120例胚胎停育患者绒毛组织染色体核型分析

赵智芳

（山西医科大学晋祠学院，山西 太原 030025）

胚胎停育主要是因为母体自带影响妊娠的不利因素，或者受精卵存在影响妊娠的不利因素导致胚胎在发育期间生长不佳，在停止发育后仍不能顺利排除。临床检查通常表现为胎心搏动无或者有但随之消失、妊娠孕囊不正常。胚胎停育多发生在患者妊娠早期，患者临床表现包含早孕反应消失、疼痛、腰酸等。近年来，胚胎停育现象不断增多，影响妇女身心健康，不利家庭和谐、社会稳定。临床生物学表明，染色体非正常状态是导致胚胎停育的重要因素，有报道表示50～60%胚胎停育的根本原因均为染色体非正常状态。基于此，本文选取2018年08月～2019年08月某医院妇产科收治的120例孕产妇为样本进行核型分析[1]。

1 资料及方法

1.1 一般资料

选取2018年08月～2019年08月某医院妇产科收治的 120例孕产妇为样本，全部样本经由病理诊断，确定为胚胎停育，包含自然受孕流产85例，辅助生殖受孕流产35例。年龄29～38岁，平均（35.62±4.27）岁。

纳入标准：①存在停经史；②B超检查子宫宫腔内存在空孕囊、可见胚芽或者可见胚胎样组织，同时无胎心搏动或者检测到胎心搏动但随之消失；③人绒毛膜促性腺激素(hCG)血尿样本检测为阳性。④同意参与本研究。

排除标准：①妊娠合并糖尿病；②妊娠合并高血压；③参与本研究同期参与其他研究。

1.2 设备与试剂

Leica Microsystems GSL120显微镜（德国）；50 ml/25 cm2培养瓶（美国Corning）；5mLCHANGMEDIUMDR培养基（美国）；HE RAcell二氧化碳培养箱（德国）羊水细胞完全培养基（以色列BiologicalIndustries）；0.25%的胰蛋白酶-EDTA消化液（上海慧颖生物科技有限公司）等。

1.3 方法

清宫术实施同时采集部分绒毛组织，放置到无菌器皿中，由护士送往实验室。在超净工作台中使用生理盐水冲洗采集的绒毛组织血块。选取形态良好的绒毛支，用无菌剪将其剪为糊状，存储在2瓶中，分别接种到5 mL CHANGMEDIUMDR培养基内培养7 d，控制温度始终为37℃，采用倒置显微镜研究细胞生长情况，如若存在大量绒毛细胞呈纤维状态生长，则予以更换生长液，在生长旺盛时收纳细胞，以G显带制片，进行核型分析[2]。

细胞收纳过程中，将秋水仙素作用时间控制在120 min， 浓度以0.2 μg/mL为宜；将水浴时间控制在50 min，水浴温度控制在37℃；固定液固定次数以3次为宜。

G显带制片过程中，每个样本设置三分，置于75℃条件下180 min，胰蛋白酶-EDTA消化液消化时间不宜过长，以秒为单位，清洗晾干后进行染色。

染色体核型分析过程中，利用显微镜扫描，完成细胞核型、中期分裂相等记录工作，通常情况下，计数20个，核型分析3～5个。

1.4 统计学处理

采用S P S S 2 1.0 研究，分析胚胎停育非正常状态染色体占比，计数资料用x2检验，差异有统计学意义 （P＜0.05）。

2 结 果

2.1 绒毛组织染色体培养结果

供采集120例绒毛组织，其中3例受到污染，1例由于绒毛组织损坏而废除，宣布培养失败，其余116例培养成功，成功率为96.67%（116/120），检测得到核型非正常66例，检出率为56.90%（66/116）。66例异常核型中存在常染色体三体34例，涉及2-6，9-10，13-18，20-22号染色体，其中，16号共计12例，占比最大为35.29%（12/34）。其余如下：常染色体：①单体2例；②双重三体3例。性染色体：①单体12例；②多倍体：15例。

2.2 自然与辅助受孕染色体非正常情况

基于在116例成功培养的样本，包括自然受孕流产83例， 染色体非正常47例，占比56.63（47/83）；辅助生殖受孕流产33，染色体非正常19例，占比57.58%（19/33）。2组染色体情况对比，差异没有统计学意义（x2=0.00，P＞0.05）。

3 讨 论

胚胎停育是临床常见疾病，与胎儿染色体异常存在密切关联性。有研究显示染色体异常导致胚胎停育的概率在50%以上。因此，如何提高染色体异异常检出率，降低染色体异常检测成本，促进染色体异常检测技术在基层医院的推广应用，已经成为相关人员关注与研究的重点问题。在本次研究中，共计培养成功116例，发现非正常核型占比为56.90%，涉及单体、三体等，具体情况为三体34例，涉及2-6，9-10，13-18，20-22号染色体，16号12例（35.29%），占比最大。常染色体中存在单体2例与双重三体3例；性染色体中存在单体12例与多倍体15例。得到本结果的原因多为三体死亡高发期在胚胎期，纵使不死亡也多会导致婴儿出现畸形、智力障碍等并发症[3]。通常情况下，相对于性染色体异常对胚胎发育的影响而言，常染色异常的影响更大。由于16号染色体内含基因更多，因此该染色体对胚胎的影响相对于其他染色体而言，影响更大。16号染色体如若出现问题会导致胚胎快速死亡，致死率极高。所以，在胚胎停育绒毛染色体核型分析可加强16号染色体。在本研究116例成功培养的样本中，存在自然受孕流产83例，染色体非正常47例，占比56.63（47/83）；辅助生殖受孕流产33，染色体非正常19例，占比57.58%（19/33）。2组染色体情况对比，差异无统计学意义（P＞0.05）。该结果与尹婷、郑安舜等学者研究结果一致[4]。表明受孕方式并非是染色体异常导致胚胎停育的危险因素，对于易位携带者，可尝试通过辅助生殖技术提高正常孩子孕育成功率，降低遗传物质异常对胚胎停育的不利影响。

综合来看，自然流产发生率提高，胚胎染色体属于主要因素，但并非导致流产的唯一因素，随着临床研究能力的提升，实验室对此将会展开深入探究，鉴于自然流产高发生率，建议不孕不育医学研究者探究出现胚胎停育的自然妊娠夫妇染色体情况，为遗传学研究提供支持。