■谷子林 谷新晰 卢海强 刘亚娟 陈赛娟 陈宝江
(河北农业大学动物科技学院,河北保定071001)
随着我国畜牧业由数量型向质量型的转变,抗生素替代品的研发成为动物营养领域研究的热点。其中生物发酵饲料成为人们关注和研究的重点之一。生产试验表明,生物发酵饲料在提高动物的生产性能,提高饲料的适口性和消化率,改善环境,降低发病率,尤其是降低消化道疾病的发生率和提高成活率方面,展现出巨大的潜力。在此,就生物发酵饲料在我国家兔生产中的应用进展情况进行总结和归纳。
生物发酵饲料是指将一定的饲料原料利用有益微生物制剂进行发酵,用以饲喂动物,即生物发酵饲料。通过微生物代谢作用,降解被发酵原料中的部分蛋白质、脂肪和多糖等大分子物质生成可溶性多肽、酶、B族维生素、细菌素、低分子有机酸等小分子活性物质,形成活菌含量高、营养丰富、适口性好的生物饲料或其原料。与未发酵的饲料原料比较,具有巨大的应用价值。
目前我国发酵饲料以固态发酵为主。发酵的菌种种类繁多,我国农业部2013 年第2045 号公告允许添加的微生物种类有34种(见表1)。
表1 我国农业部2013年第2045号公告允许添加的微生物种类
目前,市场上主要使用的菌种有:酵母菌、芽孢杆菌、乳酸菌、以及霉菌。大体可分为6 大类:乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌、放线菌、光合细菌、霉菌等。
生物发酵的主要原料根据目的不同可分为两大类:一类是赋予其新的功能的饲料,如:发酵豆粕类等;一类是具有一定缺陷的饲料,如:低质纤维类、有毒饼粕类,通过发酵,降低或钝化抗营养因子,降低毒性,提高消化率和产品品质。
在家兔生产中,按照被发酵的饲料来源不同以及目前已有研究的原料,主要分为以下三类:
第一类:蛋白饲料类。生产中以发酵豆粕多见,并被广泛应用于动物饲料中。但其他饼粕类饲料也有研究并在生产中应用。比如:菜籽粕、棉粕、花生粕、葵花粕、芝麻粕、玉米胚芽粕、葡萄籽粕、油茶粕、紫苏粕、牡丹籽粕、棕榈粕、榛仁粕、沙棘籽粕、甜菜粕、米糠粕、橙粕、油桐粕、韭菜籽粕等,几乎应有尽有。
第二类:饲草秸秆类粗饲料。生产中以玉米秸秸秆为主,其他粗饲料也有不少研究,比如:花生秧、稻草、大豆秸秆、高粱秸秆、豌豆秸秆、胡麻秸秆、统糠、马铃薯茎叶、柑橘皮、葡萄皮渣、菠萝皮渣、柚子皮、香蕉皮、苹果渣、玉米皮、芦苇、苜蓿草等。
第三类:工业下脚料(糟渣类):如白酒糟、啤酒糟、醋糟、甘薯渣、木薯渣、马铃薯渣、豆渣、菌糠、甘蔗渣、中药渣等。
固体饲料发酵的工艺,依据发酵原料和目标不同而不同。有的是单一菌种发酵,更多的是复合菌种发酵;有的是一次发酵,也有的是两次发酵;从发酵原料或培养基来说,有的是单一的,更多的是复合的。从发酵的条件来说,多进行发酵工艺条件的优化。一般设置若干影响因子的正交设计,如:原料(培养基)质量比、菌种质量比、接种量、水料比、碳氮比(C/N)、初始pH 值、发酵温度、发酵时间等。
从发酵的容器不同,可分为自封袋(或密封塑料袋)、发酵池和发酵罐等。
从有氧与否的不同,可分为厌氧发酵、好氧发酵和复合式发酵。由于好氧发酵消耗过多的能量,产生大量的热量,一般以精饲料原料(能量饲料和蛋白饲料)为主的发酵多采用厌氧发酵为主。而好氧发酵多用于纤维含量较高的粗饲料,或必须通过高温发酵过程达到目的的其他饲料。
发酵饲料对家兔生产性能影响的报道比较多。齐聪岩等以20%的发酵玉米秸秆饲喂生长獭兔,与对照组比较,日增重(30.53/26.60 g)、平均日采食量(156.71/152.78 g)均显著增加(P<0.05);料重比下降(5.133/5.73)。王芳等以20%的醋糟、25%发酵醋糟替代对照组中等量的谷草和小米壳等混合物,饲喂加利福尼亚和新西兰白兔育肥兔50 d,全期增重、日增重、平均日采食量和料重比,各组间差异不显著(P>0.05)。卢海强等以生物发酵饲料利菌肽1 号(以复合粗饲料为主要发酵底物)和利菌肽2 号(以酿酒酵母为主要发酵底物)替代无抗基础日粮(对照组)的3%(试验一组)和2%(试验二组)饲喂断奶獭兔。