长链非编码RNA-CECR7在胃癌中的表达水平及与临床病理特征和预后的关系

赵文辉

胃癌起源于胃黏膜上皮恶性肿瘤，在我国恶性肿瘤发病中居首位[1]。胃癌的发病有明显的地域、性别差异，饮食结构不合理、工作压力增大、幽门螺杆菌感染等使胃癌呈年轻化。胃癌的预后与胃癌的部位、大小、组织类型、病理分期有关；早期胃癌无明显病理症状，极易被忽视；且目前尚无法精准预测胃癌发病，因此寻找与胃癌发生、发展及预后相关的特异性强的生物标志物已成为临床研究的重点[2]。长链非编码RNA(LncRNA)在胃癌组织中异常表达可影响癌症的发生发展等过程，但LncRNA在胃癌中的作用机制尚不明确[3]。长链非编码RNA猫眼综合征临界区基因7(long non-coding RNA cat eye syndrome critical region gene 7，LncRNA CECR7)已被证明在食管癌中高表达[4]，而食管癌和胃癌都属于消化道肿瘤，早期症状都不明显、确诊率低[5]，具有类似之处。本研究通过研究LncRNA CECR7在胃癌组织中的表达情况，探讨其与胃癌病理特征及患者生存结局的关系，以期为胃癌的临床治疗和预后评价提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2014年7月至2015年12月在我院经病理确诊的胃癌患者胃癌组织89例，对应癌旁组织89例。患者均符合《胃癌诊断标准》中的胃癌诊断标准[6]。根据国际抗癌联盟胃癌肿瘤原发灶淋巴结转移(tumor node metastasis，TNM)分期系统第7版[7]分析临床病理特征。TNM分期按Ⅰ期(肿瘤侵犯固有层、黏膜肌层或黏膜下层 )、Ⅱ期(侵犯浆膜下层)、Ⅲ期(侵犯浆膜)、Ⅳ期(侵犯邻近结构)分期，N分期按N0期(0 枚淋巴结转移)、N1期(1～6枚淋巴结转移)、N2期(7～15枚淋巴结转移)、N3期(>15枚淋巴结转移)分期，M分期按M0期(远处转移不存在)、M1期(远处转移存在)分期。

1.2 纳入标准 (1)均初次确诊为胃癌患者；(2)患者无化疗治疗；(3)患者无其他胃部相关疾病；(4)患者均知情并自愿签署同意书。

1.3 排除标准 (1)其他组织合并癌变患者；(2)经过免疫治疗者；(3)临床资料不完整者。

1.4 方法 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)法检测组织中LncRNA CECR7的表达水平。RNA提取试剂盒(购自北京索莱宝科技有限公司)提取细胞总RNA，cDNA试剂盒(购自北京智杰方远)将其逆转录成第一链cDNA。引物序列(生工生物工程有限公司合成)为：LncRNA CECR7-F:5’-TCAGTGACAGCCCCATGTAA-3’、LncRNA UCA1-R:5’-CAGCAGGA AGAGGTGCTAGAG-3’，内参序列GADPH-F:5’-GAAGGTGAAGGTCGGA-3’、GADPH-R:5’-GAAGATGGTGATGGGAT-3’。qRT-PCR仪(购自赛默飞世尔科技有限公司)扩增LncRNA UCA1、GADPH序列，反应体系为：2×Mix 10 μl，40 ng/μl总蛋白1 μl，上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μl，ddH2O 8 μl。qRT-PCR反应条件为95℃、30 s；95℃、15 s，62℃、15 s，共40个循环。2-ΔΔCt法计算相对表达水平。

1.5 随访 所有治疗出院后的患者进行复查或电话随访，随访时间为出院后36个月，末次随访时间截止2018年12月31日，死亡患者以死亡时间作为随访截止期。观察患者随访期间肿瘤复发情况、生存情况。

2 结果

2.1 LncRNA CECR7在胃癌组织及癌旁组织中的表达 胃癌组织中LncRNA CECR7表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。见表1。

组别LncRNA CECR7/GADPH癌旁组织1.00±0.04胃癌组织5.12±1.16t值33.487P值0.000

2.2 胃癌组织中LncRNA CECR7与临床病理特征的关系 胃癌患者中LncRNA CECR7表达水平与TNM分期、肿瘤直径、脉管浸润呈相关性(P<0.05)，与患者年龄、性别、淋巴结转移(Node，N)分期、远处转移(Metastasis，M)分期、Lauren分型、肿瘤分化病理类型无明显相关性(P>0.05)。见表2。

