘤中SOX基因和蛋白异常表达[13]。SOX11基因是SOX基因家族成员之一，定位于人染色体2p25.3，属于SOX C亚族，是一个与胚胎发育及细胞增殖、分化、凋亡相关的转录因子。近年来，SOX11基因在乳腺癌中的作用开始受到关注。Shepherd等[4]通过比较多种转录因子在基底样乳腺癌(BLBC)与非基底样乳腺癌细胞中的表达，在BLBC细胞中筛选出33种表达上调的转录因子，然后通过其对BLBC细胞生长的重要性进行二级筛选，发现有8种转录因子对3种BLBC细胞中至少2种的增殖是必需的，而SOX11蛋白对BLBC细胞的影响最大，抑制SOX11表达会抑制全部3种BLBC细胞的增殖。因此，SOX11蛋白有可能是BLBC亚型细胞增殖、侵袭和迁移的关键调节因子，并且SOX11蛋白高表达还是乳腺癌患者低存活率的独立预测指标。Oliemuller等[14]研究发现，上调乳腺导管内原位癌(DCIS)细胞SOX11蛋白表达，可导致其体外侵袭能力增强、体内浸润性病变较早形成，提示SOX11蛋白能够促进DCIS进展为乳腺浸润性癌。Zvelebil等[15]通过RNA干扰技术沉默乳腺癌细胞中SOX11基因表达，可导致裂解的Caspase-3增多，提示SOX11基因敲除后细胞凋亡速度加快。Ding等[16]研究显示，SOX C亚族蛋白在三阴型乳腺癌中异常过表达，其异常过表达与患者较差的生存率有关，特别是SOX11蛋白表达增加被认为是BLBC细胞增殖和迁移必需的转录因子，而在乳腺癌其他亚型中并未发现此特征。但Liu等[17]研究认为，SOX11蛋白在正常乳腺组织中不表达，在乳腺癌组织中高表达，并且乳腺癌组织SOX11蛋白高表达者肿瘤体积较小、临床分期较早、生存时间更长，故认为SOX11蛋白高表达能够抑制乳腺癌的发生、发展。

本研究结果发现，乳腺癌组织SOX11蛋白阳性表达率高于周围正常乳腺组织，与Liu等[17]研究结果一致，提示SOX11蛋白在乳腺癌的发生、发展过程中发挥重要作用。Liu等[17]研究还发现，SOX11蛋白高表达可抑制乳腺癌进展，其高表达与患者预后良好有关。由于时间所限，本研究未能对这些患者进行长期随访，SOX11蛋白表达与患者预后的关系还有待于进一步研究验证。前期通过查询TCGA数据库发现，SOX11蛋白在三阴型乳腺癌和HER2阳性型乳腺癌中表达明显高于Luminal型乳腺癌。由于三阴型乳腺癌和HER2阳性型乳腺癌的临床病理特征相近，本研究这两种类型乳腺癌病例数较少，故合并统计分析，结果发现，三阴型乳腺癌和HER2阳性型乳腺癌SOX11蛋白阳性表达明显高于Luminal型乳腺癌。本研究还发现，ER、PR阴性者SOX11蛋白阳性表达明显高于ER、PR阳性者，HER2表达3+者SOX11蛋白阳性表达明显高于HER2表达0～2+者，这与临床病理分型的统计结果是一致的。由此推测，SOX11蛋白有可能是三阴型乳腺癌和HER2阳性型乳腺癌的关键调节因子和潜在治疗靶点。由于本研究中HER2阳性型乳腺癌是基于蛋白水平的HER2阳性表达，其真实的基因扩增状态还需要原位杂交技术进一步验证，从而更精确分组。此外，本研究纳入的三阴型乳腺癌和HER2阳性型乳腺癌病例数较少，今后需要增加样本量并进行长期随访和体外实验，从而进一步探索SOX11蛋白在乳腺癌发生、发展中的作用。

综上所述，乳腺癌组织SOX11蛋白过表达；SOX11蛋白过表达可能参与三阴型乳腺癌和HER2阳性型乳腺癌的发生、发展。