车前草和荆芥在简易库与冷藏库中的贮藏期研究❋

郝美玲，吴 翠，徐 博，徐 靓，李卓俊，巢志茂△

(1.内蒙古自治区药品检验研究院，呼和浩特 010020；2.中国中医科学院中药研究所，北京 100700；3.国家中药材产业技术体系贮藏与包装岗位，北京 100700)

中药材讲究贮藏的历史悠久，早在《神农本草经》便有对中药材进行贮藏养护的记载。从汉代到清朝，医家均重视中药材的贮藏，且历代相承与发展[1]。20世纪70年代开始，有学者对中药材的贮藏进行科学研究，但是对于中药材贮藏的研究远滞后于中医药产业的发展，而贮藏过程影响中药材质量的研究则少见报道[2]。贮藏是中药材质量全过程控制系统的重要环节，贮藏条件是否适宜直接影响中药材的质量和疗效[3]。中药材贮藏不当，易出现霉变、色变、虫蛀、酸败等多种变质现象，随之而来的是化学成分的减少、增多或消失，最终影响药材的质量与临床疗效[4]。

已有学者对中药材贮藏过程中理化性质变化进行研究，随着贮藏时间的延长，牛膝的色泽加深，5-羟甲基糠醛(5-HMF)的含量显著升高，而有效成分β-蜕皮甾酮的含量显著下降并低于药典规定，从而提示牛膝的有效贮藏期为2年[5]；龙眼肉久贮则出现糖分析出、5-HMF含量升高的现象[6]；何首乌、白芷、三七等根类药材的色泽有所加深，但是化学成分含量在33个月的贮藏后仍符合药典的规定[7]。由此可见，观察中药材在贮藏过程中的外观变化，测定其中化学成分含量的动态变化，对于控制中药材的质量，制定合理的中药材贮藏时间具有重要的参考意义和实用价值。

车前草是车前科植物车前PlantagoasiaticaL.或平车前P.depressaWilld.的干燥全草，具有清热利尿通淋、祛痰凉血解毒的功效[8]，以单味药治疗慢性乙型肝炎取得了很好的疗效[9]，配伍其他利水渗湿药，可以治疗慢性肾炎[10]。荆芥为唇形科植物荆芥SchizonepetatenuifoliaBriq.的干燥地上部分，具有解表散风、透疹消疮的功效[11]。对于慢性支气管炎[12]、慢性肥厚性咽炎[13]具有显著疗效。

车前草和荆芥都是全草类中药材，将其贮藏于简易库和冷藏库，定期观察色泽等外观性状，测定其中指标性成分的含量，分析理化性质随贮藏时间延长的动态变化，为二者贮藏条件的改善，为贮藏期的制定提供实验与科学依据，并为全草类中药材的贮藏技术研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 试剂

胡薄荷酮(批号111706-201205，纯度99.8%)、大车前苷(批号111914-201102，纯度90.2%)均购自中国食品药品检定研究院。水为娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)，乙和甲醇为色谱纯(Thermo Fisher Scientific公司)。

1.2 主要仪器

Waters E 2695 超高效液相色谱仪(配备2998二极管阵列检测器)(美国Waters公司)；XS105 Dual Range型电子分析天平(感量0.01 mg，Mettler Toledo仪器系统有限公司)；Ohaus CP224C型电子天平(感量0.1 mg)(奥豪斯(上海)仪器有限公司)；单道可调量程移液器(艾本德(上海)国际贸易有限公司)；KH7200E型超声波清洗器(250 W，50 kHz，昆山禾创超声仪器有限公司)；SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)；DHG-9063 A电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；DFD-700型号水浴锅(河南省泰斯特仪器有限公司)；比泽尔5P系统压缩机(比泽尔制冷技术(中国)有限公司)；高翔DL60冷风机(浙江高翔工贸有限公司)。

1.3 贮藏库的建立

根据实验需要分别建立了简易和冷藏仓库，简易库为中国中医科学院中药研究所1016实验室隔开的小仓库，未调节温湿度。冷藏库则有冷风机控制系统，采用密封保存控制药材包装中的湿度，为恒温恒湿库。每天上午10点记录温湿度，以每月温度、湿度的最高值、平均值、最低值绘制成图(结果见图1)。

这个我往日可冇想到。一下作了难，不晓得说么事好。喑了好半天，我决绝地说：“不会讲中国话也不怕，就是个哑巴也认娘的！”

