过氧乙酸氧化法检测尿碘水平的方法探讨

罗秀霞，上官美荣，刘富菊，李琼英，韩学娉，李 梦，叶志中△

(1.深圳市福田区风湿病专科医院风湿病实验室，广东深圳 518040；2.深圳市赛尔生物技术有限公司，广东深圳 518055)

碘是人体各系统特别是甲状腺激素合成和神经系统发育必不可少的微量元素，有“智力元素”之称，主要来源于食物(80%～90%)和饮水(10%～20%)[1-2]。碘缺乏和过量均可能导致甲状腺疾病，对人体构成一系列损害[3]，特别是孕妇缺碘可能会导致胎儿或婴幼儿不可逆转的智力低下和精神运动障碍[4]。为此，中国在1994年实行了“全民食盐加碘”的综合防治策略，建立了比较完善的监测体系。碘主要通过肾脏和消化道排出，人体约90%的碘是经肾脏排出，在个体代谢稳定的情况下，肾脏碘排出量基本可以反映出人体碘摄入量[5]。所以，尿碘水平目前已经成为衡量人群碘营养状况的重要指标，广泛应用于医院临床诊治、医疗保健和疾病防治等方面[6]。

目前，尿碘检测方法主要有电感耦合等离子体-质谱法、中子消化法、分光光度法、气相色谱法等。中国现行的用于检测尿碘的标准方法是原卫生部在2016年新颁布的砷铈催化分光光度法(国标法)[7]，此方法具有重复性好、抗干扰能力强、灵敏度高等优点，但是此法中的三氧化二砷有剧毒，且手工步骤较多，操作复杂，存在一定的局限性和危险性。本文采用的过氧乙酸氧化法是一种快速定量检测尿液碘的方法，该方法采用活性炭纯化尿液，除去干扰物质[8]；此方法操作简单、快速，大大减少实验的人力、物力，试剂中不含有毒物质，避免了有毒物质的污染，测量结果准确、可靠，具有很高的临床应用价值。本文选择了80份尿液标本，分别用过氧乙酸氧化法与国标法对标本进行检测，进一步证明过氧乙酸氧化法结果可靠、准确，现报道如下。

1 材料与方法

1.1尿样标本来源 尿样标本为深圳市福田区风湿病专科医院提供的随机成人标本80份(含孕妇)，收集中段尿，分成2份，每份不少于10 mL，用一次性密封容器保存。其中一份用过氧乙酸氧化法进行定量测定，一份用国标法测定。

1.2仪器与试剂 酶标分析仪购自中国上海科华实验系统有限公司，型号ST-360；旋涡混合器、振荡器均购自中国江苏康健医疗用品有限公司，型号分别为XH-B、KJ-201A；移液器购自中国北京大龙兴创实验仪器有限公司；秒表购自中国北京天根生化科技有限公司；超级恒温水浴箱购自英国Prima仪器有限公司；恒温尿碘消解仪购自中国上海凌初环保仪器有限公司，型号HD120-T26；可见分光光度计购自中国上海精密科学仪器有限公司，型号7230G。试剂、标准品、参考品、尿碘测定试剂盒购自中国深圳市赛尔生物技术有限公司)；冻干人尿中碘成分分析标准物质购自国家碘缺乏病参照实验室，型号GBW 09110r；高水平碘标准液、中水平碘标准液、低水平碘标准液均购自中国深圳市赛尔生物技术有限公司。

1.3方法

1.3.1测定方法 过氧乙酸氧化法：先后取5 mL标本稀释液和1 mL尿液标本加入到尿液处理滴瓶中纯化尿液，收集纯化后尿液于试管中，取150 μL纯化后尿液加到微孔板中，然后分别加入显色剂50 μL，氧化剂50 μL，震荡混匀，避光反应后用酶标仪单波长450 nm测其吸光度值(A值)，计算标本中碘的水平。

国标法：取各尿样标本0.25 mL置于试管中，分别加入1 mL 1 mol/L过硫酸铵溶液，混匀后置于100 ℃的恒温尿碘消解仪中消化60 min，冷却至室温后加入2.5 mL 0.025 mol/L亚砷酸溶液，混匀后放置15 min，间隔20 s或30 s加入0.30 mL 0.025 mol/L硫酸铈铵溶液反应，上分光光度计测量。

1.3.2线性范围 取用国家标准物质冻干人尿中碘成分分析标准物质(GBW 09110r)标定的高水平碘标准液，标定值为300 μg/L，做系列稀释，分别稀释成300、270、240、210、180、150、120、90、60、30、15、7.5、5、3.75 μg/L。以高水平碘标准液的水平为横坐标，其相对应的A值为纵坐标，进行线性分析。

1.3.3精密性 取用国家标准物质冻干人尿中碘成分分析标准物质(GBW 09110r)标定的高水平碘标准液、中水平碘标准液和低水平碘标准液，高、中、低值分别为300、150、100 μg/L，各重复测定10次，计算精密性。

