糖尿病合并肺结核患者血miR-144的表达水平及意义

陈再旺 谢瑞玉

糖尿病、肺结核为2种常见慢性疾病，2型糖尿病合并肺结核发生率不断上升[1]，糖尿病感染肺结核相比非糖尿病人群风险大。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)分布在基因组非编码区，属于单链小分子RNA，参与细胞生长、分化等生理过程。miRNA可作为相关疾病诊断标志物[2-4]，miR-144被发现在结核病人群中高表达[5]；同时，血清miR-144表达是2型糖尿病独立预测因子[6]。本研究旨在观察糖尿病合并肺结核患者miR-144表达情况，分析miR-144在糖尿病合并肺结核患者诊治中的临床意义，为临床提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本市二甲及以上医院2018年1月至2019年5月收治的肺结核患者75例，其中男性44例，女性31例；年龄45～82岁，平均(60.35±11.08)岁。纳入标准：①经体格检查、胸部X线片、结核分枝杆菌培养等确诊为肺结核；②均为初治患者；③入组前未行抗结核干预。排除标准：①合并免疫性疾病；②肝肾功能严重障碍；③恶性肿瘤；④近3个月有激素、免疫相关药物使用史；⑤有糖尿病并发症；⑥非结核分枝杆菌肺病；⑦精神异常、癫痫。剔除中途退出者。其中糖尿病合并肺结核32例(糖尿病组)，既往有糖尿病史，糖尿病诊断依据中国2型糖尿病防治指南(2013年版)[7]；单纯肺结核43例(肺结核组)；选择同期年龄、性别与肺结核患者相匹配的健康体检人员30例为对照组。见表1。

表1 3组研究对象一般资料比较

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 全部肺结核患者接受2HRZE/4HR方案干预，其中H为异烟肼，R为利福平，Z为吡嗪酰胺，E为乙胺丁醇，按照药物说明书或医嘱用药。同时患者接受保肝治疗。对于糖尿病合并肺结核患者，抗结核治疗的同时给予胰岛素干预。

1.2.2 血miR-144、血糖指标检测 肺结核患者治疗前1天、治疗1个月后次日清晨空腹采集患者外周血2 mL，对照组人员于体检当日清晨空腹抽取外周血，肝素抗凝，30 min内将全血放入含有Trizol(美国GIBCO公司)、研磨珠冻存管中，震荡均匀后保存到-70℃冰箱(美国FORMA公司的超低温冰箱)内；通过反转录-荧光定量RCR法(美国ABI公司的ABI7500荧光定量PCR仪)检测血miR-144表达水平，反应体系：预变性95℃ 300 s，变性、延伸95℃ 10 s，60℃、72℃均20 s，共计40个循环。以U6为内参，其上、下游扩增引物序列分别为5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’、5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’，miR-144上、下游扩增引物序列分别为5’-ATCCAGTGCGTGCGTGTCGTG-3’、5’-TGCTTATACAGTATAGATG-3’。通过相对定量法计算血miR-144相对表达量。另外治疗前1天、治疗1个月后通过葡萄糖氧化酶法测定糖尿病组患者外周血空腹血糖(fasting blood glucose，FBG)、餐后2小时血糖(two hours postprandial blood glucose，2 h PBG)水平。

1.3 观察指标 ①记录并比较3组对象外周血FBG、2 h PBG、miR-144相对表达量；②记录糖尿病组、肺结核组肺空洞比例、治疗前后血miR-144表达水平、血糖水平；③根据肺空洞与否分组，观察两组患者治疗前后血miR-144表达情况。

2 结果

2.1 3组研究对象治疗前相关指标比较 糖尿病组肺空洞率高于肺结核组，FBG、2 h PBG、血miR-144表达水平均高于肺结核组与对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 3组研究对象治疗前相关指标比较