图1 简易库和冷藏库的温度、湿度变化比较

1.4 药材

车前草、荆芥购于河北省安国药材市场，经中国中医科学院中药研究所巢志茂研究员鉴定车前草为平车前PlantagodepressaWilld.的干燥全草，荆芥为唇形科植物荆芥SchizonepetatenuifoliaBriq.的干燥地上部分，系当年收获的药材切制品。

预留出适量车前草和荆芥作为0月的样品，随后将二者分装于透气的编织袋中，直接放置于简易库中；另在透气的编织袋外套上密闭的13丝聚乙烯(PE)树脂袋，放置于冷藏库中贮藏。从贮藏日起第3、9、15、21、27个月时，从库中分期分批地取出一些样品，立即进行测定。

1.5 性状观察

1.5.1 色泽观察 将从简易库和冷藏库中取出的适量样品，平铺于白色A4纸上，在日光下观察样品的色泽并记录结果(见表1和表2)。

1.5.2 其他外观 取出样品时，观察是否出现质地黏连、虫蛀、霉变、酸败等外观现象。

1.6 水分测定

1.6.1 烘干法 表1示，取车前草样品适量，粉碎，过二号筛，按2015版《中国药典》通则0832水分测定项下规定的第二法即烘干法[14]进行测定。

1.6.2 甲苯法 表2示，取薄荷样品适量，粉碎过二号筛，按2015版《中国药典》通则0832水分测定项下规定的第四法即甲苯法[15]进行测定。

1.7 车前草中大车前苷的含量测定

按2015版《中国药典》车前草项下大车前苷的含量测定方法[8]进行。

1.7.1 色谱条件 Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-0.1%甲酸溶液(17:83)为流动相，检测波长为330 nm，流速为1.0 mL·min-1，柱温为35 ℃，进样量为10 μL。

1.7.2 对照品溶液的制备 精密称定大车前苷对照品10.62 mg，置于10 mL棕色量瓶中，加60%甲醇溶解并加到刻度线，制得浓度为1.062 mg·mL-1的对照品溶液，将此溶液稀释10倍，得浓度为0.1062 mg·mL-1的对照品溶液，备用。

1.7.3 供试品溶液的制备 取样品粉碎，过二号筛取粉末1 g，精密称定置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇50 mL，称定质量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，取出放冷再次称定重量，用60%甲醇补足减失的质量，摇匀、滤过，取续滤液，过0.22 μm的微孔滤膜即得(对照品与供试品的HPLC色谱图见图2)。

注：A.对照品；B.供试品；1.大车前苷图2 对照品和车前草供试品HPLC图

1.7.4 含量测定 表1示，按“1.7.3”项下方法制备供试品溶液，按“1.7.1”项下色谱条件测定，采用外标一点法计算干品中含量。

表1 简易库与冷藏库贮藏车前草理化指标比较

1.8 荆芥中挥发油的含量测定

按照2015版《中国药典》通则2204挥发油测定法[14]项下规定进行测定。

1.8.1 方法 取样品粉碎，过二号筛取粉末100 g，置于500 mL平底烧瓶中，加蒸馏水300 mL，再加入玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸约5 h，至测定器中油量不再增加停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5 mm处为止。放置1.5 h，开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量。

1.8.2 结果 表2示，计算供试品中挥发油的含量(mL·100 g-1)。

1.9 荆芥中胡薄荷酮的含量测定

按2015版《中国药典》荆芥项下胡薄荷酮的含量测定方法[11]进行。

1.9.1 色谱条件 Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-水(80:20)为流动相，检测波长为252 nm，流速为1.0 mL·min-1，柱温35 ℃，进样量为10 μL。

1.9.2 对照品溶液的制备 精密称定胡薄荷酮9.56 mg，置于1000 mL棕色量瓶中，加适量甲醇溶解，并加至刻度线，制得浓度为9.560 μg·mL-1的对照品溶液。

1.9.3 供试品溶液的制备 取样品适量，粉碎过二号筛取粉末约0.5 g，精密称定置具塞锥形瓶中，加甲醇10 mL，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)20 min，滤过，滤渣和滤纸再加甲醇10 mL，同法超声处理1次，滤过加甲醇适量洗涤2次，合并滤液和洗液转移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度摇匀即得(对照品和供试品的HPLC色谱图见图3)。