1.3.4准确度 (1)尿碘国家标准物质的测定：将国家标准物质冻干人尿中碘成分分析标准物质(GBW 09110r、GBW 09109k、GBW 09108o)作为待测标本，重复测定6次，计算相对偏倚。(2)加标回收试验：取经测定水平为141.8 μg/L的成人尿样作为本底，分别加入水平分别为50、100、150 μg/L的碘标准液，计算回收率。

1.3.5特异性(干扰实验) 取国家标准物质冻干人尿中碘成分分析标准物质(GBW 09110r)，加水复原后，分成4份，分别加入20 mmol/L的维生素C、0.1 mol/L的NaCl、0.1 mol/L的NaBr和100 μmol/L的胆红素，每份标本重复测定6次，取测试水平结果均值，计算其相对偏倚。

1.3.6过氧乙酸氧化法与国标法比较 选取80份尿液标本分别用过氧乙酸氧化法与国标法对同一个样品进行测定，并对数据进行统计分析。

1.4统计学处理 本实验采用Excel2007录入结果，用SPSS19.0软件进行配对t检验统计分析。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1线性范围 将高水平碘标准液(300 μg/L)，按照一定的比例进行系列稀释，制备14个不同碘水平的标本，各个水平重复测6次，以碘离子水平与相对应的A均值进行线性回归分析。线性范围在5～300 μg/L，线性相关系数r>0.990，符合检验要求。

2.2精密性 用过氧乙酸氧化法定量测定高水平(300 μg/L)、中水平(150 μg/L)、低水平(100 μg/L) 3个水平碘标准溶液，分别重复测定10次。高水平、中水平、低水平3个水平变异系数(CV)值分别为1.5%、2.4%和2.2%。CV值均低于5%，表明过氧乙酸氧化法的精密性很好，符合生物标本分析要求。见表1。

表1 碘标准液精密性分析(A值)

2.3尿碘国家标准物质测定 用过氧乙酸氧化法定量测定冻干人尿中碘成分分析标准物质，重复测定6次高、中、低3个水平的相对偏倚B分别为3.9%、2.0%、0.1%。相对偏倚均低于5%，表明过氧乙酸氧化法的准确度良好，测定结果符合要求。见表2。

表2 冻干人尿中碘成分分析标准物质准确度结果分析

2.4加标回收试验 取健康成人尿样，分别加入50、100、150 μg/L的碘标准液，每个加标样品需重复测定6次，经计算回收率在96.49%～101.25%，平均回收率为98.88%，表明此方法测定尿碘的回收率良好，符合测定要求。见表3、4。

表3 加标回收试验结果(μg/L)

表4 加标回收试验回收率计算结果(%)

2.5特异性 根据尿液中成分，考察了维生素C、NaCl、NaBr和胆红素等对实验的干扰。维生素C、NaCl、NaBr和胆红素测得的结果与标准值的相对偏倚分别为2.5%、1.8%、1.5%、2.3%，表明过氧乙酸氧化法中的尿液处理滴瓶(纯化装置)可以吸附这些干扰物质，消除了这些干扰物质对于过氧乙酸氧化法的测定结果的影响。见表5。

表5 干扰试验测定结果

2.6过氧乙酸氧化法与国标法比较 在相同的实验条件下，分别用两种方法对80份标本中碘水平进行检测，对结果进行统计学分析，结果表明两种方法之间差异无统计学意义(t=0.027，P=0.980)。

3 讨 论

碘是合成甲状腺激素必需的微量元素，其生物学作用是通过在甲状腺内合成甲状腺激素来实现的，甲状腺激素的主要功能是促进机体的新陈代谢以及青少年和胎儿的发育与成长，尤其他对智力发育和神经系统的影响更为重要。有大量研究表明，碘摄入过量，尤其是食用过多碘盐时，会导致甲状腺炎和甲状腺功能减退等症[9-10]。因此，利用尿碘水平来评价人群碘摄入情况，对于检测和治疗碘引起的甲状腺疾病具有重要意义。

目前中国尿碘检测多采用行业标准WS/T 107-2016推荐的方法进行，但该法操作复杂，而过氧乙酸氧化法具有多种优势，该法是在1998年欧洲内分泌学会推荐，因此，建立基于过氧乙酸氧化法的尿碘检测常规方法十分必要。

在本研究中，笔者建立了一种快速、准确的检测尿碘的方法，各项性能指标均能达到临床检测要求，其中，线性范围5～300 μg/L，在此范围内标准曲线线性r>0.990；CV值和相对偏倚均低于6%；加标回收率在96.49%～101.25%；维生素C、NaCl、NaBr和胆红素对尿碘标准物质的干扰的相对偏倚均低于5%，说明过氧乙酸氧化法中的纯化装置可以消除这些干扰物质对于过氧乙酸氧化法测定结果的影响；采用80份尿液标本分别用此法和国标法进行平行测定结果分析，结果比较差异无统计学意义(P>0.05)，进一步说明过氧乙酸氧化法的准确度较高。

综上所述，过氧乙酸氧化法具有操作简单、重复性好、准确度高、特异性好、可批量操作，无需昂贵仪器和设备等的优点，适用于尿液中碘水平的测定，是一种值得推广的快速检测尿碘的方法。