结果表明:日增重分别为26.82、26.00 g 和23.92 g,两个试验组均高于对照组(P<0.05);日耗料分别为85.79、81.76 g 和80.71 g,试验组均高于对照组,可见发酵饲料有提高适口性的作用;料重比分别为3.20、3.14 和3.37,两个试验组均优于对照组。周永伦将发酵花生秧替代0%、15%、25%和35%的花生秧,饲喂断奶新西兰白兔。日增重分别为29.12、31.56、33.76 g 和38.03 g,即随着添加发酵花生秧比例的增加而增加,各组间差异显著(P<0.05);每只日均耗料也随着添加量的增加而增加,料重比与之相反,组间差异显著(P<0.05)。由此可见,发酵花生秧可以提高日增重、适口性和饲料转化率。徐兴军等以5 种菌(产朊假丝酵母、热带假丝酵母、啤酒酵母、黑曲霉、白地霉)糖化发酵混合饲料,替代基础日粮的20%,饲喂伊普吕兔肉兔。结果表明,试验组日增重提高(23.80/20.00 g)、日耗料降低(118.57/124.72 g),差异显著(P<0.05)。料重比下降(5.94/6.58)。李志涛以发酵白灵菇菌糠分别替代基础日粮中的等量花生秧0.00%、20.80%、31.20%、41.60%和52.00%,饲喂75 日龄商品肉兔,平均日采食量分别为148.53、139.41、144.35、152.13 g和151.84 g,高添加组有提高采食量的趋势,各组间差异不显著(P>0.05);日增重分别为18.00、21.00、18.25、22.25 g 和25.75 g,随着添加量的增加日增重提高,52.00%的替代组最高,与其他各组相比差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),其次是41.60%的替代组,与对照组差异显著(P<0.05);料重比分别为8.82、6.73、7.56、7.02和6.12,同样以最高替代组最优,与对照组差异显著(P<0.05)。
石剑以自己筛选的多菌种对玉米芯进行发酵,玉米芯发酵前后的营养成分变化如下(见表2)。
表2 玉米芯发酵前后营养成分对比(%)
以发酵玉米芯替代基础日粮中的部分粗饲料(菊花粉、花生秧、花生皮、玉米秸秆),替代比分别为0%、28.00%、39.00%和31.50%,饲喂7 周龄的生长獭兔。各组的日增重分别为12.6、13.75、11.83 g和13.28 g,组间差异不显著(P>0.05);增重成本降低,以替代28.00%的最佳。孙海涛等分别以0%、3%、6%、9%和12%的发酵豆粕饲喂断奶~2 月龄伊拉肉兔,日采食量差异不显著(P>0.05);平均日增 重ADG 分 别为41.33、40.58、39.28、39.17 g/d 和38.53 g/d,随着发酵豆粕添加量的增加而逐渐降低,但差异不显著(P>0.05);料重比F/G 分别为2.34、2.29、2.28、2.47 和2.54,以3%和6%的低添加量最优。王根旺以一种商品生物饲料分别占精饲料的0%、1%、2%和3%饲喂1 450~1 750 g 的2 月龄中国白兔,饲养期一个月,结果表明,日增重分别为6.7、8.3、18.3 g 和10.5 g,以2%的生物饲料组最高。吴灵丽等分别在饲喂含有以发酵苹果渣0%(对照组)、9.6%(A 组)、19.2%(B 组)、28.8%(C 组)的试验饲粮饲喂45 日龄的健康獭兔,试验兔日采食量随着发酵苹果渣添加量的增加而逐渐增加;平均日增重分别为21.78、23.39、23.41 g 和24.98 g,以对照组最低,C 组最高,二者差异显著(P<0.05),其他各组差异不显著(P>0.05);料重比分别为5.43、5.17、5.23 和5.07,依然是对照组最差,C 组最优。各试验组与对照组相比差异显著(P<0.05)。