注：A.对照品；B.供试品；1.胡薄荷酮图3 对照品和荆芥供试品HPLC图

1.9.4 含量测定 表2示，按“1.9.3”项下方法制备供试品溶液，按“1.9.1”项下色谱条件测定，采用外标一点法计算干品中含量。

表2 简易库与冷藏库贮藏荆芥理化指标比较

2 结果

2.1 贮藏库的温湿度

图1示，冷藏库保持3.5～5.0 ℃的恒温，65%～75%相对湿度的恒湿环境。简易库在27个月中，经历了3个夏天、2个冬天的过程。温度值最低为15 ℃，最高为42 ℃；湿度值最高为74%RH，最低为30%RH。

2.2 性状与水分

表1示，对于车前草，不论在简易库还是冷藏库，整个贮藏过程中色泽始终为灰绿色，没有观察到明显的变化。简易库中的车前草在21个月时开始出现轻度易碎现象，而冷藏库中未出现易碎现象。在27个月的贮藏过程中，除易碎情况发生外，未见其他任何的外观改变。水分含量出现了一定的波动，冷藏库中药材的水分含量比同期简易库中药材的水分要高。冷藏库到第27个月时，水分含量达到13.17%，超出药典“不得高于13.0%”的规定，而在简易库或其他时间段的冷藏库中，贮藏都处于正常范围，提示车前草在冷藏库的贮藏时间不宜过长。

表2示，对于荆芥在两库中色泽始终为淡黄绿色，在贮藏过程中也未见明显变化。在27个月的贮藏过程中，未见任何外观性状的改变。冷藏库贮藏后水分含量也比贮藏于简易库的含量要高，均符合药典“不得高于12.0%”规定，但在第27个月时的水分含量较之前出现了较大升高现象。

2.3 有效成分的含量

表1示，对于车前草来说，无论是简易库还是冷藏库，贮藏后大车前苷的含量，从0月起始的0.091%，到9月份最低的0.076%和15月份最高的0.096%，基本维持在一定的含量区间范围内，整体保持稳定。

表2示，对于荆芥挥发油的含量来说，经简易库和冷藏库贮藏后均能维持在0.3%以上，未见随贮藏时间的延长出现明显的变化，更未出现挥发性成分挥散的现象。对于荆芥中胡薄荷酮的含量来说，在冷藏库中的含量介于0.065%至0.076%的范围内，始终高于中国药典“不得低于0.02%”的规定。同样在简易库贮藏27个月，也能保持在这样的规定值范围内。不过第27个月时的含量，从0月原始的0.066%下降至0.026%，且比第21个月份时的含量也下降明显。

3 讨论

在贮藏环节，影响中药材质量的因素主要是温度和湿度[16]。通过严格控制温湿度的冷藏库和不控制温湿度的简易库比较，对于车前草和荆芥均未见明显的区别，所以对于没有特别要求的全草类药材来说，贮藏于简易库中的成本更低。

对于车前草来说，冷藏库中贮藏27个月时水分含量出现超标现象，在简易库贮藏21个月起出现轻度的易碎现象，说明车前草无论是置于冷藏库还是简易库，都不适合较长的时间，建议贮藏期不超过2年。

对于荆芥来说，冷藏库中贮藏27个月时水分含量也出现一定程度的升高现象，在简易库贮藏27个月时出现胡薄荷酮含量明显下降的现象，说明对于荆芥无论是置于冷藏库还是简易库，也不适合较长的时间，同样建议贮藏期不超过2年。

从有效成分含量角度讲，大车前苷是车前草的有效成分之一，具有抗炎[17]、抑制食管鳞状细胞癌的作用[18]。胡薄荷酮是荆芥发挥抗炎[19]、抗组胺作用[20]的物质基础，挥发油则是评价荆芥质量优劣的重要指标。在整个27个月的贮藏过程中，不论是简易库还是冷藏库，这些有效成分的含量均未见明显的下降，保持基本的稳定。

对于药材在冷藏库中水分含量上升的现象，是因为冷藏库的湿度大，长期维持在70%RH左右的湿度中，这就需要强调包装材料的重要性，需要提高包装袋的密闭性。简易库中的包装材料是透气的编织袋，由于湿度或高或低，整体湿度较低，最为干燥的时候达到30%RH，这种较长时间的低湿度环境，应该是造成车前草在第21个月后出现轻度易碎现象的主要原因。所以在简易库中贮藏时，如果准备贮藏足够长的时间，也应该采用密闭性较好的包装材料。