复方甘草酸苷对慢性乙型肝炎患者IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2表达的影响*

袁 媛，陈 洁，邓 兰，杨雪梅

成都医学院第一附属医院，四川成都 610500

乙型肝炎病毒(HBV)感染严重威胁着人类健康，HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌给患者及社会造成了严重的经济负担。机体感染HBV后，HBV在肝细胞内进行复制，引起一系列复杂的免疫反应，导致肝细胞的损伤。研究表明，慢性乙型肝炎患者体内会出现辅助性T细胞17(Th17细胞)活化，Th17细胞的激活加剧了肝脏局部和全身的炎性反应[1]。复方甘草酸苷具有抗炎、抗纤维化及免疫调节的作用，但其具体的机制尚不明确。本研究通过检测慢性乙型肝炎患者白细胞介素(IL)-17、IL-6、转化生长因子(TGF)-β、基质金属蛋白酶(MMP)-2表达水平，分析以上指标与疾病严重程度的关系，以及复方甘草酸苷治疗前后对患者肝功能及细胞因子表达水平的影响，探讨复方甘草酸苷的抗炎机制，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2017年1月至2018年12月于本院感染科住院治疗的慢性乙型肝炎患者55例，依据疾病严重程度分为轻度组患者18例，中度组患者18例，重度组患者19例。轻度组患者中男11例、女7例，平均年龄(42.22±13.05)岁；中度组患者中男8例、女10例，平均年龄(45.44±14.93)岁；重度组患者中男12例、女7例，平均年龄(41.32±12.32)岁。所有患者均符合2015年中华医学会肝病学分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》中的诊断标准[2]；排除合并其他肝炎、自身免疫性疾病、人类免疫缺陷病毒(HIV)感染、肿瘤、慢性肾脏病及其他严重全身性疾病患者。另选取同期本院体检部20例健康体检者作为健康对照组。轻度组、中度组、重度组和健康对照组的性别、年龄等比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。将55例慢性乙型肝炎患者分为治疗组29例与对照组26例。治疗组中男18例、女11例，平均年龄(40.21±13.23)岁；对照组中男13例、女13例，平均年龄(46.04±12.99)岁。治疗组和对照组的性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究通过本院伦理委员会审批，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2仪器与试剂 IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2检测的ELISA试剂盒购于上海生工科技公司，酶标仪由ABI公司生产。

1.3方法 (1)检测方法：采集所有患者及健康对照者两管外周血，置于肝素锂抗凝管中(用于ELISA检测)，反复颠倒摇晃5～6次。30 min内将肝素锂抗凝管中的全血于4 ℃ 以2 000 r/min离心10 min，取淡黄色上清液于-20 ℃保存。测定IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2的操作步骤按照说明书进行。采集两组患者治疗前后空腹静脉血各5 mL，检测生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)水平。(2)治疗方法：对照组使用恩替卡韦抗病毒治疗及进行一般性保肝治疗，治疗组在对照组的基础上加用复方甘草酸苷80 mg(西安利君制药有限责任公司)，将该药加入5%葡萄糖注射液250 mL中静脉滴注，持续1～2 h，每日1次。两组患者的疗程均为2～4周。

2 结 果

2.1各组IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2水平比较 慢性乙型肝炎患者IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2水平高于健康对照者，差异均有统计学意义(P<0.05)，且随着慢性乙型肝炎病情严重程度的加重，外周血IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2水平逐渐升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2水平比较

2.2慢性乙型肝炎患者IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2水平与ALT、TBIL、疾病严重程度的相关性 IL-17、IL-6水平与慢性乙型肝炎严重程度呈正相关，与ALT、TBIL均呈正相关(P<0.05)。TGF-β、MMP-2水平与慢性乙型肝炎严重程度呈正相关(P<0.05)，与TBIL呈正相关(P<0.05)，与ALT无相关性(P>0.05)。见表2。

2.3治疗组与对照组治疗前后ALT、TBIL水平比较 治疗组和对照组患者治疗前ALT、TBIL水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗2周后，两组患者肝功能都明显好转，治疗组ALT、TBIL降低程度大于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.4治疗组和对照组治疗前后IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2水平比较 治疗组与对照组治疗后IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2水平较治疗前降低，差异均有统计学意义(P<0.05)，治疗组IL-17、IL-6、TGF-β降低程度大于对照组，差异有统计学意义(P<0.05),两组MMP-2降低程度差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表2 IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2水平与ALT、TBIL及疾病严重程度的相关性

表3 治疗组与对照组治疗前后ALT、TBIL水平比较

表4 治疗组与对照组治疗前后IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2水平比较

组别nTGF-β(ng/mL)治疗前治疗后tPMMP-2(ng/mL)治疗前治疗后tP治疗组2933.82±2.8324.66±1.8421.99<0.00136.56±10.4723.62±8.2026.97<0.001对照组2633.31±3.6327.07±2.5117.21<0.00135.50±10.3323.91±7.0014.38<0.001t0.5714.0960.3800.137P0.571<0.0010.7060.892

