鹿茸的鉴别方法

王宇鹏

鹿茸为鹿科植物梅花鹿CervusnipponTemminck 或者马鹿CervuselaphusLinnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角[1]。前者习惯性称为“花鹿茸”，后者习惯性称为“马鹿茸”。鹿茸具有壮肾阳、益精血、强筋骨、调冲任、托疮毒的功效，是我国名贵的中药材。在我国，鹿科动物种类有十几种，根据报道显示有多种动物的茸充当鹿茸使用，导致在中药材市场上鹿茸掺伪品较多；还有，因为产地不同，梅花鹿茸、马鹿茸的药材质量不同[2]。因此，应对鹿茸中药材进行有效鉴定，保证鹿茸用药的安全性，本文将近十年与鹿茸药材的鉴定方法相关的研究进行概述。

1 鹿茸的传统鉴别方法

1.1 性状鉴别“花鹿茸”，具有一个分枝的称为“二杠”，主枝称为“大挺”，侧枝称为“门庄”。外皮呈红棕色或者棕色，表面密生细茸毛，茸毛颜色为红黄色或者棕黄色。具有两个分枝的称为“三岔”。“马鹿茸”外观比“花鹿茸”粗大，分枝较多，具有一个侧枝的称为“单门”，两个侧枝的称为“莲花”，三个侧枝的称为“三岔”。有研究者对多种鹿茸药材的外观性状进行比较鉴别，发现马鹿茸分枝最多，这为鹿茸的种间鉴别提供依据[3]。

1.2 显微鉴别取鹿茸粉末，显微镜下可见显微特征：茸毛多碎断，毛根多与毛囊相连，基部多膨大呈撕裂状；毛干表面有瓦片状排列的扁平细胞，细胞的游离边缘指向毛尖；没有骨化的骨组织表面具不规则块状突起，无色，边缘不齐；鹿茸表皮角质层呈淡黄色，表面呈颗粒状；骨碎片不规则，表面具细密纵向纹理，颜色呈淡黄色或者棕色，骨陷窝呈类圆形，数量较多，排列不齐。鹿茸的炮制应去除茸毛，但是中药材市场上流通的鹿茸药材表面的茸毛并没有清除干净，茸毛的显微特征具有一定的稳定性，可以作为鹿茸的显微鉴定特征之一。刘丽等[4]对马鹿茸、梅花鹿茸等七种品种鹿茸的茸毛进行显微鉴别，使用显微量尺测量七种茸毛的长度、毛干直径等显微鉴别指标的数据信息，使用聚类分析法进行分类，鉴别结果与传统鉴别结果一致，即正品为梅花鹿茸、马鹿茸，替代品为白唇鹿茸，混用品为新西兰鹿茸、狍茸、麋鹿绒以及黇鹿茸，结果表明鹿茸的茸毛显微鉴别特征可以作为鹿茸的显微鉴别指标，具有鉴别简便、快速的优点，为鹿茸的品种鉴别提供有效依据。

2 现代鉴别方法

2.1 薄层鉴别薄层色谱鉴别方法具有操作简单、可靠的优点[5]。有研究者以甘氨酸为对照品，对比鉴别不同鹿茸药材，结果发现在与甘氨酸对照品相应位置上，鹿茸蜡片、粉片具有清晰斑点显现[6]；还有研究者以鹿茸溶液为对照品，对强力脑清片、参茸王浆口服液、参茸软胶囊等含鹿茸的中成药中的鹿茸药材进行薄层鉴别[7]，鉴别方法直观、简单。

2.2 光谱鉴别研究报道显示[8]，鹿茸的光谱鉴别方法主要有荧光鉴别法以及紫外光谱鉴别法。紫外光谱鉴别具有简单、直观的优点，具体方法为取鹿茸样品，加一定浓度的乙醇进行提取并滤取药液，以同样浓度的乙醇为空白，在200～300 nm下测量吸光度，结果显示在253 nm、236 nm左右，鹿茸样品呈现最大吸收。但是紫外光谱法在鉴别同源鹿茸药材方面具有应用局限性。胡翠英等[9]应用凝视式荧光光谱成像技术对13种鹿茸饮片进行真伪鉴别，结果显示在相同的实验条件下，13种鹿茸饮片的光谱曲线特征明显不同；在410～670 nm波长范围下对13种鹿茸饮片的光谱数据信息进行聚类分析，聚类分析结果与传统性状鉴别与显微鉴别结果一致，表明荧光光谱成像法可用于鹿茸饮片的真伪鉴别，具有鉴别快速、客观、重复性良好的优点。有研究者[10]使用傅里叶变换红外光谱技术评价了三种厂家的鹿茸粉的质量，为鹿茸粉的等级质量评价提供依据。吴新宇等[11]使用傅里叶变换红外光谱技术结合主成分分析法对鹿茸真伪进行鉴别，鉴别准确率高达93.5%。