2.3 胃癌组织中LncRNA CECR7与胃癌患者预后的关系 胃癌组织中LncRNA CECR7低表达患者术后良好比例高于高表达组(P<0.05)，低表达患者术后肿瘤复发率(无死亡)、死亡率均低于高表达组(P<0.05)。见表3。

2.4 影响胃癌患者不良预后的COX回归分析 单因素分析显示，LncRNA CECR7表达、TNM分期、N分期、M分期、肿瘤分化程度、有无脉管浸润均是影响胃癌患者预后的危险因素(P均<0.05)。多因素分析显示，LncRNA CECR7表达、TNM分期、肿瘤分化程度是影响胃癌患者预后的独立危险因素(HR=1.773，95%CI为1.176～2.673；HR=1.754，95%CI为1.435～2.145；HR=1.633，95%CI为0.842～3.167，P均<0.05)。见表4。

2.5 胃癌组织中LncRNA CECR7表达与患者3年总存活率的关系 胃癌组织中LncRNA CECR7低表达的患者3年总存活率明显高于高表达组(F=5.785，P<0.05)。见图1。

3 讨论

胃癌是临床上十分常见的恶性肿瘤。胃癌家族遗传史，长期食用熏烤、盐腌食品，吸烟，幽门螺杆菌感染等都能增加胃癌发生几率[8]。胃癌的癌变是一个涉及多因素、多步骤、多阶段发展的过程，涉及多种基因表达异常[9]。胃癌对人类健康影响严重，然而目前尚没有相关的预测指标，临床主要根据患者症状给予对应治疗，存在一定的滞后性。

表2 LncRNA CECR7与胃癌临床病理特征的关系 例

表3 LncRNA CECR7与胃癌患者预后的关系 例

表4 影响胃癌患者预后的危险因素分析结果

LncRNA是长度>200个氨基酸、不编码蛋白质的RNA。LncRNA在多种疾病发生发展中发挥一定的作用，与肝癌、肺癌、胃癌等多种疾病相关[10]。胃癌中，LncRNA TRERNA1、LncRNA SMARCC2、LncRNA BC005927在胃癌细胞中高表达能促进胃癌细胞的迁移和侵袭，加快胃癌患者疾病进程[11-13]。猫眼综合征是一种基因过表达或部分染色体重复使患者眼部缺损、肛门闭锁、耳部凹陷、心脏和肾脏缺陷等严重缺陷的疾病[14]。其中CECR7是猫眼综合征中异常表达基因，CECR7是位于22号染色体上、长23 501个碱基，是一种功能尚未明确LncRNA。LncRNA CECR7在正常肝组织中表达水平相对较低，在肝癌组织中高表达，与肝癌患者的存活率显著相关[15]。另有研究发现，LncRNA CECR7在胰腺癌、食管癌等肿瘤组织中高表达，可促进癌细胞的增殖、抑制其凋亡，可能作为致癌基因发挥作用[4,16]。

图1 LncRNA CECR7低、高表达生存曲线

目前鲜少有LncRNA CECR7与胃癌的相关报道，因此本研究对LncRNA CECR7在胃癌中的表达进行研究。结果显示LncRNA CECR7在胃癌组织中表达水平显著高于癌旁组织，且与胃癌患者TNM分期、肿瘤直径、脉管浸润密切相关。已有研究表明，TNM分期可作为评估胃癌预后和提供临床治疗最重要的参考标准，肿瘤直径可在一定程度上反应肿瘤大小、脉管浸润可一定程度上反应癌细胞转移情况[17]。LncRNA CECR7高表达患者术后肿瘤复发率(无死亡)、死亡明显升高，患者生存率明显低于LncRNA CECR7低表达患者，提示LncRNA CECR7的表达与胃癌的侵袭转移、病情严重程度密切相关，且能够作为患者预后的预测指标。胃癌组织中LncRNA CECR7低表达患者3年总存活率明显高于高表达组，提示胃癌组织中LncRNA CECR7表达水平可在一定程度上反映患者存活时间长短。进一步分析发向，LncRNA CECR7表达、TNM分期、N分期、M分期、肿瘤分化程度、有无脉管浸润均是影响胃癌患者预后的危险因素，LncRNA CECR7表达、TNM分期、肿瘤分化程度是影响胃癌患者预后的独立危险因素，提示LncRNA CECR7表达水平可能作为一项判断胃癌患者预后的独立指标，亦是判定胃癌患者临床结局的重要依据。

综上所述，LncRNA CECR7在胃癌中高表达，与TNM分期、预后密切关系，有望成为患者病情诊断及不良预后预测的潜在生物标志物，为胃癌临床治疗提供新的策略，但其具体作用机制有待深入研究。但本研究中并没有对患者饮食等影响胃癌的相关因素进行细分，存在一定的缺陷。