注：-表示未统计；FBG为空腹血糖，2 h PBG为餐后2小时血糖；与对照组比较，*P<0.05；与肺结核组比较，#P<0.05

2.2 两组患者治疗前后血miR-144表达、血糖水平 糖尿病组治疗前、治疗1个月后血miR-144表达、FBG、PBG水平均高于肺结核组，差异有统计学意义(P<0.05)；与治疗前比较，糖尿病组治疗1个月后血miR-144表达、FBG、PBG水平均下降，差异有统计学意义(P<0.05)；肺结核组治疗前后FBG、PBG水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；两组治疗前后miR-144差值比较，差异无统计学意义(P>0.05)，而治疗前后FBG、PBG差值比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组患者治疗前后miR-144表达、血糖水平比较

注：与同组治疗前比较，*P<0.05

2.3 有肺空洞组与无肺空洞组治疗前后血miR-144表达水平比较 有肺空洞组治疗前、治疗1个月后血miR-144表达水平均高于无肺空洞组，差异有统计学意义(P<0.05)；与治疗前比较，治疗1个月后血miR-144表达水平均下降，差异有统计学意义(P<0.05)；两组治疗前后miR-144差值比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 有无肺空洞患者血miR-144表达水平比较

注：与同组治疗前比较，*P<0.05

2.4 miR-144表达水平与血糖水平的相关性分析 Pearson分析血miR-144表达水平与FBG、2 h PBG均正相关(r=0.692、0.704，P<0.05)。见图1。

图1糖尿病合并肺结核患者miR-144表达水平与血糖水平的相关性分析

3 讨论

糖尿病糖脂代谢异常会影响机体免疫能力，除了导致机体抵抗能力降低外，还会使机体修复能力变弱[8]，为细菌生长、繁殖创造条件，加上肺部血容量较为丰富，增加了结核菌感染风险；另一方面，肺结核会加重糖脂代谢异常，不利于血糖控制。近年来，临床2型糖尿病合并肺结核发生人数增多，两者相互影响，治疗难度大。

近年来，关于miRNA研究较多，Fu等[9]发现，结核患者血液中检测出miRNA 1 223种，其中miRNA表达上调59种、下调33种，认为miRNA对结核诊断有一定的价值。miR-144调控作用多，对T淋巴细胞产生肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ有一定的抑制作用，阻断T淋巴细胞增殖。目前，关于miR-144在糖尿病或/和肺结核中的表达及机制研究较少。本研究结果显示，血miR-144表达水平上从高到低分别为糖尿病合并肺结核患者、单纯肺结核患者、健康体检人员，存在显著差异。分析原因可能为，miR-144除了能调控胰岛素靶受体外，还能对胰岛素基因的表达产生影响，促使胰岛素受体底物-1抗体表达降低，易产生胰岛素抵抗。有学者[10]发现，miR-144可靶向作用于Atg4a-3’ UTR，抑制其表达，制约细胞自噬能力，这可能是结核分枝杆菌感染的一个机制。

肺空洞形成与结核杆菌感染能力、机体免疫功能有关，结核杆菌毒力强，产生的变态反应也较强，一旦机体免疫功能下降，此时若被结核杆菌感染，则易导致肺组织坏死。本研究结果显示，糖尿病合并肺结核患者相比单纯肺结核出现肺空洞比例大，与郭星荣等[11]研究一致。这可能是因为糖尿病合并肺结核患者机体免疫功能进一步下降，加上糖脂代谢异常，加重病情，增加肺空洞风险[12]。同时，本研究发现，有肺空洞相比无肺空洞患者血miR-144表达水平高，可见有肺空洞患者血miR-144高表达。两组患者治疗后血miR-144表达水平比治疗前显著下降，提示血miR-144可随病情的好转而下降，且与FBG、2 h PBG水平正相关，提示血miR-144表达水平可能与血糖控制有关。此外，糖尿病合并肺结核相比单纯肺结核治疗前、治疗后血miR-144表达水平及其差值均显著高，可见糖尿病可能加重肺结核病情，临床需预防糖尿病或积极降血糖处理。由于目前国内关于血miR-144在肺结核合并糖尿病中的表达及相关研究少，关于其机制还不清楚，需日后进一步研究。

综上，糖尿病合并肺结核患者血miR-144表达水平升高，其表达水平与FBG、2 h PBG水平正相关，血miR-144可反映糖尿病合并肺结核患者疾病转归。