2.3 色谱鉴别蛋白质是鹿茸饮片中含量较高的成分，氨基酸是蛋白质的基本组成单位，近年来有许多研究将氨基酸含量作为鹿茸质量分析的主要指标。有研究者[12]采用柱前衍生化HPLC法对50批鹿茸饮片中15种氨基酸的含量进行测定，结果显示鹿茸蜡片中氨基酸含量最高，血片与粉片中氨基酸的含量差异较小，氨基酸含量测定可以作为鉴别鹿茸饮片真伪的主要依据。该研究组使用HPLC指纹图谱法建立了鹿茸饮片的HPLC指纹图谱，采用主成分分析法将不同品种的鹿茸饮片进行鉴别区分，还通过聚类分析法将鹿茸蜡片与骨片进行分离，高效液相指纹图谱结合化学计量法在鉴别不同规格鹿茸饮片具有高效、准确的优点。宗颖等[13]应用高效液相色谱法，建立了梅花鹿茸药材以及鹿茸不同部位的HPLC指纹特征图谱，可用于鹿茸饮片的真伪鉴别，鉴定专属性较高。

2.4 分子鉴别随着现代生物学技术的快速发展，分子生物学技术逐渐用于鹿茸药材的真伪鉴别以及质量评价。DNA条形码技术是分子鉴定中应用比较广泛的技术，具有通用性、唯一性、信息化等优点，操作简便规范。有研究者[14]使用COⅠ通用引物对鹿茸饮片中提取出来的DNA进行聚合酶链式反应(PCR)扩增，在凝胶电泳成像仪器上可见单一、明亮的条带，经克隆纯化后，测定序列后，使用DNAMAN软件进行处理，得到目标序列，在NCBI数据库中使用BLAST算法鉴别鹿茸药材的真伪，可用于同源类鹿茸饮片的鉴别。陈康等[15]使用高分辨率熔解曲线(HRM)鉴别鹿茸药材的真伪，以COⅠ序列为引物，建立正品鹿茸药材的熔解曲线模型，基于该模型，可对鹿茸药材的真伪进行鉴别。HRM技术与DNA条形码技术联合鉴别鹿茸药材，具有高通量、快速、成本较低等优点。魏艺聪等[16]基于COⅠ与SRY基因序列，建立了2个位点的特异性PCR体系，用于鉴别鹿茸样本的来源，并随机选取中药材市场中流通的24个鹿茸样品进行鉴别分析，PCR鉴定法具有简便、可靠的优点。

2.5 免疫鉴定法随着掺伪技术的发展，目前在中药材市场上，对非正品鹿茸的炮制加工方法与正品鹿茸相似，传统性状鉴别无法进行区分，有研究者[17]使用SDS-PAGE凝胶电泳法鉴别了四种鹿茸药材的水溶性蛋白质，结果发现四种鹿茸饮片之间的蛋白质差异，在此基础上，对这四种鹿茸饮片进行鉴别，在凝胶色谱的基础上，使用胶体金免疫层析技术，制成试剂盒，使其用于鹿茸饮片的鉴别，该法具有很高的专属性与特异性。

3 小结

鹿茸既是常用药，又是贵重药，目前在我国中药材市场上，鹿茸的掺伪技术复杂多样，鹿茸的中药鉴别方法由简单直观的传统经验鉴别发展为多组分、多层次指纹图谱技术的综合鉴定方法；并引入分子生物学、免疫鉴定等技术对中药材的品种优劣进行评价，但是各种鉴定方法都有一定的局限性。在实际应用中，可根据情况进行选择。