2018年贵州省部分地区高致病性禽流感H5和H7亚型免疫抗体检测分析

王 兵，廖书丹，周 怡，蒋山翊，周碧君，王开功∗

(1.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025； 2.贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室，贵州 贵阳 550025)

禽流感(Avian influenza，AI)也称禽类病毒性流行性感冒，病原为禽流感病毒，属于正黏病毒科流感病毒属的A 型流感病毒(Avian influenza virus，AIV)[1，2]。 A 型流感病毒有多种血清型，致病力也各不相同，禽感染后呈现出无症状带毒、亚临床症状、轻度呼吸道症状和急性致死性等不同表现形式[3，4]。 根据引起的临床症状及病理变化，可将禽流感分为高致病性禽流感、低致病性禽流感和非致病性禽流感3 大类[5]。 其中A 型流感病毒的部分H5 和H7 亚型毒株可引起高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza，HPAI)，对禽类有严重危害性[6]。 高致病性禽流感可致不同日龄、不同品种的禽类感染发病，病死率可达100%，被我国列为优先防控和重点防范的一类动物疫病[7～10]。 高致病性禽流感一旦暴发，疫情可由疫点区域向周边迅速扩散并呈大规模死亡。 病死禽有头部水肿、头冠发紫、胰腺和脾胃有灰白色坏死点及充血点、喉气管黏膜充血和黏液增多等病变[11～13]。 高致病性禽流感病毒除了可以感染禽类以外，还可以跨越种间屏障对人类的生命安全造成威胁[14，15]。

在家禽健康、环境良好的条件下，对禽体进行科学免疫可以使抗体达到较高水平，可产生较好的免疫保护。 为了做好禽流感防控，我省要求结合实际情况对养殖禽类做好基础免疫和检测工作。 红细胞凝集试验(简称血凝试验，HA)和红细胞凝集抑制试验(简称血凝抑制试验，HI)是目前兽医诊断实验室最常用于检测抗体免疫水平的方法之一，特异性好、操作简单，可进行大量样本检测，结果便于观察[16]。 为检测贵州省高致病性禽流感的免疫效果，本试验采用血凝及血凝抑制试验对2018 年贵州省10 个地区76 个不同规模养殖场送检的1 304 份禽类血清样本进行高致病性禽流感H5、H7 亚型免疫抗体水平检测和分析，为各地区、各养殖场科学制定免疫程序提供基础数据和参考。

1 材料

1.1 样本来源贵阳市、遵义市、毕节市、安顺市、仁怀市、铜仁市、六盘水市、黔东南州、黔西南州、黔南州10 个地区76 个养殖场送检的1 304 份禽血清样本。

1.2 主要试剂禽流感H5 亚型血凝抑制试验抗原、禽流感H7 亚型血凝抑制试验抗原，购自哈尔滨维科生物技术开发公司；磷酸氢二钠(Na2HPO4)、磷酸二氢钾(KH2PO4)，购自重庆川江化学试剂厂。

2 方法

采用血凝试验和血凝抑制试验，严格按照说明书方法进行。

3 结果

3.1 不同季节高致病性禽流感H5 和H7 亚型免疫抗体由表1 可见，2018 年冬春季节高致病性禽流感H5 亚型免疫抗体合格率为78.34%(358/457)，H7 亚型免疫抗体合格率为70.46%(322/457)，未达到国家规定≥70%的要求；夏秋季节高致病性禽流感H5 亚型免疫抗体合格率为62.57%(530/847)，H7 亚型免疫抗体合格率为62.93%(533/847)，未达到国家规定的要求。

3.2 不同地区高致病性禽流感H5 亚型免疫抗体由表2、图1 可见，2018 年贵州省各地区高致病性禽流感H5 亚型免疫抗体合格率从高到低依次为：毕节市98.57%(69/70)＞安顺市95.75%(158/165)＞遵义市88.80%(111/125)＞贵阳市82.61%(133/161)＞仁怀市67.50%(27/40)＞黔西南州66.93%(83/124)＞黔东南州63.75%(102/160)＞铜仁市58.00%(29/50)＞六盘水市 50.33% (152/302) ＞黔南州 22.43%(24/107)。其中：毕节市、安顺市、遵义市、贵阳市达到合格标准，仁怀市、黔西南州、黔东南州、铜仁市、六盘水市、黔南州未达到合格标准。