发酵饲料含有大量的有益菌及抗病活性因子,在预防家兔腹泻和提高成活率方面有较好的效果。卢海强等以生物发酵饲料(利菌肽1号和利菌肽2号)饲喂断奶的仔兔,结果表明:日增重和料重比各组差异不显著(P>0.05),断奶成活率分别为98.20%、97.60%和95.20%,两个试验组成活率均高于对照组,其中试验一组与对照组相比差异显著(P<0.05)。卢海强等以此发酵饲料饲喂断奶獭兔:腹泻率分别为1.65%、1.87%和2.25%,成活率分别为97.87%、96.54%和94.95%,试验一组与对照组相比差异显著(P<0.05),其他各组间差异不显著(P>0.05)。由此可见,在无抗日粮中添加发酵饲料,对于预防腹泻,提高成活率作用明显。吴灵丽等分别饲喂含有发酵苹果渣0(对照组)、9.6%(A 组)、19.2%(B 组)、28.8%(C 组)的试验饲粮饲喂45 日龄的健康獭兔,各组的腹泻率分别为9.12%、8.045%、7.51%和7.41%,添加发酵苹果渣有降低腹泻率的作用。其中B 组和C 组与对照组差异显著(P<0.05),其他各组差异不显著(P>0.05)。周永伦将发酵花生秧替代15%、25%和35%的花生秧,饲喂80 只断奶新西兰白兔。结果表明,各组的死亡率分别为20%、15%、10%和0%,说明发酵花生秧具有预防疾病,提高成活率的作用。邹知明等以发酵平菇菌糠饲料饲喂家兔,试验组与对照组相比,发酵菌糠饲料可以降低家兔的腹泻率和病死率,分别为51.85%和50%。说明平菇发酵饲料也是值得推广的家兔饲料。
饲料在发酵过程中会产生一些消化酶,同时会对内源酶产生一定影响。齐聪岩等以20%的发酵玉米秸秆饲喂生长獭兔,肠道中消化酶活力平均值变化,蛋白酶(0.408 8/0.318 8 U/g)、α-淀粉酶(0.986 8/0.742 2 U/g)、β-葡聚糖酶(0.249 1/0.205 7 U/g)显著升高(P<0.05),纤维素酶(1.205 99/1.146 2 U/g)极显著升高(P<0.01)。覃克勋等以21%的发酵菜籽饼替代等量的豆粕饲喂40 日龄的新西兰公兔(阉割),结果表明:发酵菜籽饼作为蛋白质补充饲料饲喂肉兔适口性好,无异常表现,生长速度快。两组差异不显著(P>0.05)。吴灵丽等饲喂含有4 个不同比例发酵苹果渣的试验饲粮饲喂45 日龄的健康獭兔,各组的营养物质消化率:干物质分别是:62.55%、62.20%、68.51%和66.37%,B 组与其他组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);粗蛋白含量分别为:53.41%、55.28%、56.63%和57.29%,依然是C组最高,三个试验组差异不显著(P>0.05),与对照组差异显著(P<0.05);粗纤维的消化率分别为16.03%、17.13%、19.49%和18.13%,与其他营养物质的消化率有相同的趋势。李志涛以发酵白灵菇菌糠替代等量花生秧的试验表明:饲料粗蛋白的消化率分别为:60.36%、55.31%、71.04%、66.44%和64.10%,以试验二组最高,与对照组和试验一组差异显著(P<0.05);粗纤维的消化率分别为:5.05%、6.94%、7.21%、10.27%和19.23%,以试验四组最高,与对照组和试验一组、二组差异显著(P<0.05);各处理组肉兔空肠淀粉酶的活性均略高于对照组,但各组间差异均不显著(P>0.05)。试验组脂肪酶的活性均高于对照组,呈现一个先升高后降低的趋势,与对照组相比分别提高了13.2%、20.3%、17.3%、19.6%(P<0.05)。各处理组间差异不显著(P>0.05)。石剑以发酵玉米芯饲喂生长獭兔,试兔粪中蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和植酸酶的活性分别提高了34.29%、21.72%、46.73%和53.36%,相应粪便中蛋白质、淀粉、脂肪、粗纤维素等含量分别下降19.2%、20.5%、18.67%和7.95%,表明发酵玉米芯饲料中富含的菌剂进入胃肠道可产生消化酶,促进供试动物对饲料中营养物质的消化吸收,提高饲料报酬率。
