肾细胞癌患者miR-99a和IGF-1R表达及临床特征

黄四爽，熊 勤

(湖北省汉川市人民医院：1.检验科；2.输血科，湖北孝感 431600)

肾细胞癌(RCC)是临床泌尿系统肿瘤最常见的一类肿瘤，它源于肾小管上皮细胞[1]，成人发病率仅次于膀胱癌，位居第2位，且逐年上升[2]。肾细胞癌的发病机制尚不明确，相关病理机制较为复杂。胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)作为络氨酸激酶跨膜的直接受体，参与到了细胞有丝分裂、细胞转化等过程[3-4]，同时和肿瘤发生和发展有一定关联。microRNA-99a(miR-99a)位于21q21，与一些疾病密切相关，在多种常见肿瘤中均呈现出异常表达[5]。还有学者提出，miR-99a在子宫内膜癌、口腔癌、RCC、肝细胞癌和食管鳞状细胞癌中表达下调[6-7]。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院泌尿科2014年9月至2016年12月收治的肾细胞癌患者80例，患者年龄41～68岁，平均(53.68±4.51)岁；男性49例，女性31例。根据患者病理学分类，将患者分为肾透明细胞癌(59例)，乳头状肾细胞癌(15例)，嫌色细胞性肾细胞癌(6例)。诊断标准：肾细胞癌诊断治疗指南(2018版本)。纳入标准：(1)首发原发性肾癌，无肿瘤转移；(2)术前均未接受规范的放疗(或化疗)。排除标准：(1)长期使用皮质激素或其他免疫抑制剂的患者；(2)合并其他原发和转移肿瘤及严重感染性疾病者；(3)对依维莫司过敏者；患有重度疾病，如心力衰竭、心肌梗死、心律失常、糖尿病等控制不佳的疾病者。所有入组患者均签署研究同意书，本研究获得医院医学伦理委员会批准(编号20140706)。

1.2方法

1.2.1IGF-1R水平检测 染色棕红色颗粒则认定IGF-1R蛋白阳性，根据染色强度进行具体分级和记分[8]对阳性细胞的分级则参照Volm双评分法，在染色成功的肿瘤区域挑选5个高倍视野：然后对阳性细胞百分率进行评分，其中<25%为1分，25%～50%为2分，>50%则为3分；并且对染色强度也进行评价，分为0分(无色)、1分(浅棕色)、2分(棕黄色)、3分(棕红色)。将阳性细胞百分率综合染色强度进行分级，具体为阴性(-)：1～2分，弱阳性(+)：3～4分，强阳性(++)：5～6分。同时由2名病理医师进行结果判断。

1.2.2miR-99a水平检测 使用免疫组化对miR-99a进行检测，miRNA cDNA 试剂盒(购自美国Invitrogen公司)，而后采用ABI 7900HT序列检测系统(购自美国Applied Biosystems公司)进行测序。完成循环后通过仪器读取检测数值，同时由2名病理医师进行结果判断。

1.2.3肾功能相关生化指标检测 取患者空腹静脉血5 mL，3 000 r/min，离心5 min，取其上清液使用自动生化分析仪检测视黄醇结合蛋白(RBP)水平；使用 酶联免疫吸附测定法检测分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)、脑钠肽(BNP)水平；使用循环液相法检测同型半胱氨酸(Hcy)水平；使用免疫比浊法测定尿清蛋白排泄率(UAER)水平。

1.2.4疗效评价 按照标准(RECIST11.0)[9]将疗效分为：完全缓解(CR，病灶全部消失)、部分缓解(PR，病灶缩小30%或以上)、病情稳定(SD，病灶无明显改变)、疾病进展(PD，病灶增加明显)。

2 结 果

2.1不同情况RCC患者癌组织中IGF-1R阳性表达率和miR-99a水平比较 RCC患者性别、年龄、组织学类型、淋巴结转移对患者癌组织中IGF-1R阳性表达率及IGF-1R表达水平的比较，差异无统计学意义(P>0.05)；RCC患者腹膜转移、FIGO分期、病理分化对患者癌组织中IIGF-1R阳性表达率和miR-99a水平的影响均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同情况RCC患者癌组织中IGF-1R阳性表达率和miR-99a水平的比较

