香茯健脾苦荞茶的制备工艺及其含量测定△

孙芮芮，李明杰，李慧峰，裴妙荣

山西中医药大学，山西 晋中 030600

1 材料

1.1 仪器

2695型高效液相色谱仪、2998型检测器、Empower色谱工作站(美国沃特世公司)；AB135-S型电子天平(十万分之一，瑞士Mettler公司)；HANGPING FA2104型(万分之一天平，上海精科天美有限公司)；98-1-B型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司)；GZX-9076 MBE型电热恒温鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)。

1.2 试药

芦丁对照品(上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号：5981，纯度：95.2%)；乙腈(色谱纯，批号：20180318，欧普森天津市彪仕奇科技发展有限公司)；甲醇(分析纯，批号：20180318，天津市进丰化工有限公司)；甲醇(色谱纯，批号：20160510，欧普森天津市彪仕奇科技发展有限公司)；冰乙酸(分析纯，批号：20150921，天津市光复科技发展有限公司)。

香薷、茯苓、苦荞购自太原市万民大药房，以上饮片均经山西中医药大学中药鉴定教研室裴香萍副教授鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 香薷挥发油提取工艺

根据单因素试验考察结果，以挥发油提取率为考察指标，选择对提取影响较大的料液比(A)、提取时间(B)、浸泡时间(C)3个因素，每个因素设定3个水平。单因素考察表见表1。采用L9(34)正交表安排正交试验，设计L9(34)正交试验，结果见表2～3。

表1 香薷挥发油提取工艺因素水平

表2 香薷挥发油提取工艺正交试验

表3 香薷挥发油提取工艺正交试验方差分析

由表2可知，B因素对挥发油提取率影响有统计学意义(P<0.05)。研究对实验最佳提取水平组合A3B2D3及实验数据分析所得最佳提取水平组合A3B3D2进行进一步验证实验，分别对A3B2D3、A3B3D2提取工艺进行2次水平操作，量取提取挥发油体积，计算提取率。实验数据结果见表4。

表4 香薷挥发油提取工艺验证实验结果

由表4可知，结果与正交试验最佳提取水平组合数据差异不大，综合考虑取A3B3D2，即料液比为1∶12，浸泡1.5 h，提取4.0 h，为最佳提取工艺。此工艺稳定可靠，合理可行。

2.2 香薷、茯苓水提工艺

根据单因素试验考察结果，以出膏率为考察指标，选择对提取影响较大的3个因素：加水量、提取时间(A)、料液比(B)，提取次数(D)，每个因素设定3个水平。单因素考察表见表5。采用L9(34)正交表安排正交试验，结果见表6～7。

表5 香薷、茯苓水提工艺因素水平

表6 香薷、茯苓水提工艺正交试验

表7 香薷、茯苓水提工艺出膏率的方差分析

由表6可知，由数据分析所得最佳提取水平组合为A3B3D3，由实验所得最佳提取水平组合为A1B3D3。由表6～7直观分析可得：各因素对实验结果的影响次序为D>B>A，其中D因素对出膏率影响差异有统计学意义(P<0.05)。研究对实验最佳提取水平组合A1B3D3及实验数据分析所得最佳提取水平组合A3B3D3进行进一步验证实验，分别对A3B3D3、A1B3D3提取工艺进行2次水平操作，所得提取液浓缩成稠膏，置于60 ℃烘箱中烘干，计算出膏率。实验数据结果见表8。

5.1 推广秸秆气化技术，有利于提高农民生活质量，促进农村奔小康的进程。通过秸秆气化技术，利用农村丰富的秸秆资源，以较低的成本向农民供应秸秆燃气，做到了“两人烧火，千户做饭”，即改善了居住环境，又降低了劳动强度，实现村内少柴草，室内无烟尘的愿望。

表8 香薷、茯苓水提工艺验证实验

由表8可知，结果与正交试验最佳提取水平组合数据差异不大，综合考虑取A1B3D3，即10倍量的水，提取0.5 h，提取3次为最佳提取工艺。此工艺稳定可靠，合理可行。