宋献艺等以0%、9.60%、19.20%和28.8%的发酵苹果渣饲喂生长獭兔,与对照组比较,被毛重量提高,其中试验三组与对照组差异显著(P<0.05);被毛长度和被毛密度有增加的趋势,但差异不显著(P>0.05);皮张面积普遍提高,其中试验二组和试验三组与对照组差异显著(P<0.05);试验兔全净膛重、半净膛重和肉中蛋白质含量显著高于对照组(P<0.05),分别提高14.3%、9.6%、8.9%和5.25%,且第三组在各试验组中达到最高,各试验组间差异不显著(P>0.05);在全净膛率、半净膛率、pH 值方面,各试验组仅具有提高其含量的趋势(P>0.05)。徐兴军等以3 种菌(白地霉、啤酒酵母、热带假丝酵母)混合发酵生产单细胞蛋白饲料,以20%的比例替代日粮饲喂生长肉兔,发现兔肉中脂肪质量分数降低0.39%。徐兴军等用5 种菌制备马铃薯渣发酵饲料,以20%的比例替代肉兔日粮,试验组肉兔鲜肉中的水分含量极显著低于对照组(P<0.01),蛋白质含量显著高于对照组(P<0.05),脂肪含量略高于对照组,表明5 种菌糖化发酵饲料有利于肉兔体内蛋白质的合成与脂质的积累。邵淑丽等以30%马铃薯渣发酵饲料与沙棘嫩枝叶配合使用,可提高兔肉蛋白质(26.53%/21.30%)和脂肪(16.29%/8.73%)含量,改善兔肉品质。
孙海涛等分别以0%、3%、6%、9%和12%的发酵豆粕饲喂断奶~2 月龄伊拉肉兔,血清胆固醇CHO含量随着发酵豆粕添加量的增加而逐渐降低,高添加量与对照组相比差异极显著(P<0.01),其他各组差异显著(P<0.05);而血清总蛋白和碱性磷酸酶含量各组间差异不显著(P>0.05)。王芳等以20%的醋糟、25%发酵醋糟替代对照组中等量的谷草和小米壳等混合物,饲喂加利福尼亚和新西兰白兔育肥兔,各生理指标除了淋巴细胞百分比(LY%)分别比对照组低19.67%和13.69%(P<0.05),其他指标差异不显著(P>0.05);各项生化指标均在正常范围,组间差异不显著(P>0.05)。宋献艺等以0%、9.60%、19.20%和28.8%的发酵苹果渣饲喂生长獭兔,IgG水平明显升高(P<0.05)。总抗氧化能力和丙二醛以试验二组最佳,与对照组差异显著(P<0.05);UREA 以试验三组最低,与对照组和其他试验组差异显著(P<0.05);GLU 三个试验组均高于对照组,差异显著(P<0.05)。其他指标,如:ALT、AST、ALP、TP、ALB、TG 和TC 等,各组之间差异不显著(P>0.05)。李志涛以发酵白灵菇菌糠分别替代基础日粮中的等量花生秧(%)0.00%、20.80%、31.20%、41.60%和52.00%,饲喂75 日龄商品肉兔,与对照组相比,丙二醛(MDA)分别降低1.73%、7.28%、7.39%、5.83%,但各组间差异均不显著(P>0.05),各处理组超氧化物歧化酶(SOD)活性均显著高于对照组(P<0.05),随着白灵菇菌糠发酵饲料添加水平的升高,SOD 酶活性分别提高了14.10%、18.20%、23.68%、15.90%,但各处理组间差异不显著(P>0.05),各处理组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量均显著高于对照组(P<0.05),与对照组相比GSH-Px 的含量分别降低了17.69%、30.43%、39.48%、39.07%。
齐聪岩等以20%的发酵玉米秸秆饲喂生长獭兔,肠道中微生物数量平均值变化(×109CFU/g):大肠杆菌明显减少(61.1/113.54)、乳酸菌(139.0/106.4)、双岐菌(99.6/77.12)和芽孢菌(97.4/70.0)显著或极显著增加。孙海涛等分别以0%、3%、6%、9%和12%的发酵豆粕饲喂断奶~2 月龄伊拉肉兔,盲肠乳酸菌含量分别为6.99、7.74、8.35、9.51 CFU/g 和9.29 CFU/g,以两个高剂量添加组最高,与对照组差异极显著(P<0.01),与两个低剂量添加组差异显著(P<0.05);而大肠杆菌含量(CFU/g)随着发酵豆粕添加量的增加而逐渐降低,除了3%添加量组之外,其他各试验组与对照组比较差异显著(P<0.05)。石剑以发酵玉米芯饲喂生长獭兔,测定粪便中不同微生物的含量。与对照组比较,大肠杆菌数量减少25.47%,乳酸菌提高33.28%、双歧杆菌提高了24.77%,芽孢杆菌增加13.13%,说明发酵玉米芯饲料富含有益生作用的活菌,可以平衡供试动物肠道菌群结构并抑制致病菌的增殖。