表2 2018 年贵州省各地区AIV H5 亚型免疫抗体合格率 %

3.3 不同地区高致病性禽流感H7 亚型免疫抗体由表3、图2 可见，2018 年贵州省各地区高致病性禽流感H7 亚型免疫抗体合格率从高到低依次为：毕节市100%(70/70)＞贵阳市95.65%(154/161)＞安顺市94.55%(156/165)＞遵义市90.40%(113/125)＞黔西南州 75.00%(93/124)＞黔东南州 59.37%(95/160)＞仁怀市50.00%(20/40)＞六盘水市41.72%(126/302)＞黔南州19.63%(21/107)＞铜仁市14.00%(7/50)。 其中：毕节市、贵阳市、安顺市、遵义市、黔西南州达到合格标准，黔东南州、仁怀市、六盘水市、黔南州、铜仁市未达到合格标准。

表3 2018 年贵州省各地区AIV H7 亚型免疫抗体合格率 %

3.4 不同养殖规模高致病性禽流感H5 和H7 亚型免疫抗体由表4、图3、图4 可见，检测的76 个养殖场中33 个散养户共计检测578 份血清样本，43 个规模化养殖场共计检测726 份血清样本。 (1)散养户高致病性禽流感H5 亚型免疫抗体合格率为52.08%(301/578)，其中有16 个养殖户免疫抗体合格，合格比例为48.48%(16/33)。 规模化养殖场高致病性禽流感H5 亚型免疫抗体合格率为80.85%(587/726)，其中有36 个养殖场免疫抗体合格，合格比例为83.72%(36/43)。 (2)散养户高致病性禽流感H7 亚型免疫抗体合格率为43.43%(251/578)，其中有17 个养殖户免疫抗体合格，合格比例为51.52%(17/33)。 规模化养殖场高致病性禽流感H7 亚型免疫抗体合格率为83.19%(604/726)，其中有35 个养殖场免疫抗体合格，合格比例为81.40%(35/43)。

表4 不同养殖规模AIV H5、H7 亚型免疫抗体合格率

4 结论

4.1 贵州省10 个地区2018 年冬春季节高致病性禽流感H5 和H7 亚型免疫抗体合格率均达到国家规定≥70%的标准，免疫合格；夏秋季节均没有达到国家规定≥70%的标准，免疫不合格。

4.2 检测的10 个地区中高致病性禽流感H5 亚型免疫抗体达到国家规定≥70%标准的有毕节市、安顺市、遵义市、贵阳市4 个地区；高致病性禽流感H7 亚型免疫抗体达到国家规定≥70%标准的有毕节市、贵阳市、安顺市、遵义市、黔西南州5 个地区。

4.3 76 个养殖场(33 个散养户和43 个规模化养殖场)中，规模化养殖场的高致病性禽流感H5 和H7亚型免疫抗体合格率均高于散养户。

5 讨论

5.1 一直以来，国内外对禽流感的防控均高度重视，其中使用灭活疫苗免疫防止禽流感的暴发是最有效的防控手段，我国对禽流感的防疫强制实行100%免疫[17]。 尽管如此，高致病性禽流感仍有零星暴发，存在较大的隐患[18]。 2018 年我省10 个地区高致病性禽流感H5 和H7 亚型免疫抗体平均合格率分别为68.10%(888/1 304)和65.57%(855/1 304)，从总体上讲均没有达到国家规定≥70%的标准，属于免疫不合格。 与国内的部分地区调查结果相比我省的抗体合格率较低，暴发高致病性禽流感的可能性较大。

5.2 随着养殖业的快速发展，病毒也在不断发生变异[19]。 在实际生产中，接种疫苗后未能获得免疫的状况也经常发生[20]。 分析导致我省禽流感免疫不合格的原因可能有以下几点：(1)疫苗的质量不佳。疫苗过期或保存不当和疫苗中病毒含量较少等导致免疫失效。 (2)疫苗稀释失误。 稀释的方法不恰当，稀释过高或过低都会导致疫苗的浓度、pH 值等发生变化，注射后不能达到免疫效果。 (3)多种疫苗之间的干扰。 同时或者间隔时间较短注射不同的疫苗，疫苗中的病毒会发生互相干扰、相互抑制导致免疫失败。 (4)免疫程序不当。 注射疫苗需要综合考虑生活环境、气温、湿度、免疫次数等，否则不会达到预期效果。 (5)动物自身条件。 动物受自身免疫缺陷或自身发育情况的影响，注射疫苗后无法产生免疫甚至还会产生应激反应。 (6)抗原的变异无法诱导免疫应答。

5.3 禽流感尤其是高致病性禽流感危害十分严重，疫苗免疫是防止禽流感发生和流行的主要方法，在家禽养殖中长期对禽流感进行血清学监测是十分必要的，这对疫苗的选择、免疫效果的考察、免疫计划的执行是十分有用的。 通过血清学监测可以准确掌握疫情动态，根据免疫抗体水平科学地进行综合免疫预防。 禽流感防控是1 项长期持久的工作，只有认真做好疫情的监测，及时采取相应措施，紧急免疫预防，禽流感疫情才能够得到有效控制和消灭。