2.3 香茯健脾苦荞茶工艺

2.3.1香茯健脾苦荞茶工艺考察 香茯健脾苦荞茶由香薷和茯苓的水提液经苦荞吸附干燥制成，需将苦荞膨化到一定程度与香薷和茯苓的提取液混合。将膨化的苦荞按不同比例与提取液混合，进行比较，见表9和图1。

表9 苦荞、提取液吸附比例比较

注：A.吸附比例1∶0.5；B.吸附比例1∶1；C.吸附比例1∶1.5；D.吸附比例1∶2。图1 苦荞、提取液吸附比例比较

结果表明，苦荞与提取液的比例为1∶1时吸附效果最佳。

2.3.2香茯健脾苦荞茶制备工艺 取香薷183 g，提取挥发油，蒸馏后的水溶液备用；药渣与茯苓817 g 加10倍量水煎煮3次，每次 30 min，滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，浓缩至1000 mL，另称取膨化并整粒的苦荞1000 g，加入上述水提液浓缩液，混匀使药液充分吸附于苦荞内，干燥，喷以香薷挥发油，混匀，分装，即得[9]。

2.4 香茯健脾苦荞茶的含量测定

2.4.1样品处理 对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品1.06 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，摇匀，即得。所得芦丁对照品的质量浓度为0.106 mg·mL-1。

供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声处理(功率：250 W，频率：40 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

苦荞阴性对照品溶液的制备：取缺苦荞的阴性样品1 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备缺苦荞的阴性对照溶液。

2.4.2色谱条件的选择 检测波长的选择：取芦丁对照品溶液在210～400 nm进行全波长扫描，所得光谱图见图2。结果表明，芦丁在256 nm左右处有最大吸收，故选择256 nm作为含量测定的检测波长。

图2 芦丁对照品溶液光谱图

色谱柱：Diamonsil C18(2)(200 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；流动相：甲醇-0.5%冰乙酸(34∶66)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：256 nm；进样量：10 μL[10]。在此条件下色谱峰达到完全分离且保留时间适中，阴性无干扰，见图3。

注：A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.苦荞阴性对照品。图3 香茯健脾苦荞茶色谱图

2.4.3线性关系考察 分别精密吸取芦丁对照品(0.106 mg·mL-1)4、6、8、10、12、14、16、18、20 μL，以对照品进样量X为横坐标，以峰面积的积分值为纵坐标Y，进行线性回归，回归方程Y=3 844.7X-113 658，r=0.999 9，故芦丁在424～2120 ng线性关系良好。

2.4.4精密度考察 进样芦丁对照品溶液10 μL，连续进样6次，计算其 RSD为0.93%，表明该仪器的精密度良好。

2.4.5稳定性试验 精密吸取供试品溶液10 μL，在0、2、4、6、8、10 h进样，计算RSD为1.04%，表明该供试品溶液在10 h内稳定。

2.4.6重复性试验 取同一批样品(批号：20180501)溶液6份，分别按2.4.1项下方法制备，每份分别进样10 μL，计算得平均质量分数为3.47%，计算得RSD为1.73%，表明重复性良好。

2.4.7回收率试验 采用加样回收法试验，称取6份 0.5 g已知含量的供试品，加入适量的芦丁对照品，制备方法同供试品溶液一样，计算回收率，平均回收率为98.11%，RSD为1.77%，证明实验准确性好。

2.4.8含量测定 再取3批样品，各2份，每份1 g，精密称定，按2.4.1项下方法制成供试品溶液，分别进样10 μL，测定，计算含量，结果见表10。

表10 香茯健脾苦荞茶3批样品中芦丁含量测定结果

3 结论

在单因素试验的基础上，采用正交试验对香薷挥发油提取率及水提取香薷、茯苓的出膏率进一步优化，香薷挥发油提取率的最佳工艺为12倍量的水，浸泡1.5 h，提取4.0 h；香薷、茯苓的出膏率最佳提取工艺为10倍量的水，提取0.5 h，提取3次。香茯健脾苦荞茶最佳制备工艺为将药液按1∶1吸附在苦荞上。

本实验建立了HPLC测定香茯健脾苦荞茶中芦丁含量的方法，采用0.5%冰醋酸-甲醇(66∶34)为流动相，结果显示，目标色谱峰分离效果良好、精密度、重复性和回收率的测定均符合要求。此方法稳定可靠，可用于苦荞茶的质量控制。