孙海涛等以0%、3%、6%、9%和12%的发酵豆粕饲喂断奶~2月龄伊拉肉兔,十二指肠绒毛高度(μm)分别为672.57、737.57、775.63、796.71 和809.50,以12%剂量添加组最高,与对照组和两个低剂量组比较差异极显著(P<0.01)。吴灵丽等以发酵苹果渣饲粮饲喂45 日龄的健康獭兔,试验组回肠隐窝深度、空肠绒毛长度和肠壁厚度、十二指肠肠壁厚度,与对照组明显增加,差异显著(P<0.05)。
生产中发现,使用生物发酵饲料之后,兔舍内的臭味降低,空气质量明显改善,家兔呼吸道疾病发生率降低。但是令人遗憾的是,至今未见相关的研究报道,其作用机制也不是十分清楚。
李素敏利用本实验室研发的5 种微生态制剂对已知霉菌孢子含量的花生皮(54 500 个/g)、红薯秧(36 000 个/g)和玉米(50 000 个/g)进行发酵处理,结果表明,经过微生物处理之后,霉菌孢子数量大幅度降低,效果显著。好氧发酵效果更好。对花生皮样品在发酵的同时,添加一定的蔗糖,发酵进行更加彻底,消除霉菌孢子的效果更好。无论是厌氧还是好氧,均可使霉菌孢子控制在100个/g以内。
该试验用5 种微生态制剂对霉变的玉米进行发酵处理,结果表明:不同霉菌毒素的含量都有一定程度的降低。其中黄曲霉毒素B1 经BH 和STS 处理后均降低了31.88%。伏马毒素素B1 和B2 经三个厌氧处理组(SS-W、SS-Y、STS)均降到100 μg/kg 以下。STS 分别使玉米赤霉烯酮降低了50%,赭曲霉毒素降低了53.85%。但是,对于呕吐毒素的降解率最低。
该试验对一发生饲料霉变中毒的兔场的饲料进行上述脱毒处理。使妊娠母兔流产死胎的现象得到控制,基本达到了对照组的水平;继续饲喂脱毒的生物发酵饲料两个月后,母兔的产仔数,出生成活率,断奶成活率都恢复到了中毒前的水平。
4.1.1 发酵饲料应用于家兔方面的研究较少。我国在发酵饲料方面起步晚,发展较慢,就其在不同动物生产中的应用进展也不尽相同。从中国知网查询得知,在家兔生产中的应用研究远远少于其他畜禽和水产动物。机理的研究匮乏,多数为生产验证性的试验报告。
4.1.2 针对家兔研发的生物饲料种类较少。研发的产品多数是通用型的,没有针对家兔的消化生理特点而研发。多数生物饲料生产企业规模小,设备简单,高层次专业人才缺乏。由于设备简陋,管理和卫生条件差,对发酵饲料质量的检测方法和标准不健全,产品的稳定性不足。
4.1.3 使用效果表现不一。从众多的试验数据看,有些结果不尽一致。笔者对多个生产发酵饲料的企业和用户进行调研,反应的效果不尽一致。也就是说,稳定性有待改进。
4.1.4 机理研究有待深入。很多研究侧重于观察应用效果,在机理方面研究较少或不深入。
4.1.5 评判体系不健全。目前评判发酵饲料的好坏主要是根据养殖效果来体现。但是从商品的生产要求来说,这个评判标准是不全面的。从营养物质含量,到消化吸收率;从有益菌数量,到代谢产物等主要指标,均应有一个定性和定量的指标,以全面客观对发酵饲料进行评判。
2020 年我国饲料将全面禁抗。寻找抗生素替代品迫在眉睫。已有的研究表明,生物发酵饲料在预防动物的消化道疾病方面大有可为,是替抗方案中不可或缺的重要途径之一。尤其是家兔,消化道疾病发病率最高,对生产造成的威胁最大,是生产中重点防控的对象。因此,开展生物发酵饲料的研发,对于促进中国家兔产业的健康发展,实现无抗养殖,前景广阔。同时,饲料通过生物发酵,可以钝化抗营养因子、降解霉菌毒素、改善劣质饲料原料品质、提高饲料的消化率和适口性、产生多种生物活性物质,抑制动物肠道中有害菌的生长繁殖,调节动物胃肠道微生态平衡,提高免疫力,提高成活率,效果显著,可谓一举多得。因此,我们有理由相信,顺应我国畜牧业快速发展和时代的需要,生物发酵饲料将会突飞猛进发展,为中国养兔业乃至中国整个养殖业发挥巨大作用。