续表1 不同情况RCC患者癌组织中IGF-1R阳性表达率和miR-99a水平的比较

2.2RCC患者不同组织IGF-1R阳性表达率和miR-99a水平的比较 RCC患者不同组织进行IGF-1R阳性表达率和miR-99a水平的比较，癌组织、癌旁组织、健侧肾组织中IGF阳性表达率的比较差异有统计学意义(P<0.05)，miR-99a水平的比较差异也有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 RCC患者不同组织IGF-1R阳性表达率和miR-99a水平的比较

2.3RCC患者治疗后临床结局与IGF-1R阳性表达率和miR-99a水平的比较 不同临床结局RCC患者比较，IGF-1R阳性表达率和miR-99a水平的比较差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 RCC患者治疗后临床结局与IGF阳性表达率和miR-99a水平的比较

2.4患者IGF-1R表达情况对肾功能相关生化指标表达水平的影响 RCC患者治疗后阴性患者和阳性患者RBP、SFPRP5、Hcy、BNP、UAER水平的比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 患者IGF-1R表达情况对肾功能相关生化指标表达水平的影响

3 讨 论

RCC的比例占全球恶性肿瘤的2%～3%，虽然比例较小，但却呈逐年增长的趋势[10]，目前对于RCC的主要治疗方法为根治性手术，但是根据统计数据显示，有将近33%的RCC患者在初诊时已经发生转移或在根治术后出现局部复发和远处转移[11]，而转移性RCC对放化疗都不敏感，疗效和预后效果较差[12]，所以尽早诊断RCC成为影响预后的关键因素之一，同时也提醒笔者需要对RCC的治疗和预后效果进行更精确的分析与判断。

本研究的结果显示，RCC患者腹膜转移、FIGO分期、病理分化对患者癌组织中IGF阳性表达率及IGF-IR表达水平的指标比较，差异有统计学意义(P<0.05)。在肝癌、结直肠癌、胰腺癌及前列腺癌等其癌细胞中均有IGF-1R表达增高；而IGF-IR不仅对乳腺癌细胞的增殖有促进作用，而且对肿瘤恶性程度及转移性也有增加作用，本研究的结果发现FIGO分期为Ⅲ/Ⅳ期的患者和病理分化为G3的患者，其IGF-IR表达水平明显上调，表明IGF-IR的水平也与RCC的病理组织学分型等具有一定关系。

本研究结果发现，CR、PR、SD、PD患者IGF阳性表达率及IGF-IR表达水平的比较差异有统计学意义(P<0.05)。IGF是一种常见、对人体诸多生理过程均有重要作用的生长因子，主要通过两套分泌机制(自分泌与旁分泌)对局部细胞产生不同程度的调节作用[13]。还有学者提出，IGF-IR与酪氨酸激酶结合后悔激活细胞通路，使酪蛋白磷酸化过程加速，最终激活磷脂酰肌醇3激酶、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶，最终影响到肿瘤细胞的生长[14-16]。miRNA是非编码的小分子RNA，该基因表达失调参与许多生物过程，包括细胞增殖、分化、凋亡，并且参与癌症的进展[17-19]。而miR-99a的异常表达表明该因子可能参与肾细胞癌的增殖生长。RCC患者治疗后阴性患者和阳性患者RBP、SFPRP5、Hcy、BNP、UAER指标的差异有统计学意义(P<0.05)，进一步表明血清IGF-IR与肾功能的下降有密切的关系。考虑可能机制是由于IGF-IR可促进血管细胞增生从而增加血管通透性，导致血管内皮损伤加快，对肾功能造成损伤，并引起微清蛋白尿发生[20-21]。

综上所述，RCC患者不同来源的组织中其 IGF-IR阳性表达率和miR-99a表达水平均有明显差别，IGF-IR阳性表达率越高，miR-99a表达水平也越高，而患者肾功能相对越差。IGF-IR和miR-99a定量检测有助于对疾病转归情况进行判定。