3 讨 论

慢性乙型肝炎是一种由HBV感染机体后所引起的肝脏疾病，HBV本身不引起肝脏病变，而是通过细胞免疫介导的肝损害导致各种急慢性肝炎。Th17细胞不同于Th1、Th2细胞及调节性T细胞的CD4+T细胞亚群，它参与了病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝炎和肝细胞癌等不同类型肝病的发病[3]。Th17细胞通过分泌IL-17诱导炎症因子(如IL-6)、趋化因子和金属蛋白酶(MMPs)的表达，介导中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等炎症细胞的浸润。这些细胞因子一方面参与宿主的抗感染免疫，另一方面可导致肝组织炎症。而肝组织炎性反应又可使肝间质细胞大量地表达TGF-β，它与IL-6共同作用可使初始的CD4+T细胞向产生IL-17的Th17细胞分化，进一步导致肝损伤[4-5]。

IL-17主要由活化的Th17细胞分泌，与炎症发展、免疫应答、免疫排斥等多种生物学活性有关。有研究表明，Th17细胞介导的炎症与慢性乙型肝炎向肝硬化和肝衰竭进展有关，检测外周血Th17细胞比例和血清IL-17水平有助于预测肝损伤和肝纤维化的严重程度[6]。慢性乙型肝炎患者外周血IL-17水平随疾病严重程度加重而升高，在肝硬化的进展过程中具有促进作用[7]。IL-6为体内重要的致炎症细胞因子，可以调节许多急性期反应蛋白的合成，在炎症、肿瘤、自身免疫性疾病、免疫治疗方面都起着重要的作用。病毒性肝炎的相关研究表明，HBV感染患者IL-6水平升高，其水平与疾病严重程度相关，可以作为评价疾病严重程度和治疗效果的指标[8]。王鹏等[9]的研究显示，慢性乙型肝炎患者IL-6的表达水平明显高于健康对照者，与ALT呈正相关。TGF-β具有多种生物功能，参与调控细胞外基质(EMC)的产生、降解、沉积过程，参与肝组织的再生与修复，促进肝脏成纤维细胞的转化生长，是介导肝细胞损伤及肝组织纤维化发生、发展的重要细胞因子。慢性乙型肝炎患者存在肝实质细胞持续受损，TGF-β的表达被启动且表达增加，故慢性乙型肝炎患者的TGF-β水平高于HBV携带者及健康人群[10-11]。MMPs是ECM蛋白的主要降解酶，MMP-2可降解肝窦周基底膜中的Ⅳ型胶原支架，基底膜的破坏改变了Disse间隙中肝星状细胞生存的微环境,又促进了肝星状细胞的激活，参与了肝纤维化的进展，故常作为肝硬化检测的指标。仅有少量的研究评估了慢性乙型肝炎患者MMP-2水平与肝脏炎症的关系。国外有研究表明，与健康对照者相比，慢性乙型肝炎患者的MMP-2水平更高，并且与肝纤维化，特别是肝硬化有关，MMP-2水平与ALT、AST呈正相关[12]。本研究显示，慢性乙型肝炎患者IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2水平均较健康对照者升高，且水平随着疾病严重程度的增加呈逐渐升高的趋势。因此笔者推测，IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2是HBV感染性疾病进展的危险因素，其水平的升高可能加重肝细胞的损伤和促进肝纤维化的发生和发展，导致慢性乙型肝炎的进展。

复方甘草酸苷除具有抗氧化、抗炎、稳定肝细胞膜等作用，还具有免疫调节、预防纤维化和类固醇作用。其通过选择性抑制花生四烯酸级联反应中的代谢酶磷脂酶A2，使得氧酶的活性增加，减少前列腺素、白三烯等炎症介质的生成而发挥作用[13-14]。复方甘草酸苷是临床常用的抗炎保肝药物，能减轻肝组织损伤，使慢性乙型肝炎患者ALT、AST、TBIL水平显著降低，透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)等肝纤维化指标改善，IL-6水平较治疗前降低[15]。自身免疫性肝炎患者使用复方甘草酸苷治疗后可使Th17细胞比例下降，推测复方甘草酸苷可能通过抑制Th17细胞的增殖，调节机体免疫而发挥作用[16]。本研究发现，治疗组加用复方甘草酸苷治疗后ALT及TBIL较对照组降低得更多，肝功能明显改善；两组治疗后IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2的表达水平均较治疗前降低，且治疗组降低程度大于对照组，除MMP-2外，差异均有统计学意义(P<0.05)。前面的数据显示，IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2参与了慢性活动性乙型肝炎的发生、发展，由此笔者推测复方甘草酸苷治疗慢性乙型肝炎可能是通过降低患者外周血IL-17、IL-6、TGF-β的表达，从而调节机体的免疫功能，发挥抗炎、保肝的作用。而本研究中治疗组与对照组在MMP-2的降低程度上差异无统计学意义(P>0.05)。分析原因：一方面可能是本研究中样本量较少；另一方面，MMP-2主要参与细胞外基质的产生与降解，参与肝纤维化的形成，可能需要更长的治疗时间才能显示出差异，而本研究只是检测了治疗2周后的结果。故需要进一步进行更大样本量、更长时间随访的研究以验证结果。

综上所述，慢性乙型肝炎患者IL-17、IL-6、TGF-β、MMP-2的表达升高，与慢性乙型肝炎的严重程度有关。慢性乙型肝炎的发生、发展与这些细胞因子参与机体免疫紊乱有关。复方甘草酸苷可以改善慢性乙型肝炎患者的肝功能，其机制可能与影响IL-17、IL-6、TGF-β等细胞因子的表达而发挥调节机体免疫、抗炎、保肝作用。